異丙酚對大鼠失血性休克復蘇后腸道的保護作用

常 杰 曹書華 王勇強 常文秀

嚴重多發傷伴失血性休克患者日漸增多，失血性休克在其原發性損傷之后所出現的并發癥一直是臨床重癥監護面臨的問題。近年來關于重癥監護室（ICU）常用鎮靜藥物異丙酚非鎮痛鎮靜作用的研究逐漸增多[1-2]，但對于失血性休克復蘇后的臟器功能保護的研究報道較少。本實驗通過觀察Wistar大鼠失血性休克復蘇后腸道組織和血漿中脂質過氧化物酶水平及腸道組織病理學變化，探討異丙酚對失血性休克復蘇后腸道的保護作用及其可能的作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組 健康清潔級Wistar大鼠24只（購自中國醫學科學院放射醫學研究所實驗動物中心），均為雄性，體質量（270±20）g，隨機分為假手術組（C組）、失血性休克復蘇組（HS-R組）及異丙酚處理組（P組），每組各8只。

1.2 主要藥品與試劑 市售異丙酚（商品名：得普利麻，英國AstraZeneca公司）質量濃度為10 g/L；市售平衡液為復方氯化鈉葡萄糖注射液（日本大冢制藥公司）。30%烏拉坦；肝素鈉；丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、二胺氧化酶（DAO）試劑盒，考馬斯亮藍蛋白測定盒均購于南京建成生物公司；4%多聚甲醛液購于天津灝洋生物技術有限公司。

1.3 動物模型的制備 模型參照Fan等[3]的方法并加以改進。大鼠經腹腔注射30%烏拉坦（0.3 mL/100 g）麻醉。麻醉滿意后動物仰臥于操作臺上，固定四肢及頭部。術野備皮并用安爾碘消毒。分離左側頸總動脈，置入22 G導管，連接多道生理記錄儀持續監測平均動脈壓。右頸內靜脈置24 G導管供放血、回輸血液及液體復蘇用，于插管成功后向導管腔內注入25 U/mL肝素鹽水0.5 mL抗凝，而不實施全身肝素化。完成置管后行氣管切開置入14 G氣管插管，避免阻塞性通氣障礙。自頸動脈快速放血至平均動脈壓（MAP）達到40 mm Hg（1 mm Hg=0.133 kPa），穩定此血壓水平30 min后開始液體復蘇，在1.5 h內經頸內靜脈回輸全部放出的血液并追加輸入2倍于失血量的平衡液，血壓恢復至80 mm Hg以上視為復蘇成功，否則不入組。復蘇成功后，HS-R組經頸內靜脈持續泵入生理鹽水1 mL·kg-1·h-1，持續泵入2 h；P組給予1%異丙酚1 mL·kg-1·h-（110 mg·kg-1·h-1）經頸內靜脈持續泵入，持續泵入2 h。C組只做插管不進行放血、回輸等處理。

1.4 觀察指標 H S-R組和P組在復蘇后2 h，C組在插管完畢后4 h處死大鼠，經頸動脈放血，立即離心，留取血漿1 mL，測血漿中DAO水平；放血后，立即開腹取距回盲部20 cm處小腸組織約5 cm，其中3 cm腸道組織立即勻漿，勻漿后，測定勻漿中蛋白含量，再用所測SOD、MDA值除以蛋白含量，最終結果分別用U/mg、nmol/mg表示；另外約2 cm腸道組織置于4%多聚甲醛液中固定，常規石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡觀察腸道組織病理學變化。

1.5 檢測方法 MDA采用硫代巴比妥酸比色法，SOD采用黃嘌呤氧化酶法,DAO及蛋白含量采用分光光度法進行測定；腸黏膜損傷按Chiu評分法[4]進行組織病理評分。0分:正常黏膜絨毛；1分:上皮下間隙增大，通常在絨毛尖端，常伴有毛細血管淤血；2分:上皮下間隙擴張伴隨上皮層同固有層的中度分離；3分:絨毛兩側上皮層大量地同固有層分離，部分絨毛頂端破損；4分:絨毛破損伴隨固有層毛細血管暴露，可觀察到固有層的細胞成分增多；5分:固有層破壞或不完整、出血和潰瘍。

1.6 統計學處理 采用SPSS 17.0軟件進行統計學處理，計量資料數據以s表示，采用Levene方差齊性檢驗，方差分析,組間比較采用LSD-t法，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3組SOD、MDA、DAO的比較 HS-R組腸道組織勻漿中具有抗氧自由基作用的SOD含量較P組明顯降低（P<0.01），而反映腸道脂質過氧化損傷程度的MDA及DAO水平明顯高于P組（P<0.001），見表1。

表13 組SOD、MDA、DAO及Chiu評分比較（n=8±s）

表13 組SOD、MDA、DAO及Chiu評分比較（n=8±s）

*P<0.01

C組（1）HS-R組（2）P組（3）F P（1）∶（2）（1）∶（3）（2）∶（3）SOD（U/mg）146.639±27.826 80.538±3.219 105.399±5.082 33.009*<0.001<0.001 0.006 MDA（nmol/mg）2.299±0.320 6.037±0.371 4.782±0.528 167.713*<0.001<0.001<0.001 DAO（U/mL）1.409±0.780 8.769±0.527 5.027±1.732 247.253*<0.001<0.001<0.001 0.450±0.097 3.810±0.375 2.300±0.284 294.821*<0.001<0.001<0.001組別Chiu評分

