大慶市不同產地防風中有效成分含量比較

于春月 ，張特立 ，白玉華，韓成花

1.哈爾濱醫科大學大慶校區藥學院，黑龍江大慶 163319；2.大慶市人民醫院藥劑科，黑龍江大慶 163316

防風為傘形科植物防風Saposhnikovia divaricata（Turcz.）Schischk.未抽花莖植株的干燥根，能解表祛風，勝濕止痙，用于感冒頭痛、風濕痹痛、風疹瘙癢及破傷風等癥[1]。防風中的化學成分包括色原酮、揮發油、香豆素、雜多糖等類物質，藥理實驗表明，其具有解熱、鎮痛、鎮靜、抗炎、抗過敏、抗驚厥和增強機體非特異性免疫功能的作用[2-3]。《中國藥典》2010年版中以防風中的升麻苷及5-O-甲基維斯阿米醇苷為主要成分進行含量測定，近年來也有人根據實際需要建議測量其中的多種有效成分以完善防風藥材的質量控制[4-5]。本文參考《中國藥典》2010年版標準，對黑龍江省大慶市不同地區防風中升麻苷及5-O-甲基維斯阿米醇苷的含量進行對比分析，旨在建立大慶地區的防風質量標準，為防風藥材的質量評價及合理使用提供參考依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC-20A型高效液相色譜儀（日本島津公司），配有紫外檢測器，色譜柱為 Inertsil ODS-SP（4.6 mm×150 mm，5 μm）；Model C3860 超聲儀（CBL Photoelectron Technology Co.Lid.）；ESJ萬分之一電子天平（沈陽龍騰電子有限公司）。

1.2 試藥

升麻苷（批號：111522-201005）及5-O-甲基維斯阿米醇苷（批號：111523-201005）均購自中國藥品生物制品檢定所；甲醇為分析純，水為吉林產娃哈哈純凈水；防風所有樣品經哈爾濱醫科大學大慶校區藥學系劉金杰教授鑒定，均為傘形科植物防風Saposhnikovia divaricata （Turcz.）Schischk.的根。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

流動相：甲醇-水（40∶60），流速：1 ml/min，檢測波長：254 nm，進樣量：10 μl。理論塔板數按升麻苷計算，不低于2000。按5-O-甲基維斯阿米醇苷計算，不低于2500。

2.2 對照品溶液的制備[6]

精密稱取升麻苷對照品4.6 mg置于10 ml容量瓶中，加甲醇超聲溶解并稀釋至刻度；精密稱取5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品5.5 mg置于10 ml容量瓶中，加甲醇超聲溶解并稀釋至刻度，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取防風藥材0.25 g精密稱定，置于50 ml圓底燒瓶中，加入甲醇10 ml，稱重，水浴回流2 h，甲醇補足失重，過0.45 μm 微孔濾膜，進樣 10 μl。

按上述條件分別進樣，得升麻苷對照品、5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品、防風樣品的HPLC色譜圖。見圖1。

2.4 標準曲線的繪制

分別準確量取升麻苷對照品和5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品溶液各 0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml置于同一 5 ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，取10 μl進樣，按上述色譜條件進行分析測定，以峰面積Y（mv）為縱坐標，對照品溶液濃度X（mg/ml）為橫坐標，進行回歸計算。結果得升麻苷的標準曲線為 Y=23659X-3276.6，r=0.9999 （n=6）， 線性范圍為 18.4～92.0 μg/ml。5-O-甲基維斯阿米醇苷的標準曲線為 Y=21217X-8217.8，r=0.9998（n=6），線性范圍為 22.0～110.0 μg/ml。表明兩種成分在檢測范圍內線性關系良好。

2.5 精密度試驗

分別精密量取升麻苷及5-O-甲基維斯阿米醇苷的對照品溶液各0.5 ml，置于同一5 ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，取10 μl進樣，重復進樣6次，記錄峰面積，計算RSD分別為0.87%和1.04%，RSD均小于3%，表明儀器精密度良好。

圖1 防風對照品及樣品HPLC色譜

2.6 重復性試驗

精密稱取同一產地的防風藥材6份，按照“2.3”項下方法制備供試品溶液并進行測定，得到相應的峰面積，計算RSD分別為2.67%和2.23%，RSD均小于3%，表明方法的重復性良好。

2.7 穩定性試驗

取同一供試品溶液，在上述色譜條件下，分別于0、2、4、6、8、10、12 h測量，結果在 12 h內樣品中的升麻苷及 5-O-甲基維斯阿米醇苷的峰面積RSD均小于3%，表明樣品在12 h內穩定。

2.8 加樣回收率試驗

精密稱取6份已知含量的防風藥材粉末0.25 g，分別加入對照品溶液適量，按“2.3”項下方法制備供試液并分析，結果顯示，樣品加樣回收率在98.6%～104.3%，RSD小于3.0%。

2.9 樣品含量測定

按“2.3”項下方法制備樣品，每份樣品測量3次，取平均值。見表1。

表1 防風含量測定結果（n=3）

3 討論

3.1 前期處理方法的考察

對比了回流提取法及超聲提取法對于有效成分含量的影響，結果表明，回流提取法優于超聲提取法，故選擇前者作為提取方法。

3.2 色譜條件的建立

流動相的選擇：對比了乙腈-水及甲醇-水對于色譜峰的影響，采用乙腈-水為流動相得到的色譜峰雜峰較多，很難實現分離；而采用經典的甲醇-水為流動相得到的色譜峰峰形簡潔明了，主要成分分離度高，十分理想，故選用甲醇-水為流動相。

流速的選擇：分別考察了0.8、1.0、1.2 ml/min流速下峰形的變化，以1.0 ml/min得到的色譜峰最為理想。

色譜柱的選擇：綜合考察了安捷倫色譜柱Eclipse XDBC18（4.6mm×150mm，5μm）及島津色譜柱InertsilODS-SP（4.6 mm×150 mm，5 μm）的出峰率、分離度等情況，最終選擇島津色譜柱開展實驗。

3.3 實驗結果的分析

由表1含量測定結果可知，大慶市各個地區所產防風均符合《中國藥典》2010年版標準（藥典規定升麻苷及5-O-甲基維斯阿米醇苷總含量不得低于0.24%），其中，杜爾伯特及肇源地區所產防風中有效成分總含量偏高，可作為質量參考的依據。

[1]國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京:化學工業出版社,2005:102.

[2]楊震,孫黎,王煒佳.防風成分的藥理活性研究進展[J].黑龍江醫藥,2005,18(1):36-37.

[3]王成章,張崇禧.防風國內外研究進展[J].人參研究,2008,15(1):35.

[4]曾麗君,孫啟時,賈凌云.RP-HPLC法同時測定不同產地及不同部位防風中4種有效成分的含量[J].沈陽藥科大學學報,2009,26(2):127-130.

[5]馬力杰,楊濱,馮學峰,等.野生與栽培防風中升麻苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的含量測定及指紋圖譜分析[J].中國中藥雜志,2010,35(13):1731-1734.

[6]李悅悅,王慧,陳俊,等.HPLC法測定防風中升麻苷、升麻素、5-O-甲基維斯阿米醇苷和亥茅酚苷的含量[J].藥學實踐雜志,2010,28(6):445-447.