高效液相色譜法測定斂肺止咳丸中嗎啡含量

張群芳

斂肺止咳丸是以罌粟殼為主藥制成的醫院制劑，具斂肺、降氣、止咳功效，臨床用于急慢性支氣管炎，療效確切。因標準中無含量測定項，故參閱2010年版《中國藥典(一部)》中高效液相色譜法測定罌粟殼中嗎啡的含量[1]346，筆者建立了高效液相色譜法測定樣品中嗎啡的含量，現報道如下。

1 儀器與試藥

Dionex UltiMate 3000泵，Dionex UltiMate 3000二極管陣列檢測器。嗎啡對照品(批號為171201－200822，105℃干燥1 h后使用，含量為99.8%，中國藥品生物制品檢定所);斂肺止咳丸(批號分別為100610，100915，100828，荊門市第一人民醫院);水為純化水，乙腈、甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:Kromasil C8柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈－0.01 mol/L磷酸氫二鉀溶液－0.005 mol/L庚烷磺酸鈉(24∶38 ∶38);檢測波長:220 nm;流速:1.0 mL/min;柱溫:30 ℃;進樣量:10μL。

2.2 溶液制備

精密稱取嗎啡對照品12.64 mg，置100 mL棕色量瓶中，加甲醇約30 mL，超聲15 min，冷卻，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為嗎啡貯備溶液;精密吸取貯備溶液3 mL，置10 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為對照品溶液。取本品(批號為100610)適量，研細，精密稱取供試品2.0 g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定質量，超聲處理30 min，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，即得供試品溶液。按處方制備工藝制得不含罌粟殼的陰性樣品，同供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

陰性干擾試驗:精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液各10μL，分別注入高效液相色譜儀測定。結果陰性對照品溶液色譜圖中，未出現與嗎啡對照品保留時間相同的色譜峰，表明陰性樣品對測定無干擾(圖1)。

線性關系考察:取 2.2 項下嗎啡貯備溶液 1，2，3，5 mL，置 10 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為對照品溶液1，2，3，4。取對照品溶液 1，2，3，4和嗎啡貯備溶液各 10μL，進樣。以峰面積(Y)為縱坐標、嗎啡對照品進樣量(X)為橫坐標繪制標準曲線，計算得回歸方程 Y=45.107X －0.339 5，r=0.999 9(n=5)。結果表明，嗎啡進樣量在0.126 1～1.261μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

精密度試驗:精密吸取同一對照品溶液10μL，重復進樣6次，記錄色譜圖。結果嗎啡峰面積的 RSD為 0.4%(n=6)。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，避光放置，分別在0，2，4，6，8，10，16，20，24 h 時測定。結果峰面積的 RSD為1.0%(n=9)，表明供試品溶液避光條件下在24 h內穩定。

重現性試驗:取同一批樣品6份，按供試品溶液制備方法制備，依法測定。結果嗎啡含量的 RSD為 1.6%(n=6)，表明方法重現性良好。

加樣回收試驗:取已知含量(1.40 mg/g，批號為100610)的樣品適量，精密稱定，置具塞錐形瓶中，共9份，分別精密加入2.2項下嗎啡貯備溶液 3.0，3.0，3.0，4.0，4.0，4.0，5.0，5.0，5.0 mL，按供試品溶液制備方法處理，并依法測定含量，計算回收率。結果見表1。

圖1 高效液相色譜圖

2.4 樣品含量測定

取樣品3批，按擬訂的方法分別制備供試品溶液。取供試品溶液、對照品溶液各10μL，在擬訂的色譜條件下進行測定，外標法計算含量。結果批號分別為100610，100915，100828的斂肺止咳丸中，嗎啡的含量分別為 1.40，1.65，1.07 mg/g。

表1 嗎啡加樣回收試驗結果(n=9)

3 討論

斂肺止咳丸是醫院制劑，臨床試驗證明其安全、有效。方中罌粟殼斂肺、澀腸、止痛，為君藥。筆者以罌粟殼中嗎啡為質量控制指標，采用高效液相色譜法測定制劑中嗎啡含量。曾比較了樣品分別超聲處理20，30，40 min，結果30 min與40 min超聲處理結果無明顯差異，故選用超聲處理30 min;分別試驗了采用C18柱，以0.05 mol/L 磷酸二氫鉀溶液 － 乙腈(90 ∶10)[2]，乙腈 －0.1%磷酸溶液(15∶85，每100 mL中加庚烷磺酸鈉0.1 g)[1]411為流動相，結果不對稱因子較大。而采用C8柱，乙腈－0.01 mol/L磷酸氫二鉀溶液－0.005 mol/L庚烷磺酸鈉(24∶38∶38)為流動相，分離效果良好且保留時間也相宜，可用于控制斂肺止咳丸的質量。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫藥科技出版社，2010.

[2]WS3－393(Z－049)－2004(Z)，國家藥品標準·新藥轉正標準第63冊[S].