2.2 小腸組織病理形態學變化 C組腸道組織各層結構完整，絨毛排列整齊；HS-R組腸道組織上皮下間隙擴張伴隨絨毛兩側上皮層大量地同固有層分離，腸絨毛毛細血管充血，部分絨毛頂端破損；P組腸道組織上皮下間隙擴張伴隨上皮層同固有層的中度分離，絨毛頂端輕度損傷，見圖1~3。對3組分別進行腸黏膜損傷病理學評分，結果顯示，P組及HS-R組均高于C組,P組較HS-R組低，差異均有統計學意義（均P<0.001），見表1。

3 討論

腸道組織是缺血發生時的敏感器官，其微循環的改善最終有賴于全身狀況的好轉和充足的血容量。積極地復蘇是避免腸道微循環障礙的最佳途徑，但復蘇又會涉及到腸道缺血再灌注損傷這一病理變化，無論失血發生時還是復蘇后，腸道組織的損傷往往不可避免，其屏障功能的損害易引發全身感染，導致過度的炎癥反應，即系統性炎癥反應綜合征（SIRS）和多器官功能不全綜合征（MODS）。對于其損傷機制，學者也先后提出了能量衰竭、氧自由基損傷、白細胞黏附、內皮細胞損傷與遞質病等一系列學說[5]。本研究主要探討氧自由基損傷這一病理機制。就腸道組織而言，缺血時腸道組織中三磷酸腺苷（ATP）含量急劇減少，生成大量次黃嘌呤，再灌注時內皮細胞黃嘌呤脫氫酶轉化成黃嘌呤氧化酶產生大量自由基，導致組織嚴重損傷。其中MDA是氧自由基引發單位膜脂質過氧化反應的產物之一，其含量高低可間接反映脂質過氧化對膜系統的損傷程度[6]，故測定MDA水平可反映腸道組織細胞損傷程度。亦有大量研究表明，DAO是人類及哺乳動物腸黏膜細胞漿中具有高度活性的細胞內酶，它與腸黏膜細胞的核酸和蛋白質合成有關，在外周血中活性穩定，是反映腸黏膜完整性的相對穩定的生化指標，對腸黏膜損傷早期診斷敏感并且具有特異性[7-8]。因此，DAO可反映小腸黏膜損傷狀況。SOD是體內重要的過氧化物酶，能及時地清除可能產生的氧自由基（OFR），從而減輕氧自由基對機體造成的損害，測定SOD的水平對評估機體抗氧自由基損傷的能力有一定價值。

異丙酚是一種新型靜脈麻醉藥，除麻醉作用外，研究發現異丙酚還可減少自由基的生成[1]。異丙酚在化學結構上與內源性抗氧化劑維生素E和已知的抗氧化劑丁化羥基甲苯十分相似，其抗氧化作用的結構基礎也正是這種類似酚羥基的結構。Mur?phy等[9]研究證實異丙酚可切斷脂質過氧化反應，與脂質過氧化基形成一個穩定的無活性產物，從而清除氧自由基。

本實驗結果顯示，失血性休克復蘇后大鼠血漿中DAO水平及腸道組織勻漿中MDA水平升高，腸道組織發生脂質過氧化損傷，其完整性遭到破壞，而異丙酚處理組血漿中DAO水平及腸道組織勻漿中MDA水平有所下降，具有抗氧自由基損傷作用的SOD水平升高，表明異丙酚在短時間內可通過減少氧自由基的生成，增強腸道組織抗氧自由基損傷能力，減輕失血性休克復蘇后腸道組織脂質過氧化損傷程度，一定程度上使腸道黏膜組織保持完整性，起到腸道保護作用，對治療由于失血性休克復蘇后腸道黏膜屏障功能損傷而引發的全身炎癥反應甚至多器官功能障礙等具有一定臨床意義。但本實驗僅研究了短時間內異丙酚對腸道的保護作用，其較長時間腸道保護作用尚需進一步研究。

[1]Cheng YJ，Wang YP，Chien CT ，et al．Small-dose propofol seda?tion attenuates the formation of reactive oxygen species in tourni?quet-induced ischemia-reperfusion injury under spinal anesthesia[J]．Anesth Analg，2002，94(6)：1617.

[2]楊舜，裴凌．異丙酚和氯胺酮減輕大鼠腎缺血再灌注損傷[J]．中國病理生理雜志，2010，26（1）：177-180.

[3]Fan J,Shek PN,Suntress ZE,et al.Liposomal antioxidants pro?longed protection against acute respiratory distress syndrome[J].Sur?gery,2000,128（2）:332-338.

[4]Chiu CJ,McArdle AH,Brown R,et al.Intestinal mucosal lesion in low-flow states[J].Arch Surg，1970，101(4):478-483.

[5]Sun Z,Olanders K,Lasson A,et al.Effective treatment of gut barrier dysfunction using an antioxidant,a PAF inhibitor and monoclonal antibodies against the adhesion molecule PECAM-1[J].J Surg Res,2002,105(2):220-233.

[6]李文歌，陳香美，廖洪軍,等.新型抗氧化劑U74389G對急性缺血再灌注損傷小鼠腎功能的保護作用[J].中華腎臟病雜志，1996，12(1)：47-47.

[7]黎君友.小腸屏障功能監測的實驗研究[J]．創傷外科雜志，2001，3(2)：109-111．

[8]陶慶松，任建安，于瑩軍，等.腸內營養對克羅恩病血清二胺氧化酶的影響及機制研究[J].腸外與腸內營養，2007,14（1）：18-20.

[9]Murphy PG，Myers DS，Davies MJ，et al.The antioxidant potential of propofol(2,6-diisopropylphenol)[J].Br J Anaesth,1992,68(6)：613-618.