HPLC測定天麻鉤藤飲中天麻素和松脂醇二葡萄糖苷的含量

司 娜 劉 文 宋信莉 徐 劍 陳龍富

貴陽中醫學院，貴州 貴陽 550002

天麻鉤藤飲出自《雜病證治新義》，具有平肝潛陽、補益肝腎、清熱活血的作用，是中醫治療肝陽上亢的經典代表方。六版《中醫診斷學》定義肝陽上亢為“由于肝腎陰虧，肝陽擾于上所表現的上實下虛癥候。”陰虛陽亢確實反映了高血壓病的主要病理基礎［1］。

有報道［2－3］稱，杜仲的有效降壓成分有木質素類的成分松脂醇二葡萄糖苷。天麻鉤藤飲中天麻和杜仲兩味藥的主要有效的降壓成分是天麻素和松脂醇二葡萄糖苷。本實驗采用HPLC法同時測定天麻鉤藤飲復方中兩個有效降壓成分的含量，方法簡捷穩定，為天麻鉤藤飲復方的質量控制提供了檢測方法。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀 (日本島津LC－20AT，檢測器:SPD－20A檢測器)，電子天平 (日本島津AUY220)，JA2003型電子天平 (上海良平儀器儀表有限公司)。

乙腈為色譜純 (TEDIA COMPANY．INC);磷酸、乙醇為分析純 (重慶川東化工有限公司);水為純凈水 (杭州娃哈哈有限公司)。天麻素、松脂醇二葡萄糖苷對照品 (中國藥品生物制品檢定所，批號分別為110807－200205和111537－200502，供含量測定用)。藥材均為市售 (據2010年版《中國藥典》一部各品種項下要求進行檢測，為正品)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱為Inertsil ODS－3分析柱 (250mm×4.6mm，5μm)，流動相:乙腈 (A):0.2%磷酸水(B)，梯度洗脫 (A－B=2:98保持20min，20－22min，A－B=2:98－11:89);流速1.2ml/min;檢測波長220nm;柱溫30℃;進樣體積10μL;理論板數:天麻素不低于5000，松脂醇二葡萄糖苷不低于10000。在此條件下，樣品分離度良好。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取天麻素對照品4.83mg，松脂醇二葡萄糖苷對照品1.53mg置25mL容量瓶中，以流動相溶解并稀釋至刻度，作為混合對照品溶液 (天麻素:0.1932mg/mL;松脂醇二葡萄糖苷:0.0612mg/mL)。精密稱取天麻素對照品1.54mg，置10ml容量瓶中，以流動相溶解并稀釋至刻度，作為天麻素的對照品溶液 (0.154mg/mL)。另精密稱取松脂醇二葡萄糖苷對照品1.04mg，置10mL容量瓶中，以流動相溶解并稀釋至刻度，作為松脂醇二葡萄糖苷對照品溶液 (0.104mg/mL)。

2.3 供試品溶液的制備 按處方量稱取復方12味藥 (鉤藤后下)，12倍水煎煮三次，每次30min，合并水提液濃縮，置真空干燥箱里干燥得干浸膏，將干浸膏打粉并過100目篩。稱取浸膏粉1g，精密稱定，加入稀乙醇50mL稱重，加熱回流3小時，放冷補重，過濾取續濾液10mL揮干，以流動相溶解并轉移至10mL容量瓶中，定容得供試品溶液。

2.4 線性關系考察 精密吸取混合對照品液1、2、5、8、10mL，分別置10mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，制成系列混合對照品液。按2.1色譜條件，各精密吸取10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積A為縱坐標，對照品溶液濃度為橫坐標，繪制標準曲線，得天麻素回歸方程為:y=15018746x+29741;r=0.9997，線性范圍為19.3－193.2 μg/mL;松脂醇二葡萄糖苷回歸方程為:y=10990200x+4315，r=0.9999，線性范圍為 6.12－61.2μg/mL。

2.5 精密度考察 取上述混合對照品，按2.1色譜條件重復進樣6次，分別測定峰面積積分值，結果天麻素和松脂醇二葡萄糖苷的RSD分別為0.95%和1.15%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩定性試驗 取同一份供試樣品溶液分別在配制后0、2、6、12、24h進樣10μL，記錄峰面積積分值，結果天麻素峰面積的RSD為0.79%，松脂醇二葡萄糖苷峰面積的RSD為2.43%，表明供試品溶液在24h內穩定。

2.7 重復性試驗 取某一批供試品6份，按提取方法提取測定，計算其質量分數，天麻素和松脂醇二葡萄糖苷的RSD分別為1.56%和2.59%。

表1 回收率實驗結果

2.8 加樣回收率試驗 平行取同一批供試品 (天麻素0.606%，松脂醇二葡萄糖苷0.0078%)粉末6份，每份1g，精密稱定，分別加入對照品 (天麻素0.193mg/mL，松脂醇二葡萄糖苷0.0612mg/mL)0.2mL，按樣品測定方法進行測定，計算天麻素和麻松脂醇二葡萄糖苷的回收率，結果見表1。

2.9 樣品的測定 按處方稱取天麻鉤藤飲處方3份，按2.3項下方法制備得3份供試品溶液。分別進樣10μL，測得天麻素和松脂醇二葡萄糖苷的峰面積，計算質量分數，結果見表2。

表2 3批樣品測定結果

3 討論

3.1 在樣品檢測波長的選擇上，供試品色譜圖中的天麻素和松脂醇二葡萄糖苷色譜峰的紫外光譜與對照一致，均在220nm處有最大吸收，故確定檢測波長為220nm。

3.2 在樣品提取方法選擇上，分別選擇了稀乙醇加熱回流提取3h，60%甲醇回流提取1h后氯仿萃取3次，超聲40分鐘，50%甲醇回流1h，氯仿索氏提取6h后甲醇索提6h等多種方法，對各方法制得的供試品溶液進行檢測，結果表明稀乙醇回流提取3h，天麻素和松脂醇二葡萄糖苷的含量最高，且得到的圖譜峰型良好。

3.3 在流動相的選擇上，分別選擇了乙腈－0.5%甲酸，乙腈－0.1%磷酸，甲醇－水，乙腈－水等流動相系統，最終選擇乙腈－0.2%磷酸溶液為流動相，以梯度洗脫法將待測的兩個成分與雜質分離，并得到較好的峰型。

3.4 本實驗首次將天麻素和松脂醇二葡萄糖苷作為天麻鉤藤飲復方的含量測定指標，方法簡便，準確可行。填補了單一指標成分作為復方質量控制手段的不足，提升了天麻鉤藤飲復方質量的控制方法。

［1］胡世云．天麻鉤藤飲治療高血壓的研究進展［J］．時珍國醫國藥，2002，13(5):307．

［2］羅麗芳，吳衛華，歐陽東生，等．杜仲的降壓成分及降壓機制［J］．中草藥，2006，37(1):150－152．

［3］江春艷，許激揚，卞筱泓，等．杜仲降血壓成分的組合及血管舒張作用［J］．中國實驗方劑學雜志，2010，16(6):218－220．