高效液相色譜法測定五海癭瘤丸中阿魏酸含量

魯金鳳，李立冬，徐顯貴

(吉林省吉林市食品藥品檢驗所，吉林 吉林 132001)

五海癭瘤丸由海藻、海螵蛸、蛤殼、昆布、白芷、木香、海螺、夏枯草和川芎組成，功能軟堅消腫，用于痰核癭瘤、癘瘰、乳核。筆者建立了該制劑中阿魏酸的含量測定方法，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀;Sartorius Bp211D型電子天平;SB5200型超聲振蕩器。阿魏酸對照品由中國藥品生物制品檢定所提供;五海癭瘤丸(市售品);其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[1]

色譜柱:Apollo C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇－1%冰醋酸(40∶60);檢測波長:321 nm。

2.2 溶液制備

精密稱取阿魏酸對照品，加70%甲醇溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含3μg的溶液，作為對照品溶液。取供試品適量，研細，取4.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50 mL，密塞，稱定質(zhì)量，加熱回流30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用70%甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，靜置，取上清液濾過，續(xù)濾液作為供試品溶液。取不含川芎的陰性樣品，按供試品溶液處理方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性考察:分別精密吸取陰性對照品溶液、對照品溶液和供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果見圖1，在該色譜條件下，陰性對照品溶液對測定無干擾。

標準曲線制備:精密稱取阿魏酸對照品，加70%甲醇溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含0.1 mg的溶液，精密吸取上述對照品溶液適量，加70%甲醇溶解并定量稀釋制成每 1 mL 中約含 0.5，1，2，4，8μg的溶液，取10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積為縱坐標(Y)、阿魏酸進樣量為橫坐標(X)繪制標準曲線，得回歸方程 Y=6.3986X+0.7447，r=0.9999(n=5)。結(jié)果表明，阿魏酸進樣量在5～80μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗:取同一對照品溶液，按上述色譜條件連續(xù)進樣6次，測定峰面積積分值。結(jié)果的 RSD=0.72%(n=6)，表明儀器精密度良好。

圖1 高效液相色譜圖

穩(wěn)定性試驗:取同一供試品溶液，放置 0，2，4，6，8，10 h，按上述色譜條件測定峰面積積分值。結(jié)果的 RSD=0.85%(n=6)，表明供試品溶液在10 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗:精密稱取同一批供試品6份，按供試品溶液制備方法制備溶液，依法測定含量。結(jié)果供試品中阿魏酸平均含量為35.5μg/g，RSD=0.87%(n=6)，表明方法重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗:取已知含量(含量為35.5μg/g)的供試品約3 g，平行取樣6份。另精密稱取阿魏酸對照品10.26 mg，置100 mL量瓶中，加70%甲醇溶解并制成質(zhì)量濃度為0.1026 g/L的溶液。分別精密吸取該對照品溶液適量，加入6份供試品中，按供試品的制備方法制備溶液并依法測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

2.4 樣品含量測定

分別取3批供試品，依法制成供試品溶液，在擬訂的色譜條件下測定，計算含量。結(jié)果批號為090301，090401和090405的供試品中，阿魏酸含量分別為 35.5，32.1，37.8μg/g。

表1 阿魏酸加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

3 討論

在含量測定中，曾以甲醇－1%冰醋酸(50∶50)作為流動相，發(fā)現(xiàn)與本方法采用的流動相甲醇－1%冰醋酸(40∶60)峰形和保留時間均較好。方法學(xué)考察結(jié)果表明，所建立的方法可靠、靈敏、專屬性強、重現(xiàn)性好，可作為五海癭瘤丸的含量分析方法。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:38，730.