替硝唑螺內酯乳膏的急性毒性試驗＊

唐志立，彭賢東，譚正懷，龍 鳳，張浩玲

替硝唑螺內酯乳膏系四川省南充市中心醫院自行研制的一種外用制劑，是以替硝唑、螺內酯為主要成分的水包油型乳膏劑[1]。替硝唑陰道泡騰片、復方替硝唑栓劑的急性毒性已有研究[2－3]，復方螺內酯乳膏治療尋常痤瘡的臨床療效也有報道[4]，但替硝唑、螺內酯聯合外用治療痤瘡的毒性研究，國內外尚未見相關報道。為評價替硝唑螺內酯乳膏的用藥安全性，筆者對其進行了急性毒性試驗，現報道如下。

1 材料

1.1 藥物

替硝唑原料藥(浙江蘇泊爾制藥有限公司，批號為20091201);螺內酯原料藥(浙江新華制藥有限公司，批號為OT00N100610);替硝唑螺內酯乳膏(自制，為乳白色乳膏，每100 g乳膏含替硝唑2.0 g，螺內酯0.3 g，批號為100628);替硝唑螺內酯乳膏賦形劑(自制，批號為100628);替硝唑+螺內酯混合物(按替硝唑原藥20%+螺內酯原藥0.3%的比例配成所需濃度的混合液，備用);15倍臨床濃度替硝唑螺內酯乳膏(淺黃色乳膏，每100 g乳膏含替硝唑30 g、螺內酯4.5 g，批號為100628);30倍臨床濃度替硝唑螺內酯乳膏(淺黃色乳膏，每100 g乳膏含替硝唑60 g，螺內酯9.0 g，批號為100628)。

1.2 動物

昆明種小鼠，50只，雌雄各半，體重18～21 g，SPF級動物，生產合格證號為SCXK(川)2008－19號;SD大鼠70只，雌雄各半，體重180～330 g，SPF級動物，生產合格證號為 SCXK(川)2008－19號。均由四川省中醫藥科學院實驗動物中心提供。

2 方法與結果

2.1 小鼠口服給藥的急性毒性試驗

2.1.1 方法

按替硝唑20%、螺內酯0.3%的比例制成替硝唑螺內酯混合物溶液備用。將動物隨機分為5組，分別按每1 kg體重一次性灌胃給予替硝唑螺內酯混合物 1.12，1.49，1.98，2.64，3.50 g，觀察給藥后14 d內動物的中毒情況和死亡情況。

2.1.2 結果

給藥后10 min左右，小鼠陸續出現運動減少，繼而出現運動不協調、震顫，并出現呼吸急促、陣攣性抽搐，部分動物因咬傷口腔或舌而出現口角流血。多數動物在給藥后出現趴伏、呼吸急促，嚴重者出現抽搐。給藥后約半小時，逐漸有動物死亡，多數死亡動物在給藥后4 h出現，存活動物則逐漸恢復。給藥后14 d內動物的中毒情況和死亡情況見表1。解剖死亡動物尸體，觀察其主要臟器，未見明顯異常。運用Bliss法計算半數致死量(LD50)，采用回歸方程 Y=1.563 8+14.625 log D，計算得小鼠口服混合物的 LD50為 1.717 7 g/kg。結果見表 2。

表1 口服替硝唑螺內酯混合物急性毒性試驗小鼠死亡時間分布(只)

2.2 大鼠皮膚給藥的急性毒性試驗

2.2.1 分組

取健康SD大鼠70只，雌雄各半，試驗前將大鼠背部脊柱兩側剪毛后，用8%硫化鋇脫毛，每側脫毛區大小約為5 cm×4 cm。脫毛后24 h禁食不禁水，16 h后隨機將動物均分為7組，再隨機選其中4組動物，脫毛區皮膚用消毒刀片做“井”字劃破至輕度滲血為度，作為破損皮膚組，余下3組即為完整皮膚組。

