參萸清眩膏薄層色譜鑒別

左艷敏 吳振英 王筱婧

參萸清眩膏為本院制劑，是由黨參、熟地黃、枸杞子、山茱萸等100多味中藥加蜂蜜研制而成，主要治療美尼爾氏病、美尼爾氏綜合癥以及多種原因引起的眩暈癥。本實(shí)驗(yàn)采用薄層色譜法，對(duì)參萸清眩膏中的主要組成藥物山茱萸、肉蓯蓉、枸杞子、黨參等進(jìn)行了定性鑒別，為其質(zhì)量控制提供依據(jù)。現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)道如下。

儀器與試劑

JA2003N型電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司天平儀器廠(chǎng));HG71-A型電子烘干箱(北京試驗(yàn)設(shè)備廠(chǎng));W-105微量進(jìn)樣器(上海醫(yī)用激光儀器廠(chǎng));ZF-2型三用紫外線(xiàn)分析儀(上海安亭電子儀器廠(chǎng));薄層硅膠 G 板(100 mm ×200 mm，厚度0．20～0．25 mm(青島海洋化工廠(chǎng));參萸清眩膏(自制:批號(hào)20110409);對(duì)照藥材山茱萸、肉蓯蓉、枸杞子、黨參(中國(guó)藥品生物制品檢定所);所用化學(xué)試劑均為分析純。

方法與結(jié)果

1．山茱萸的鑒別取參萸清眩膏20 ml，加乙酸乙酯30 ml，振搖提取并超聲處理30分鐘，濾過(guò)或離心分離，取乙酸乙酯層，蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇1 ml溶解，作為供試品溶液。另精密稱(chēng)取山茱萸對(duì)照藥材2 g，剪碎，加乙酸乙酯20 ml，振搖提取并超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，加無(wú)水乙醇1 ml溶解，作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法［1］實(shí)驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各8μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20∶4∶0．5)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干。噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紫紅色斑點(diǎn)，置紫外光燈(365 nm)下檢視，顯橙黃色熒光斑點(diǎn)，如圖1所示。

2．肉蓯蓉的鑒別

取參萸清眩膏20 ml，加乙醇20～30 ml，加熱回流20分鐘，濾過(guò)，濾液加鹽酸2 ml，再加熱回流30分鐘，取該液濃縮至5 ml，加水10 ml稀釋?zhuān)檬兔?0 ml，充分振搖提取，分取提取液(必要時(shí)離心分取)，蒸干，殘?jiān)右掖? ml溶解，作為供試品溶液。另取肉蓯蓉對(duì)照藥材2 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法實(shí)驗(yàn)［1］，取供試品溶液 15μl，對(duì)照藥材溶液10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G 板上，以氯仿-甲醇(40∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干。置紫外光燈下(365 nm)檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上(距離點(diǎn)樣點(diǎn)約25 mm)，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)(淡綠色);噴以磷鉬酸試液，在110℃加熱后，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上(距離點(diǎn)樣點(diǎn)約120 mm和140 mm)，呈現(xiàn)黑綠色斑點(diǎn)，如圖2所示。

3．枸杞子的鑒別

取參萸清眩膏20 ml，加水20 ml，振搖稀釋?zhuān)靡颐?0 ml充分振搖提取，離心分取乙醚層，揮干，殘?jiān)靡宜嵋阴? ml溶解，作為供試品溶液。另取枸杞子對(duì)照藥材2 g，剪碎，用乙醚20 ml充分振搖提取，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)靡宜嵋阴? ml溶解，作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法實(shí)驗(yàn)［1］，取供試品溶液及對(duì)照藥材溶液各10 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，以乙酸乙酯-氯仿-甲酸(3∶2∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干。置紫外光燈下(365 nm)檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上顯櫻桃紅色的熒光斑點(diǎn)，如圖3所示。

4．黨參的鑒別

取參萸清眩膏20 ml，溫?zé)岷蠹铀?0 ml稀釋?zhuān)诱和?0 ml，充分振搖提取1小時(shí)，或超聲處理20分鐘，分取正己烷，揮干，加甲醇0．5 ml溶解，作為供試品溶液。另取黨參對(duì)照藥材2 g，剪碎，加正己烷15 ml，振搖提取1小時(shí)，或超聲處理20分鐘，濾過(guò)，濾液揮干，加甲醇0．5 ml溶解，作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法實(shí)驗(yàn)［1］，取兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-氯仿-甲酸(3∶2∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干。置紫外光燈(365 nm)下檢視，供試品色譜中在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上顯淡黃色熒光斑點(diǎn)，如圖4所示。

討 論

參萸清眩膏為煎膏劑。在鑒別方法上，除各藥之間的相互干擾外，此劑型中含有大量蜂蜜干擾較大，故進(jìn)行薄層實(shí)驗(yàn)比較困難。關(guān)鍵問(wèn)題是提取劑的選擇，要求即能提取有關(guān)成分，又便于分離出來(lái)。

中國(guó)藥典2000年版一部中關(guān)于枸杞子藥材的薄層鑒別法［2］為水煮后用乙酸乙酯提取，濃縮后作為供試品溶液，照此法，本制劑因系煎膏劑而致使提取過(guò)程中難以實(shí)現(xiàn)分離，僅可獲得少量供試品溶液，經(jīng)點(diǎn)樣，展開(kāi)后無(wú)明顯的色譜特征，無(wú)法與對(duì)照藥材色譜比較。以乙醇作為提取劑，結(jié)果供試品溶液和對(duì)照藥材溶液均未顯色，置紫外光燈下也無(wú)熒光。以氯仿為提取劑，檢品與氯仿提取后分離較困難，同樣醋酸乙酯溶解后展開(kāi)，結(jié)果檢品溶液色譜無(wú)明顯特征。對(duì)照藥材溶液色譜中只顯不規(guī)則的黃色斑點(diǎn)，無(wú)法比較。改用乙醚為提取劑后，供試品溶液的色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜的相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)。其斑點(diǎn)特征為:在自然光下為兩個(gè)相同的乳白色斑點(diǎn)，在自然光透視時(shí)為兩個(gè)相同的深灰色斑點(diǎn)，在紫外燈光下檢視為兩個(gè)相同的櫻桃紅色斑點(diǎn)。兩者的色譜特征完全一致，Rf值相近分別為(1．00:0．996)，且陰性對(duì)照無(wú)干擾。

參萸清眩膏為復(fù)方制劑，成分較為復(fù)雜，用薄層色譜法對(duì)方中主要藥物進(jìn)行定性鑒別，斑點(diǎn)清晰，準(zhǔn)確可靠，結(jié)果重現(xiàn)性良好，可為參萸清眩膏制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

圖1、山茱萸的薄層鑒別圖譜

圖2、肉蓯蓉的薄層鑒別圖譜

圖3、枸杞子的薄層鑒別圖

1 國(guó)家藥典委員會(huì)．中國(guó)藥典·一部［M］．北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:附錄ⅥB．

2 國(guó)家藥典委員會(huì)．中國(guó)藥典·一部［M］．北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005．