仁丹質量標準研究

況 剛，鄭小平，張正峰，鄧開英

(重慶市藥品檢驗所，重慶 401121)

仁丹收載于《衛生部藥品標準·中藥成方制劑(第五冊)》，具有清暑開竅、辟穢排濁之功，對中暑嘔吐、煩躁惡心、胸中滿悶、頭目眩暈、暈車暈船、水土不服等癥具有較好的療效，但原標準僅收載了顯微鑒別、丁香的薄層色譜鑒別及常規檢查項[1]。筆者建立了方中木香、肉桂、廣藿香、甘草的薄層色譜鑒別方法，同時建立了方中薄荷腦、冰片的含量測定方法，以更全面有效地控制藥品質量。

1 儀器與試藥

Agilent 6890型高效氣相色譜儀;FA2004N型電子分析天平(上海精密儀器有限公司)。薄層色譜硅膠G(青島海洋化工有限公司);木香對照藥材(批號為120921－200506)、肉桂對照藥材(批號為121363－200401)、廣藿香對照藥材(批號為1135－200001)、甘草對照藥材(批號為120904－200410)、薄荷腦對照品(批號為0728－200506)、異龍腦對照品(批號為 110881－200202)、龍腦對照品(批號為111512－200201)，均由中國藥品生物制品檢定所提供;仁丹(吉林修正藥業集團有限公司，批號為S080601，S080602，S080603);試劑均為分析純(國藥集團)。

2 方法和結果

2.1 薄層色譜鑒別(定性)

2.1.1 肉桂

取本品5 g，研細，加乙醇20 mL，超聲處理15 min，濾過，濾液作為供試品溶液。另取桂皮醛對照品，加乙醇制成每1 mL含1 μL的溶液，作為對照品溶液。取缺肉桂的陰性樣品5 g，同供試品溶液的制備方法制成陰性對照品溶液。照薄層色譜法[2005年版《中國藥典(一部)》附錄ⅥB]試驗，吸取上述3種溶液各10 μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)－乙酸乙酯(17∶3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼乙醇試液。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的斑點;陰性樣品無干擾(見圖1 A)。

2.1.2 木香

取本品5 g，研細，加石油醚(60～90℃)20 mL，超聲處理15 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加丙酮2 mL使溶解，作為供試品溶液。另取木香對照藥材0.1 g，同法制成對照藥材溶液。取缺木香的陰性樣品5 g，同供試品溶液的制備方法制成陰性對照品溶液。照薄層色譜法[2005年版《中國藥典(一部)附錄ⅥB]試驗，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－環己烷－乙酸乙酯(12∶10∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同的藍色斑點;陰性樣品無干擾(見圖1 B)。

2.1.3 廣藿香

取本品粉末10 g，研細，加乙醚40 mL，超聲處理10 min，揮干，殘渣加乙酸乙酯2 mL使溶解，作為供試品溶液。另取百秋李醇對照品，加乙酸乙酯制成每1 mL含2 mg的溶液，作為對照品溶液。取缺廣藿香的陰性樣品10 g，同供試品溶液的制備方法制成陰性對照品溶液。照薄層色譜法[2005年版《中國藥典(一部)附錄ⅥB]試驗，吸取供試品溶液及陰性對照品溶液各10～15 μL、對照品溶液3 μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑硅膠G薄層板上，以石油醚(30～60℃ )－乙酸乙酯－冰醋酸(95∶5∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的斑點;陰性樣品無干擾(見圖1 C)。

2.1.4 甘草

取本品5 g，研細，加乙醚40 mL，加熱回流1 h，濾過，藥渣加甲醇30 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加水40 mL使溶解，用20 mL正丁醇提取，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇3 mL使溶解，通過D101型大孔吸附樹脂柱(內徑1 cm，長12 cm)，以水100 mL洗脫，棄去水液，再用70%乙醇液50 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇5 mL使溶解，作為供試品溶液。另取甘草對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。取缺甘草的陰性樣品5 g，同供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法[2005年版《中國藥典(一部)》附錄ⅥB]試驗，吸取供試品溶液及陰性對照品溶液各1～2 μL、對照藥材溶液2 μL，分別點于同一以1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯－甲酸－冰醋酸－水(15∶1∶1∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同顏色的熒光斑點;陰性樣品無干擾(見圖1 D)。

2.2 薄荷腦、冰片的含量測定(氣相色譜法)

