高效液相色譜法測定舒冠膠囊中淫羊藿苷含量

萬維香

(江蘇省泰州市第一人民醫院，江蘇 泰州 225300)

舒冠膠囊由制何首烏、川芎、黃精(制)、紅花、淫羊藿、五靈脂(醋制)、丹參7味藥材的提取物加適宜的輔料制成，制何首烏為方中主藥，含有大黃素、大黃素甲醚、大黃酚等蒽醌類脂溶性成分和2，3，5，4'－四羥基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷等二苯乙烯類水溶性等成分[1]。由于大黃素、大黃素甲醚等在水提醇沉工藝中轉移率較低，而2，3，5，4'－四羥基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷遇光極不穩定，此兩類成分不宜作為含量控制指標。因此筆者參考文獻[2]，選擇淫羊藿的主要成分淫羊藿苷作為指標成分，采用準確、靈敏的高效液相色譜法進行含量測定，現報道如下。

1 儀器與試藥

Model 510型液相色譜儀(美國Waters);TG332A型電子天平(湘西儀器儀表廠)。淫羊藿苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為0737－200111，供含量測定用);舒冠膠囊(自制，批號分別為041206，041207，041208);所用甲醇為色譜純，其余試藥與溶劑均為分析純;水為重蒸水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱:用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的Shimpack－ODS柱(150 mm×4.5 mm，5 μm);檢測波長:270 nm;流動相:甲醇－0.05%磷酸溶液(55∶45);流速:1 mL/min。在此色譜條件下，色譜圖見圖1，淫羊藿苷峰理論板數為2518，拖尾因子 T=1.106，分離度R=1.94，符合規定。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

取本品內容物約0.2 g，精密稱定，置具塞三角燒瓶中，精密加入流動相50 mL，稱定質量，加熱使溶解，放冷，再稱定質量，用流動相補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。按照處方組成，取除淫羊藿以外的其余輔料，按制備工藝要求制成不含淫羊藿舒冠膠囊，按供試品溶液制備項下方法制備成陰性對照品溶液。取淫羊藿苷對照品適量，精密稱定，加流動相制成每1 mL含25μg的對照品溶液。

2.3 方法學考察

陰性干擾試驗:照擬訂的色譜條件，精密吸取陰性對照品溶液20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。從圖1可知，陰性對照品溶液在淫羊藿苷峰位置無吸收峰，說明陰性對照品溶液不干擾主藥的含量測定。

線性關系考察:取淫羊藿苷對照品，加流動相制成47.6μg/mL的溶液，作為貯備液。分別精密吸取貯備液，加流動相制成質量濃度為 4.76，9.52，19.04，28.56，38.08，47.6μg/mL 的溶液，按上述色譜條件測定峰面積。以峰面積為縱坐標(Y)、淫羊藿苷進樣量為橫坐標(X)進行回歸處理，得線性回歸方程 Y=2000000X+60496，r=0.9999。結果表明，淫羊藿苷進樣量在 0.0952 ～ 0.952μg 范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

精密度試驗:取對照品溶液，精密吸取20 μL，重復進樣6次。結果的 RSD=0.97%(n=6)，表明方法精密度良好。

重現性試驗:取同一批樣品6份，依法制備供試品溶液并測定淫羊藿苷含量，結果的 RSD=2.0%(n=6)，表明方法重現性良好。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，于室溫條件下放置8 h，每隔2 h進樣1次，測定峰面積。結果的 RSD=1.7%(n=5)，表明供試品溶液在8 h內穩定。

加樣回收試驗:取已知含量的樣品(含量2.8 mg/粒)6份，每份約0.1 g，置具塞三角燒瓶中，分別精密加入淫羊藿苷對照品10 mL(55μg/mL，流動相溶解)，再精密加入流動相 40 mL，稱定質量，加熱使溶解，放冷，再稱定質量，用流動相補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，依法測定，結果見表1。

2.4 樣品含量測定

分別精密量取10批樣品適量，按溶液制備方法制備對照品溶液和供試品溶液，精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，依法測定。結果見表2。

表1 加樣回收試驗結果(n=6)

表2 樣品含量測定結果(mg/粒，n=10)

2000年版《中國藥典(一部)》[3]規定淫羊藿藥材含淫羊藿苷(C33H40O15)不少于0.5%，本品每粒含淫羊藿藥材0.6 g，理論上本品每粒含淫羊藿苷應不低于3 mg。實測本品10批樣品，淫羊藿苷含量為2.0～3.6 mg/粒;穩定性試驗中，含量基本穩定。考慮到生產上的波動性，故暫訂本品淫羊藿苷含量不低于1.8 mg/粒[4－5]。

3 討論

取淫羊藿苷對照品適量，加流動相制成每1 mL含10μg的溶液，在250～300 nm波長范圍內掃描，結果本品在269 nm波長處有最大吸收，參考中國藥典淫羊藿苷的檢測波長270 nm，故確定270 nm為檢測波長。

比較了 53 ∶47，56∶44，55∶45不同配比的甲醇－0.05%磷酸溶液作為流動相，結果以55∶45所得色譜圖較優，基線回落良好。

方法學考察結果表明，所建立的含量測定方法簡單、結果準確、專屬性強，能控制產品質量。

[1]郭艷玲，王玉珍，陳再興，等.高效液相色譜法測定舒冠膠囊中丹參酮ⅡA含量[J].中藥材，2004，27(5):379－380.

[2]梁生旺，王淑美，馮素香，等.RP－HPLC測定冠心舒膠囊中丹酚酸B及芍藥苷的含量[J].中成藥，2007，29(3):462－465.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業出版社，2000:122，229，268.

[4]權迎春，鄭光浩，關麗萍.延邊大學醫學學報[J].延邊大學醫學學報，2007，30(2):108－110.