早期安定干預(yù)對(duì)匹羅卡品誘導(dǎo)顳葉癲癇小鼠學(xué)習(xí)記憶能力變化的影響*

張?jiān)螺x 關(guān)俊文 李永紅 楊天華

(1.攀枝花市中心醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科,四川 攀枝花617067;2.四川大學(xué)華西醫(yī)院神經(jīng)外科,四川 成都610041;3.成都信息工程學(xué)院電子工程學(xué)院,四川 成都610225;4.四川大學(xué)華西醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科,四川 成都610041)

癲癇(Epilepsy)是由多種病因引起的慢性腦功能障礙綜合癥,歷時(shí)短暫,可多次突然發(fā)作,給患者和家庭帶來極大的痛苦[1]。PILO誘導(dǎo)的癲癇動(dòng)物模型是一種比較成熟的顳葉癲癇模型,國(guó)際上廣泛用于顳葉癲癇的研究[2]。而氯化鋰——匹羅卡品腹腔注射所致的小鼠顳葉癲癇,具有操作簡(jiǎn)單、重復(fù)性好、受外界干擾小等優(yōu)點(diǎn)[3]。由于PILO顳葉癲癇小鼠的海馬和杏仁核受損,我們推測(cè)其學(xué)習(xí)記憶功能可能受到損害。但早期安定抑制其點(diǎn)燃效應(yīng)是否影響造模程度及學(xué)習(xí)記憶功能目前未見相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道,本實(shí)驗(yàn)采用氯化鋰——匹羅卡品建立ICR小鼠顳葉癲癇模型,在此基礎(chǔ)之上早期使用安定麻醉干預(yù),運(yùn)用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)系統(tǒng),從行為學(xué)角度探討抑制PILO誘導(dǎo)癲癇的首次點(diǎn)燃對(duì)學(xué)習(xí)記憶能力的影響效果。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物和試劑

選取4周齡清潔級(jí)雄性健康ICR小鼠,由四川省動(dòng)物所提供,生產(chǎn)許可證號(hào):scxk(川)2008—24。試驗(yàn)起始體質(zhì)量(20±5)g。12 h光亮/黑暗條件、22℃～25℃環(huán)境溫度,分籠喂養(yǎng),每籠5只。動(dòng)物管理嚴(yán)格按照中國(guó)衛(wèi)生部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例執(zhí)行。

實(shí)驗(yàn)所用試劑包括:氯化鋰(LiCl)由四川大學(xué)華西醫(yī)院提供,腹腔注射,127 mg·kg-1;阿托品,西南藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn),產(chǎn)品批號(hào):07030008,腹腔注射,10 mg·kg-1;匹羅卡品,由四川大學(xué)華西醫(yī)院提供,腹腔注射,350 mg·kg-1;地西泮(安定),天津金耀氨基酸有限公司生產(chǎn),產(chǎn)品批號(hào):0904141,腹腔注射,10 mg·kg-1。

1.2 方法

ICR小鼠 40只,隨機(jī)分為:癲癇組(A組)、安定麻醉?xiàng)l件下PILO癲癇組(B組)、安定麻醉對(duì)照組(C組)、正常對(duì)照組(D組)(n=10)。

本實(shí)驗(yàn)采用Li-PILO腹腔注射誘發(fā)顳葉癲癇小鼠模型,腹腔注射Li,18～24 h后腹腔注射PILO,PILO注射前0.5 h注射阿托品以阻斷外周膽堿能作用。安定麻醉?xiàng)l件下PILO癲癇實(shí)驗(yàn)組(B組)小鼠于PILO注射前5 min腹腔注射地西泮(安定)10 mg·kg-1,其余條件與癲癇實(shí)驗(yàn)組相同。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用PASWStatistics 18.0(原SPSS)統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,組間比較用單因素方差分析(Analysis of variance,ANOVA)檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

