反相高效液相色譜法測定羚貝止咳糖漿中橙皮苷含量

胡安青

羚貝止咳糖漿由紫菀(蜜)、茯苓、麻黃、知母、金銀花、陳皮、半夏(姜)、前胡、遠志(制)、平貝母、罌粟殼、山楂、羚羊角等13種中藥組方，能宣肺化痰、止咳平喘，用于治療小兒肺熱咳嗽及痰濕咳嗽。方中陳皮為蕓香科植物橘 Citrusreticulata Blanco及其栽培變種的干燥成熟果皮，能理氣健脾、燥濕化痰，用于胸脘脹滿、食少吐瀉、咳嗽痰多。橙皮苷為陳皮的主要有效成分。筆者用反相高效液相色譜(RP－HPLC)法測定羚貝止咳糖漿中橙皮苷含量，方法簡便、快速、重現性好，可用于產品的質量控制。

1 儀器與試藥

AG135型電子天平(瑞士梅特勒);紫分光光度計(日本島津);2695型高效液相色譜儀(美國Waters)。橙皮苷(C28H34O15)對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110721－200613);甲醇(色譜純)，水(純化水);羚貝止咳糖漿(吉林某制藥股分有限公司，批號分別為 20100302，20080902，20090405)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:Zorbax－C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm);流動相[1]:甲醇 －醋酸 －水 (35∶4∶61);流速:1.0 mL/min;柱溫:30℃;進樣量:10μL;檢測波長:283 nm。理論塔板數按橙皮苷計為4 285。

2.2 溶液制備

精密稱取橙皮苷對照品16.80 mg，置20 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成對照品貯備液(每1 mL含橙皮苷840.0μg);再精密量取對照品貯備液5 mL置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，得橙皮苷對照品溶液(每1 mL含橙皮苷420.0μg)。取樣品5支，精密量取20 mL，置水浴上蒸至近干，用適量硅藻土拌成松散狀，加甲醇50 mL，超聲處理20 min，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續濾液即得供試品溶液。取不含陳皮的陰性樣品，同法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

空白干擾試驗:按處方比例稱取除陳皮外的其他藥味，按制備工藝制成陰性樣品，依法進樣分析。結果主成分出峰處無干擾。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

標準曲線繪制:分別精密量取橙皮苷對照品貯備液(840.0μg/mL)1，3，5，7，10 mL，置 10 mL 容量瓶中，定容，搖勻，進樣分析。以峰面積(Y)為縱坐標、相應質量濃度(X)為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程 Y=694.204 X+0.156，r=0.999 9(n=5)。結果表明，橙皮苷質量濃度在84.0～840.0μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗:取同一橙皮苷對照品溶液，重復進樣5次，記錄峰面積。結果的 RSD為1.0%(n=5)。

重復性試驗:取樣品1批，依法測定其橙皮苷含量。結果平均含量為 0.37 mg/支，RSD 為 0.6%(n=5)。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，室溫放置10 h，每隔一段時間進樣1次，記錄峰面積。結果橙皮苷峰面積平均值為3 471，RSD為 0.3%(n=5)。

加樣回收試驗:取6份已知含量的樣品(批號為0810013)10 mL，依法制備供試品溶液，精密加入橙皮苷對照品適量，測定含量，計算回收率。結果見表1。

表1 橙皮苷加樣回收試驗結果(n=6)

2.4 樣品含量測定

取供試品溶液和對照品溶液，各進樣5μL，讀取峰面積值，按外標法計算含量。結果批號為0810013，070516，070518的樣品中橙皮苷含量分別為 0.37，0.36，0.38 mg/支(n=3)。

3 討論

試驗表明，橙皮苷在283 nm波長處有較大吸收，其他成分在該波長處無干擾，因此可選擇此波長作為檢測波長。

通過試驗，確定了羚貝止咳糖漿中橙皮苷的含量測定方法。該法簡便、可靠，為羚貝止咳糖漿的質量控制提供了依據。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業出版社，2005:132.