反相高效液相色譜法測定茵陳合血膠囊中黃芩苷含量＊

2011-07-28 07:16:28蔣大義楊宏圖馬惠萊王惠玲

中國藥業 2011年18期

蔣大義，張娓，楊宏圖，馬惠萊，王惠玲，常翠

(廣東省深圳市人民醫院·暨南大學第二附屬醫院藥學部，廣東深圳 518020)

茵陳合血膠囊由茵陳、七寸金、黃芩、制大黃、甘草組方，是將臨床應用多年、用于防治圍產期母嬰ABO血型不合的協定處方加以改進研制而成。為有效控制產品質量，保證臨床用藥安全有效，筆者選擇活性成分明確的黃芩苷作為質量控制指標，采用反相高效液相色譜法測定茵陳合血膠囊中黃芩苷的含量[1－3]，報道如下。

1 儀器與試藥

島津LC－20A型高效液相色譜儀，包括DGU－20A3脫氣機、LC－20AT溶劑輸送泵、SIL－20A自動進樣器、CTO－20A柱溫箱、SPD－20A紫外－可見檢測器、CBM－20A系統控制器、LCSolution(Ver.1.21)工作站等;pHS－29A型精密pH計(上海雷磁儀器廠);電熱恒溫水浴鍋(廣東省汕頭市醫用設備廠);日本AND電子分析天平;DS系列超聲波清洗器(天津市東康科技有限公司);FY－3C型真空泵(溫嶺市飛越機電有限公司)。黃芩苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為10715－200212);茵陳合血膠囊(自制，批號為20100205，20100315，20100626);甲醇(天津市科密歐化學試劑有限公司，色譜純)，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱:島津 Shimpak VP －ODS柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇－水－冰醋酸(52∶48∶1);流速:1.0 mL/min;檢測波長:280 nm;進樣量:10 μL;柱溫:25℃。理論板數以黃芩苷計為5763。在此條件下，色譜圖見圖1，黃芩苷色譜峰與雜質完全分離，保留時間為9.18 min，陰性對照無干擾。

2.2 溶液制備

圖1 高效液相色譜圖

精密稱取對照品10.59 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成對照品貯備液(每1 mL含黃芩苷0.2118 mg);再精密量取該溶液3 mL，置20 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液(于2～8℃保存)。取樣品膠囊內容物0.5 g(相當于1粒的量)，精密稱定，置50 mL量瓶中，加入70%乙醇適量，超聲處理30 min，冷卻后，用70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精取續濾液5 mL，置50 mL量瓶中，并用70%乙醇稀釋至刻度，用微孔濾膜(0.45 μm)過濾，取續濾液，即得供試品溶液。按照茵陳合血膠囊的制備工藝制備不含黃芩苷的陰性樣品，照供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

標準曲線繪制:分別精密量取黃芩苷對照品貯備液(211.8 mg/L)1，2，3，4，5，6 mL，置 20 mL 容量瓶中，定容，搖勻，在擬定的色譜條件下進樣分析，以峰面積(Y)為縱坐標、相應質量濃度(X)為橫坐標進行線性回歸，繪制標準曲線，得回歸方程 Y=368.87 X+0.158，r=0.9998(n=6)。結果表明，黃芩苷質量濃度在 10.55 ～63.30 mg/L范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

加樣回收試驗:取已知含量的樣品(批號為20100205)約0.25 g，精密加入黃芩苷對照品適量，按供試品溶液的制備方法制備，依法操作測定含量，計算回收率。結果見表1。

精密度試驗:配制質量濃度為 12.00，36.00，60.00 mg/L 的對照品溶液各5份，連續測定2 d，計算日內和日間的精密度。結果見表2。

穩定性試驗:配制質量濃度為18.00，24.00 mg/L的供試品溶液，置室溫或 37 ℃恒溫水浴中，于 0，0.5，1，2，4 h 時取出適量，自然冷卻，觀察溶液外觀并測定含量。結果供試品溶液在不同時間的外觀均澄清、無渾濁，色譜峰面積及峰形無變化，含量見表3。