四組小鼠所檢測(cè)的水迷宮潛伏期均數(shù)及相互之間的比較詳細(xì)見表1。隨著小鼠學(xué)習(xí)次數(shù)的增加,各組尋找平臺(tái)潛伏期的時(shí)間均逐漸縮短,平臺(tái)所在的第三象限區(qū)域搜索時(shí)間也有相應(yīng)的改變。安定狀態(tài)下小鼠雖腹腔注射PILO后第一次癲癇發(fā)作程度明顯減弱,但相比對(duì)照組,平臺(tái)搜索的時(shí)間相比對(duì)照組明顯有延長(zhǎng)(P＜0.05)。點(diǎn)燃癲癇前注射了安定麻醉的小鼠組尋找平臺(tái)所需潛伏期與癲癇組相比明顯縮短(P＜0.05)。

3 討論

PILO誘導(dǎo)的癲癇動(dòng)物模型是一種比較成熟的顳葉癲癇模型,在發(fā)作行為腦電圖、癇性放電擴(kuò)散等方面與人類的顳葉癲癇極為相似[5]。

表1 四組小鼠水迷宮潛伏期對(duì)比(±sd,n=10)

表1 四組小鼠水迷宮潛伏期對(duì)比(±sd,n=10)

注:與對(duì)照組(D)相比,#:P＜0.05;與癲癇實(shí)驗(yàn)組(A)相比,*:P＜0.05。

組別 潛伏期(s)癲癇組(A組) 46.75±11.23#安定麻醉?xiàng)l件下PILO癲癇組(B組) 29.83±5.36*安定對(duì)照(C組) 12.39±2.53正常對(duì)照(D組) 10.12±2.74

癲癇發(fā)作(Epileptic seizure)是指腦神經(jīng)元異常和過度超同步化放電所造成的臨床現(xiàn)象。其特征是突然和一過性癥狀,由于異常放電的神經(jīng)元在大腦中的部位不同,而有多種多樣的表現(xiàn)。可以是運(yùn)動(dòng)感覺神經(jīng)或自主神經(jīng)的伴有或不伴有意識(shí)或警覺程度的變化。Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)是一種研究與海馬功能直接相關(guān)的空間學(xué)習(xí)記憶方法,癲癇組較對(duì)照組在水迷宮中尋找到平臺(tái)的潛伏期延長(zhǎng)(P＜0.01)。本實(shí)驗(yàn)在傳統(tǒng)癲癇造模的方法下,新增加了一組實(shí)驗(yàn),即在PILO腹腔注射之前腹腔注射安定麻醉小鼠,希望能抑制由PILO誘導(dǎo)的癲癇發(fā)作,實(shí)際實(shí)驗(yàn)表明,安定麻醉下的小鼠腹腔注射PILO后0.5 h內(nèi)出現(xiàn)口吐白沫,眼珠突出的癥狀,有稍微的抽搐現(xiàn)象,但癥狀不是太明顯。24 h后學(xué)習(xí)記憶實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析表明,該組小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力受到損害,但相比沒有注射安定麻醉組的小鼠潛伏期的延長(zhǎng)程度減輕。因?yàn)閮山M癲癇小鼠第一次發(fā)作情況相差較大,安定麻醉組小鼠基本無大動(dòng)作的發(fā)作癥狀,而未麻醉癲癇組小鼠發(fā)作程度較明顯,故表明PILO誘導(dǎo)癲癇的首次點(diǎn)燃對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶能力有密切聯(lián)系。

1 1賈麗景,王維平,劉瑞春,等.美金剛對(duì)戊四氮致癇大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的影響及其機(jī)制[J].廣東醫(yī)學(xué),2010,31(02):170-172.

2 Antoniadis EA,McDonald RJ,Amygdala,et al.Hippocampus and discriminative fear conditioning to contex t[J].Behav Brain Res,2000,108(1):1-19.

3 Phelps EA.Emotion and cognition:insights from studies of the human amygdale[J].Annu Rev Psychol,2006,57:27-53.

4 MoserMB,Moser EI.Functional differentiation in the hippocampus[J].Hippocampus,1998,8(6):608-619.

5 Szyndler J,Wierzba-Bobrowicz T,Skorzewska A,et al.Behavioral,biochemical and histological studies in a model of pilocarpine induced spontaneous recurrent seizures[J].Pharmacol Biochem Behav,2005,81(1):15-23.

6 Silva JG,Mello LE.The role of mossy cell death and activation of protein synthesis in the sprouting of dentate mossy fibers:evidence from calretinin and neo-timm staining in pilocarpine-epileptic mice[J].Epilepsia,2000,41(l6):S18-S23.