腸健片醇提工藝的研究

李成艦，陳海洋，賀百花，高 倩，趙紅深

湖南環(huán)境生物職業(yè)技術學院醫(yī)藥系，湖南衡陽 420001

腸健片是中藥復方制劑，主要由黃連、木香、吳茱萸（制）等制備而成，該方主要用于腸道疾病，經過多年的臨床驗證，其治療效果非常顯著。為了進一步對該藥的作用機制進行了解和探索，筆者以小檗堿與木香烴內酯的含量及干浸膏得率為評價指標，采用正交設計結合多指標綜合評分法優(yōu)化醇提工藝并對該制劑中所含藥物的主要藥理活性成分進行研究，現(xiàn)報道如下：

1 儀器與試藥

1.1 材料

黃連等中藥材（由四川省天奇藥業(yè)有限公司提供）；鹽酸小檗堿對照品 （由北京太洋藥業(yè)有限公司提供，批號：H11021511）；木香烴內酯對照品（由上海科興實驗室設備有限公司提供，批號：111524-200503）；以甲醇、乙腈作為色譜純，采用重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

1.2 儀器

Waters高效液相色譜儀；Waters 2487型紫外檢測器；色譜柱：Polaris C18－A 色譜柱 （250 mm×4.6 mm，5 μm）；Breeze工作站；C-R3A數(shù)據(jù)處理器；電子分析天平（MA11O型，上海天平儀器廠）

2 方法與結果

按照《中國藥典》規(guī)定的方法，對藥材中的指標成分分別測定[1]。木香中木香烴內酯與去氫木香烴內酯總浸出量為1.9%；黃連中鹽酸小檗堿浸出量為6.1%，均符合藥典規(guī)定的要求。

2.1 干浸膏得率的測定[1]

首先取25.00 ml提取液，置于干燥蒸發(fā)皿中，溫度調節(jié)為105℃，水浴蒸干并真空干燥3 h，干燥后移至器皿中，冷卻30 min后稱定重量（W）。

2.2 小檗堿浸出量的測定[2]

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Polaris C18-A色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為0.05 mol/L磷酸二氫鈉（用磷酸調節(jié)pH至3）-乙腈（70∶30）；檢測波長：270 nm；流速：1.0 ml/min；柱溫：30℃。

2.2.2 對照品溶液的制備 取鹽酸小檗堿加65%乙醇配制成0.05 mg/ml的對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備與測定 取4倍處方量藥材（其中含黃連24 g，木香40 g）置于圓底燒瓶中，在水浴上加熱回流，提取 3次，加入65%乙醇分別為600﹑480﹑480 ml，提取時間分別為2.0﹑1.5﹑1.5 h，濾過，合并濾液。取提取液減壓濃縮至適量并用相同的溶劑定容至1000 ml，精密取5 ml藥液后置于50 ml容量瓶中，并用相同的溶劑稀釋至刻度。搖勻后靜置，用0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。將上述供試品溶液、對照品溶液各10 μl注入高效液相色譜儀中檢測，以外標法計算小檗堿含量。

2.3 木香烴內酯浸出量的測定[3]

2.3.1 色譜條件 色譜柱：Polaris C18-A色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水（65∶35）；檢測波長：225 nm；流速：1.0 ml/min；柱溫：30℃。

2.3.2 對照品溶液的制備 精密稱取木香烴內酯標準品，加入適量甲醇，配制成160 μg/ml的對照品溶液。

2.3.3 供試品溶液的制備與測定 按照“2.1.3”中供試品溶液的方法制備定容液1000 ml，精密吸取定容液5 ml置于25 ml量瓶中，用相同的溶劑稀釋至刻度，搖勻，靜置，取上清液，經0.45 μm微孔濾膜過濾后，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

取對照品、供試品各10 μl注入色譜儀，測定其峰面積積分值，以外標法計算木香烴內酯的含量。

2.4 提取工藝條件的考察

2.4.1 提取次數(shù)的考察 稱取4倍量的藥材（其中含黃連24 g，木香40 g）3份，采用65%的乙醇回流提取3次，溶劑量為8、6、6倍，提取時間為2 h，分別收集各次提取液，適當濃縮并定容至1000 ml，備用。取定容溶液，按照前述方法分別測定鹽酸小檗堿與木香烴內酯的浸出量，結果表明采用65%乙醇回流提取時，在第3次提取中鹽酸小檗堿與木香烴內酯浸出量占總浸出量的8.65%與11.33%，故確定提取3次。

