高效液相色譜法測定小兒肺熱平膠囊中黃芩苷含量

徐 虹

小兒肺熱平膠囊主要由平貝母、黃連、柴胡、黃芩、射干等藥味組方，具有清熱化痰、止咳平喘的功效[1]。方中黃芩所含黃芩苷具有清熱、解毒、抗炎等作用[2]。為有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，筆者應(yīng)用高效液相色譜法測定產(chǎn)品中黃芩苷的含量，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀;USC－202型超聲處理器(上海波龍電子設(shè)備有限公司)。黃芩苷對照品(批號為110715－200212，中國藥品生物制品檢定所);小兒肺熱平膠囊(批號分別為20080101，20080301，20080601，吉林省大俊藥業(yè)股份有限公司);流動相用甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Zorbax SB－C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm);流動相:甲醇 － 水 －冰醋酸(46∶54∶1);流速:1.0 mL/min;柱溫:20℃;檢測波長:274 nm[3]407;進樣量:10μL。理論板數(shù)以黃芩苷峰計算應(yīng)不低于4 000。

2.2 溶液制備

精密稱取黃芩苷對照品12.52 mg，加50%甲醇[3]407制成每1 mL含黃芩苷25.04μg的溶液，即得對照品溶液。取裝量差異項下的本品，研細，取約0.5 g，精密稱定，置100 mL具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min(功率80 W，頻率40 kHz)，放冷，再稱定質(zhì)量，用50%甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液用0.45μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。按處方比例和供試品溶液制備方法制成不含黃芩的陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗:分別吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各10μL，按照上述色譜條件進行測定。結(jié)果供試品溶液色譜中在與對照品溶液色譜保留時間相同的位置上有色譜峰，而陰性對照品溶液色譜在相同的位置上無色譜峰(見圖1)。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密吸取對照品溶液 4，8，12，16，20 μL，在上述條件下測定峰面積，以進樣量(X)與峰面積(Y)作標準曲線，計算得回歸方程 Y=78.577X+0.373，r=0.999 8(n=5)，結(jié)果表明，黃芩苷進樣量在0.100 2～0.500 8μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗:精密吸取黃芩苷對照品溶液10μL，重復(fù)進樣6次。結(jié)果峰面積的 RSD為1.5%(n=6)。

重復(fù)性試驗:取同批樣品(批號為20080601)，平行6份，依法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定。結(jié)果黃芩苷含量的 RSD為 0.79%(n=6)。

穩(wěn)定性試驗:取同一供試品溶液，分別在 0.5，2，4，6，8 h 時測定。結(jié)果的 RSD為1.6%(n=5)，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗:取已知含量的樣品(批號為20080601，含量為1.045 7 mg/g)，分別精密加入黃芩苷對照品溶液(0.025 04 g/L)適量，按供試品溶液制備方法制備溶液并測定含量，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 黃芩苷加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定

取3批樣品，按供試品溶液制備方法操作，按2.1項下色譜條件進樣，記錄色譜圖并用外標法計算含量。結(jié)果批號為20080101，20080301，20080601的3批樣品中黃芩苷含量分別為 1.181 2，0.945 0，1.045 7 mg/g。

3 討論

曾分別采用加熱回流[3]212及超聲(40 kHz，80 W)各30 min提取本品，結(jié)果兩者沒有顯著性差別，根據(jù)檢驗快速、簡便、準確的原則，選擇超聲法作為供試品溶液的制備方法。另外分別用70%乙醇和50%甲醇提取本品，發(fā)現(xiàn)50%甲醇提取效果好于70%乙醇[2]，故選擇50%甲醇作為提取溶劑。

分別采用色譜柱 Zorbax SB－C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm)和 Zorbax Extend C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm)進行試驗，發(fā)現(xiàn)在甲醇－水－冰醋酸(46∶54∶1)比例下，Zorbax SB－C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm)分離度較好，保留時間適中，故選擇此色譜柱。

試驗中考察了流動相甲醇－水－冰醋酸(50∶50∶1)、乙腈－0.2%磷酸溶液(20∶80)、甲醇 －水 －冰醋酸(46 ∶54∶1)對供試品預(yù)測定峰分離度的影響[4－5]，其中流動相甲醇－水－冰醋酸(46∶54∶1)分離度好，保留時間適中。供試品預(yù)測定峰出峰后到60 min內(nèi)有較多雜質(zhì)峰，為了不干擾樣品測定，故采用了梯度洗脫的方法。

[1]WS3－B－1490－93，衛(wèi)生部藥品標準·中藥成方制劑(第八冊)[S].

[2]羅定強，王錫領(lǐng)，呂 卓，等.金嗓清音丸質(zhì)量標準研究[J].醫(yī)藥導(dǎo)報，2009，28(5):653 －654.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業(yè)出版社，2005.

[4]崔 嵐，安富榮，夏玲紅.反相高效液相色譜法測定舒肝祛脂膠囊黃芩苷含量[J].醫(yī)藥導(dǎo)報，2007，26(11):1 363 － 1 364.

[5]顧云燕，葛衛(wèi)紅.高效液相色譜法測定女金膠囊中黃芩苷的含量[J].醫(yī)藥導(dǎo)報，2008，27(2):233 －234.