表2 Bliss法計算的 LD50

2.2.2 給藥

3個完整皮膚組分別在脫毛區涂敷0.115 g/kg替硝唑螺內酯乳膏、15倍臨床濃度替硝唑螺內酯乳膏1.725 g/kg、30倍臨床濃度替硝唑螺內酯乳膏3.45 g/kg;4個破損皮膚組同樣在脫毛區涂敷替硝唑螺內酯乳膏0.115 g/kg、15倍臨床濃度替硝唑螺內酯乳膏1.725 g/kg、30倍臨床濃度替硝唑螺內酯乳膏3.45 g/kg和替硝唑螺內酯乳膏賦形劑每100 g體重0.5 mL。給藥后用紗布固定以保持藥物與皮膚接觸，24 h后用溫水洗去殘留藥物。

2.2.3 觀察

逐日觀察動物的全身反應情況，連續觀察14 d，觀察大鼠的行為活動、呼吸、毛發、食欲、體重、眼睛和黏膜等有無異常，記錄毒性表現。若有死亡則記錄各組死亡動物數，檢查死亡動物各臟器，如有肉眼可見的病變則作病理學檢查。試驗結束時，放血處死動物，取心、肝、脾、肺、腎等主要臟器稱濕重并計算其臟器指數。

2.2.4 結果

涂抹給藥后，大鼠未見異常反應，飲食、大小便、活動均正常，無分泌物增加等表現。去除藥物后，局部皮膚顏色正常，未見刺激反應，14 d內無動物死亡。各給藥組動物未出現中毒反應。對完整皮膚和破損皮膚各劑量組用藥前、用藥后7 d和14 d稱重，結果見表3。可見，各劑量替硝唑螺內酯乳膏對完整皮膚和破損皮膚大鼠的體重無明顯影響，與賦形劑組比較差異無統計學意義(P＞0.05)。大鼠用藥后觀察14 d處死，解剖肉眼觀察各組動物的心、肝、脾、肺、腎，均無明顯影響，與賦形劑組比較差異無統計學意義，結果見表4。

表3 替硝唑螺內酯乳膏對大鼠體重的影響(X ± s，n=10)

3 討論

本試驗結果表明，口服替硝唑螺內酯混合物對小鼠有一定的急性毒性作用，測得其 LD50為1.7177g/kg，但替硝唑螺內酯乳膏經皮膚給藥對完整皮膚或破損皮膚大鼠均無明顯急性毒性作用，提示用藥濃度比相當于臨床用濃度15倍低時是安全的。

表4 替硝唑螺內酯乳膏對大鼠臟器指數的影響(X ± s，n=10)

使用替硝唑會出現胃腸道反應、中樞神經系統反應、過敏反應、雙硫侖樣反應等不良反應，螺內酯常見有高鉀血癥、胃腸道反應等不良反應[5]，二者聯合口服，會加重不良反應的發生。從小鼠口服替硝唑螺內酯混合物所觀察到的癥狀與兩藥的不良反應基本一致，說明口服替硝唑螺內酯對小鼠有一定的急性毒性。

對于大鼠的完整皮膚和破損皮膚，使用替硝唑螺內酯乳膏不同劑量后逐日觀察，均未出現中毒反應，說明皮膚給藥是安全的。經皮給一次性予替硝唑螺內酯乳膏對完整皮膚和破損皮膚大鼠的心、肝、脾、肺以及腎臟的臟器指數均無明顯影響，與賦形劑組比較差異無統計學意義，說明經皮給藥對大鼠的內臟無影響。

綜上所述，選擇可抑制皮脂腺分泌的藥物螺內酯和可殺滅痤瘡丙酸桿菌、卵圓形糠秕孢子菌的替硝唑，將二者聯合制成外用乳膏劑，通過動物實驗，證明外用無明顯急性毒性作用，為臨床安全用藥提供了依據。

[1]彭賢東，唐志立，龍 鳳，等.替硝唑螺內酯乳膏的制備及質量控制[J].中國藥業，2010，19(5):34 －36.

[2]張曉雙，王文會.替硝唑陰道泡騰片急性毒性黏膜刺激與過敏性實驗研究[J].西北藥學雜志，2010，25(2):117 －118.

[3]王雪晴，王 震，朱興平，等.復方替硝唑栓劑的毒理學研究[J].中國藥業，2006，15(18):18.

[4]揣瑞梅，張玉珍，吳汝英.復方螺內酯乳膏治療尋常痤瘡86例[J].醫藥導報，2003，22(S1):24.

[5]衛生部合理用藥專家委員會.中國醫師藥師臨床用藥指南[M].重慶:重慶出版社，2009:217，1 037.