2.4.2 正交試驗優(yōu)選乙醇提取工藝條件 各因素分別設計3個水平，見表1。取4倍處方量藥材（含黃連24 g，木香40 g），共9份，用L9（34）正交表安排實驗，以小檗堿與木香烴內酯的浸出量和干浸膏得率為評價指標。見表2。

表1 因素水平

2.5 數(shù)據(jù)處理與試驗結果

對表2中的結果用多指標試驗全概率方法進行數(shù)理處理[4]。 設 Bi為第 i號實驗，Aj為第 j個指標，i＝1、2、3…n；j＝1、2、3…k，并且 A1、A2…Ak互不相容，又設各指標的重要程度之比為 A1∶A2∶…∶Ak＝m1∶m2∶…∶mk，設 N＝m1＋m2＋…＋mk，則：

表2 正交試驗安排及結果

以Xji表示第j個指標的第i個測定值，以Sj表示第j個指標下各次（n次）實驗結果的和，即：

SS＝∑Xji，其中 i＝1、2、3…n；j＝1、2、3…k；則：

于是由全概率公式得：

公式③即為同時兼顧各指標綜合效應的全概率公式。按照m1-m2-m3（小檗堿含量指標權重∶木香烴內酯含量指標權重∶浸膏得率指標權重）=2∶2∶1 計算 P（Aj）＝mj/N。三指標的 P（Bi/Aj）＝Xji/Sj列于相應各指標的右側，則同時兼顧各指標效應的全概率公式分為：P（Bi）=0.4P（Bi/A1）＋0.4P（Bi/A2）＋0.2P（Bi/A3）， i＝1、2、3…9，結果見表 2。對表 2 中的全概率計分（P 值）進行方差分析，結果見表3。

由表2與表3可知，最佳的提取方案為A2B1C2D3，與表2中正交試驗的No.4方案一致，從而使正交試驗得以驗證。因此最佳提取工藝條件確定為A2B1C2D3，即用含1%硫酸的65%乙醇溶液提取3次，加溶劑量為12﹑10﹑10倍，提取時間分別為 2.0﹑1.5﹑1.5 h。

表3 正交試驗方差分析

3 討論

黃連與木香為本復方制劑處方中的重要藥物，故選擇其相應的藥理活性成分小檗堿與木香烴內酯作為該醇提工藝的考察評價指標，實驗中測定的木香烴內酯含量實際為木香烴內酯與去氫木香烴內酯的總量。

關于黃連中小檗堿的提取方法很多[5]，劉圣等[6]通過實驗表明，由于小檗堿的硫酸鹽溶解度較大，黃連提取采用酸性溶劑能增加小檗堿的浸出量，但硫酸加入量從0.1%到1.0%不等，故本實驗參考相關報道[5]中小檗堿提取方法并進行改良，對提取液中加入的酸的用量進行考察。實驗結果表明，該方法能有效增加小檗堿在復方混合提取中的浸出量，提示該方法相對有效。

中試產品檢驗結果顯示，不同批次的產品中指標成分的含量基本一致，小檗堿浸出量為75%左右，木香烴內酯浸出量為62%左右，提示該提取方法提取效果較好，且相對穩(wěn)定，說明本試驗方法較傳統(tǒng)方法更加快捷、全面、合理。

[1]國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:57-58,285-285.

[2]田洛,宣依昉,范榮軍,等.醇堿提取法提取黃芪多糖[J].吉林大學學報:理學版,2006,44(4):652.

[3]王萍,何強,毛偉新,等.枳香膠囊提取工藝的研究[J].中成藥,2008,30(4):605-607.

[4]石召華,翟莉,曾慶恢,等.用多指標試驗全概率評分法研究兒瀉貼提取工藝[J].中國醫(yī)院藥學雜志,2008,17(28):1453-1455.

[5]張文珠,劉霞,溫博,等.反相高效液相色譜法測定腎復康膠囊中的野黃芩苷和蘆丁[J].色譜,2004,22(2):138.

[6]劉圣,唐麗琴,陳禮明.正交試驗優(yōu)選黃連中小檗堿提取工藝的研究[J].中國藥房,2004,15(1):18-20.

[7]陳秋東,徐志南,于平,等.中藥決明子中蒽醌類活性成分的生化研究進展[J].中藥材,2002,25(6):442.

[8]王海棠,呂本蓮,尹衛(wèi)平,等.正交實驗法研究決明子提取工藝[J].天然產物研究與開發(fā),2003,15(2):141.