Twist在乳腺癌中的表達及其臨床病理意義

沈陽醫學院奉天醫院病理科(110024) 孫 虓 白 陽 王 星 王翠芳

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，造成乳腺癌患者死亡的根本原因并不是原發癌的生長，而是腫瘤的轉移。近期研究顯示，轉錄因子Twist在腫瘤發生、發展和轉移等方面起著重要的作用。我們采用免疫組織化學法檢測乳腺組織中Twist的表達情況，探討其在乳腺癌癌變過程中的意義，以期為乳腺癌治療開辟新途徑。

1 資料與方法

1.1 一般資料 沈陽醫學院奉天醫院2007年1月至2010年1月女性乳腺手術標本共120例。年齡31～74歲，平均48.53歲。依據WHO2003年乳腺腫瘤組織學分類標準進行分類，其中浸潤性導管癌60例，導管不典型增生40例(輕度、中度14例，重度及原位癌26例)，普通導管增生20例。所有病例術前均未做化療、免疫及放射治療。

1.2 主要試劑與方法 鼠抗人Twist單克隆抗體(H-81，SC15393)購自 Santa Cruz公司，SP試劑盒及AEC顯色劑均購自福州邁新生物技術開發有限公司。乳腺癌標本經10%甲醛固定、石蠟包埋，4μm厚連續切片。本研究采用SP法進行免疫組化染色，Twist單克隆抗體濃度為1∶200，具體步驟按說明書進行。用已知組織表達抗體作陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 結果判斷 Twist陽性染色主要位于細胞漿中，少數細胞核中亦有表達。結果判斷采用Fromowitz[1]的陽性細胞半定量分級法。

1.4 統計學分析 應用SPSS13.0軟件進行Χ2檢驗或Fisher確切概率法，P＜0.05為差異有顯著性。

2 結果

免疫組織化學SP法結果顯示，Twist表達主要定位于乳腺組織的細胞漿。Twist在乳腺普通導管增生(10.0%)、輕度、中度不典型導管增生(14.29%)、重度不典型增生及導管原位癌(38.46%)、浸潤性導管癌(58.33%)中呈遞增趨勢。乳腺普通導管增生與重度不典型增生及原位癌比較，重度不典型增生及原位癌與浸潤性導管癌比較，Twist陽性表達的差異均有顯著性，P ＜0.05。見圖1。

60例浸潤性導管癌中Twist陽性表達與患者的年齡、腫瘤大小無相關性，與組織學分級(Χ2=5.487，P=0.019)、臨床分期(Χ2=6.334，P=0.012)和淋巴結轉移有關(Χ2=6.459，P=0.011)，見表1。

表1 乳腺癌組織中Twist的表達及其與臨床病理因素的關系

3 討論

Rosivatz[2]和 Stasinopoulos[3]的研究結果表明，Twist能通過抑制細胞分化、干預P53腫瘤抑制基因通路、誘導上皮-間質轉變等在腫瘤的侵襲和進展中發揮重要作用。Hoek[4]和 Kyo[5]的研究結果表明，Twist過表達與黑色素瘤和子宮內膜癌的預后有關。可見Twist表達在促進細胞增殖、轉化及腫瘤形成中發揮重要作用。我們用免疫組織化學法檢測Twist在乳腺組織中的表達情況，包括浸潤性導管癌60例，導管不典型增生40例(輕度、中度14例，重度及原位癌26例)及普通導管增生20例。結果發現，Twist在乳腺普通導管增生(10.00%)、輕中度不典型導管增生(14.29%)、重度不典型增生及導管原位癌(38.46%)、浸潤性導管癌(58.33%)中呈遞增趨勢。乳腺普通導管增生與重度不典型增生及原位癌比較，重度不典型增生及原位癌與浸潤性導管癌比較，Twist蛋白陽性表達的差異均有顯著性(P均＜0.05)。60例浸潤性導管癌中Twist陽性表達與患者的年齡、腫瘤大小無相關性，與組織學分級(Χ2=5.487，P=0.019)、臨床分期(Χ2=6.334，P=0.012)和淋巴結轉移有關(Χ2=6.459，P=0.011)。迄今已在多種人類上皮來源腫瘤中發現Twist基因表達增高，并與患者預后關系密切。研究證實，Twist對腫瘤細胞的分裂增殖和侵襲性起著重要的調節作用，它可能是引起腫瘤細胞侵襲和轉移的關鍵分子之一。Twist參與了某些上皮來源腫瘤的發生，并促進其侵襲轉移[6]，如前列腺癌[7]、乳腺癌[8]和消化道腫瘤等。Twist基因促進腫瘤發生、發展的機制可能是:1)Twist可作用于P53依賴性和非依賴性通路以及NF-κB通路來調控凋亡，促進腫瘤的形成。2)Twist在轉錄水平上通過影響E-box啟動子的表達，誘導形成EMT[9]，從而抑制E-cadherin的轉錄，使由E-cadherin所調控的細胞黏附作用失效，促進腫瘤轉移[10]。3)Twist上調可增強 VEGF的表達，促進血管生成，提高染色體的不穩定性，促進腫瘤侵襲轉移[11]。Yang 等[12]用裸鼠的乳腺癌模型顯示，Twist蛋白高表達的乳腺癌細胞系容易發生轉移。我們的研究結果表明，Twist陽性表達率在乳腺普通導管增生與重度不典型增生及導管原位癌之間有顯著差異，提示Twist可能在乳腺癌的進展中發揮了一定作用。為進一步探討Twist表達與乳腺癌進展的關系，分析了Twist表達與不同臨床病理特征的關系，結果發現，乳腺癌組織中Twist的陽性表達率為58.33% ，與淋巴結的轉移情況、臨床分期、組織學分級相關，提示Twist參與了乳腺癌的浸潤轉移，與患者的預后密切相關。Twist在乳腺癌中的表達上調，其準確性能尚需深入的研究，但是證實Twist作為胚胎發生中起重要作用的調節分子具有癌基因功能，支持了腫瘤是由于正常發育異常導致的結果。

綜上所述，Twist在乳腺癌癌變過程中可能發揮了重要作用，將其作為靶點將為乳腺癌的治療提供新思路。

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