HPLC-DAD變波長梯度洗脫同時測定果蔬汁飲料中的9種食品添加劑

韓秋珍，黃日梅，陳燕敏

（1.廣東省食品工業(yè)研究所有限公司，廣東廣州 510000；2.廣東省食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)站，廣東廣州 510000；3.廣東省食品工業(yè)公共實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州 510000）

食品添加劑是指為改善食品品質(zhì)和色、香、味以及為防腐、保鮮和加工工藝的需要而加入食品中的人工合成或者天然物質(zhì)[1]，可改善和提高食品的感官指標(biāo)，保持食品的營養(yǎng)價值，增加花色品種，調(diào)整營養(yǎng)結(jié)構(gòu)，延長保質(zhì)期，改進(jìn)加工條件[2]。合成著色劑、甜味劑、防腐劑是果蔬汁飲料中最常使用的食品添加劑，對促進(jìn)果蔬汁飲料的產(chǎn)品質(zhì)量提升發(fā)揮了重要的作用[3]。有研究發(fā)現(xiàn)，過量攝入甜味劑、防腐劑、合成著色劑會對腸、肝、腎及神經(jīng)系統(tǒng)和消化系統(tǒng)造成損害[4-6]。國家標(biāo)準(zhǔn)《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》（GB 2760―2014）[1]中對食品添加劑使用量有著嚴(yán)格的控制。

從2020年公布的國家食品安全監(jiān)督抽檢情況[7-8]可見，超范圍、超限量使用食品添加劑仍然存在且存在聯(lián)合使用超量問題。但目前檢測這些食品添加劑的標(biāo)準(zhǔn)不盡相同[9-12]，逐一檢測耗時耗力，發(fā)生食品安全問題時不能及時提供技術(shù)支持，造成監(jiān)管部門把控食品安全風(fēng)險的時效性減弱[4]。

因此，本方法擬建立一種針對果蔬汁飲料中常進(jìn)行檢測的安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃和亮藍(lán)9種食品添加劑采用最佳吸收波長變波長梯度洗脫同時進(jìn)行測定的方法，有利于降本增效，為食品安全監(jiān)管提供方法參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Agilent1260高效液相色譜儀，配備二極管陣列檢測器。

甲醇（GR）、乙酸銨（AR）、實(shí)驗(yàn)用水等。安賽蜜、檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、亮藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)儲備液，質(zhì)量濃度均為1 000 μg/mL，室溫避光保存，購于海岸鴻蒙標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)技術(shù)有限公司；苯甲酸、山梨酸、糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)品，0～8 ℃避光保存，購于BePure公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

準(zhǔn)確稱取苯甲酸、山梨酸、糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)品0.01 g（精確至0.000 1 g）至10 mL容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，即得質(zhì)量濃度為1 000 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。分別吸取9種食品添加劑標(biāo)準(zhǔn)儲備液 10 μL、50 μL、100 μL、200 μL 和500 μL于10 mL容量瓶中，用水定容至刻度，即得1 μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL、20 μg/mL 和 50 μg/mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.2.2 樣品前處理

樣品充分混勻，準(zhǔn)確稱取樣品5 g至25 mL比色管中，加約15 mL水，渦旋混勻，超聲30 min，冷卻后調(diào)pH至6～7，用水定容至25 mL。用0.45 μm水相濾膜過濾，濾液備用。

1.2.3 色譜條件

色譜柱：C18（4.6×250 mm，5 μm）；流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL；流動相：B相為甲醇，D相為0.02 mol/L乙酸銨溶液，梯度進(jìn)行洗脫，檢測波長和洗脫條件見表1。

表1 梯度洗脫程序

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品前處理方法的改進(jìn)

果蔬汁飲料基質(zhì)相對簡單，不含蛋白和脂肪，故可以不用聚酰胺粉吸附洗脫合成著色劑，不用沉淀蛋白和去除脂肪的步驟進(jìn)行食品添加劑的檢測，簡化了前處理過程，大大提高了工作效率。根據(jù)檢測方法的原理，最終確定前處理方法為稱取樣品5 g至25 mL比色管中，加約15 mL水，渦旋混勻，超聲30 min，冷卻后調(diào)pH至6～7，用水定容至25 mL。用0.45 μm水相濾膜過濾，濾液備用。

2.2 檢測波長和梯度洗脫的選擇

采用DAD對9種食品添加劑混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液采集210～700 nm光譜圖，掃描其最佳吸收波長，經(jīng)過反復(fù)試驗(yàn)，最終確定變波長條件見表1。梯度洗脫條件在標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上考慮各個添加劑在流動相中的溶解度及色譜柱的分離效果，采用甲醇和20 mmol/L乙酸銨為流動相，反復(fù)試驗(yàn)不同梯度條件洗脫的分離效果，最終確定采用表1的梯度洗脫程序能實(shí)現(xiàn)9種食品添加劑的較好分離，混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液色譜圖見圖1。

圖1 9種食品添加劑混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液色譜圖

2.3 線性范圍及檢出限、定量限

將9種食品添加劑混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液按1.2.3中色譜條件上機(jī)測定，以質(zhì)量濃度x為橫坐標(biāo)，峰面積y為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限見表2。

表2 9種食品添加劑混合溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限

2.4 方法的加標(biāo)回收率和精密度

稱取已知含量的樣品5 g，在樣品中加入標(biāo)準(zhǔn)溶液，按1.2.2進(jìn)行樣品處理，按上述1.2.3中色譜條件上機(jī)測定，結(jié)果見表3。回收率范圍為91.5%～107%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍為1.8%～6.8%。

表3 加標(biāo)回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差

2.5 實(shí)際果蔬汁飲料樣品的測定

用本實(shí)驗(yàn)方法對市售的果蔬汁飲料進(jìn)行8個樣品測定分析，每個樣品重復(fù)測定2次。檢測結(jié)果見表4。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，8個樣品中同時檢出安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、檸檬黃、胭脂紅、日落黃6種食品添加劑的樣品有1個，同時檢出安賽蜜、山梨酸、檸檬黃、日落黃、亮藍(lán)5種食品添加劑的樣品有1個，同時檢出安賽蜜、山梨酸、檸檬黃、日落黃4種食品添加劑的樣品有1個，只檢出安賽蜜的樣品有1個，只檢出苯甲酸的樣品有3個。根據(jù)《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》（GB 2760—2014）[1]中對食品添加劑的使用限量標(biāo)準(zhǔn)，所檢出樣品的添加劑含量均符合國家標(biāo)準(zhǔn)要求。

表4 果蔬汁樣品檢測結(jié)果（單位：g/kg）

3 結(jié)論

本研究建立了一種HPLC-DAD變波長梯度洗脫同時測定果蔬汁飲料中的安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃和亮藍(lán)9種食品添加劑的檢測方法。針對果蔬汁飲料的特點(diǎn)，優(yōu)化了前處理方法，采用變波長梯度洗脫實(shí)現(xiàn)了9種食品添加劑的同時測定。結(jié)果表明，該方法前處理簡單，色譜分離效果好，結(jié)果精確，適合果蔬汁飲料中的安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃和亮藍(lán)9種食品添加劑的同時測定，很大程度上提高了工作效率，降低了實(shí)驗(yàn)成本，為食品安全監(jiān)管提供了有力支持和有效保障。