2.2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱:聚乙二醇(PEG)－20M的彈性石英毛細管柱(柱長30 m，內徑 0.32 mm，膜厚度 1 μm);柱溫:140 ℃;載氣:N2;進樣量:1 μL;FID檢測器。理論板數按薄荷腦峰計算應不低于2000[2－3]。 氣相色譜圖見圖2。

圖1 薄層鑒別色譜圖

圖2 氣相色譜圖

2.2.2 溶液制備

取薄荷腦、異龍腦、龍腦對照品各適量，精密稱定，加乙酸乙酯制成每 1 mL 含薄荷腦 0.4 mg、異龍腦 24μg、龍腦 80μg 的溶液，即得對照品溶液。取本品約2 g(批號S080601)，研細，精密稱定，置250 mL圓底燒瓶中，加水150 mL，連接揮發油測定器，自測定器上端加水使充滿刻度部分，溢流入燒瓶時為止，再加乙酸乙酯2 mL，連接回流冷凝管，置電熱套中緩緩加熱至沸，并保持微沸1 h，停止加熱，放置片刻，開啟測定器下端的活塞，將水緩緩放出，分取乙酸乙酯層;以少量乙酸乙酯洗滌揮發油提取器，合并乙酸乙酯液，并迅速以盛有無水硫酸鈉的漏斗濾過，用少量乙酸乙酯洗滌濾器，濾液置10 mL量瓶中，加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。取陰性對照樣品，同供試品溶液制備方法制備，作為陰性對照品溶液。

2.2.3 方法學考察

線性關系考察:分別取薄荷腦、異龍腦和龍腦對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋成一系列濃度的溶液。吸取各濃度溶液1 μL，分別注入氣相色譜儀，測定，以峰面積積分值 Y對進樣量 X(μg)進行線性回歸(n=7)。結果見表 1。

表1 各組分線性回歸方程與線性范圍

精密度試驗:取各對照品溶液適量，分別按已確定的色譜條件重復進樣5次。結果峰面積的 RSD薄荷腦為0.9%，異龍腦為0.8%，龍腦為0.8%(n=5)，表明儀器精密度良好。

重復性試驗:取本品適量，按供試品溶液的制備方法制備溶液并測定。結果含量的 RSD薄荷腦為1.6%，異龍腦為1.3%，龍腦為1.3%(n=5)，表明方法重復性良好。

穩定性試驗:取同一供試品溶液適量，于放置 0，2，4，6，8，10，12 h后分別測定。結果峰面積的 RSD薄荷腦為0.9%，異龍腦為1.6%，龍腦為1.5%(n=7)，表明供試品溶液在12 h內穩定。

加樣回收試驗:分別稱取同批樣品(批號為S080601)內容物各6份，精密稱定，精確加入薄荷腦、異龍腦和龍腦對照品溶液適量，按供試品溶液的制備方法制備溶液，測定并計算回收率。結果見表2。

表2 加樣回收試驗結果(n=6)

2.2.4 樣品含量測定

分別精密稱取3批樣品適量，按供試品溶液制備方法制備溶液，依法測定含量。結果見表3。

3 討論

通過薄層色譜鑒別，在仁丹現行質量標準基礎上增加了方中木香、肉桂、廣藿香、甘草的薄層鑒別方法。同時，還考察了方中豆蔻、砂仁、陳皮的薄層色譜鑒別，但存在陰性干擾，結果不理想。

表3 樣品含量測定結果(mg/g)

采用氣相色譜法測定方中薄荷腦、冰片含量時，曾以冰浴超聲處理及水蒸氣蒸餾兩種提取方式進行了考察，結果水蒸氣蒸餾法測得薄荷腦、冰片的含量均比冰浴超聲提取法測得的含量高，且雜質較少。方法學考察結果表明，所建立的方法簡便、靈敏、準確、專屬性強，可作為控制仁丹中薄荷腦、冰片的含量測定方法。

[1]WS3－B－0931－91，衛生部頒藥品標準·中藥成方制劑(第五冊)[S].

[2]王 旭，張隸濤，李 東.氣相色譜法測定萬應錠中冰片含量的探討[J]. 華北煤炭醫學院學報，2009，11(5):643－644.

[3]楊宗輝，惠 濤.GC法測定川貝枇杷露中薄荷腦的含量[J].西北藥學雜志，2008，23(5):262－263.