反相高效液相色譜法測定厄多司坦膠囊的含量

吳偉明，王 軍，吳妙妙

(溫州醫學院附屬第二醫院藥劑科，浙江 溫州 325027)

厄多司坦屬黏痰溶解藥[1]，為前體藥物，其分子結構中含有被封閉的巰基(－SH)，通過肝臟生物轉化成含有游離巰基的活性代謝產物而發揮黏痰溶解作用，另外還具有增強黏膜纖毛運轉功能等作用。厄多司坦可提高抗生素在支氣管炎癥部位的濃度，具有良好祛痰鎮咳和清除自由基的活性作用，臨床主要用于急性和慢性支氣管炎、鼻竇炎、耳炎、咽炎和感冒等引起的呼吸道阻塞及黏液黏稠[1]。為了進一步控制該制劑的質量，筆者建立了一種比較靈敏和簡便的厄多司坦膠囊的含量測定方法?，F報道如下。

1 儀器與試藥

HP1100型高效液相色譜儀(美國惠普公司)，包括G1311A 1100/1200四元泵，G1314A 1100可變波長檢測器;Chem32安捷倫色譜工作站(agilent，Version 6.1);FA1004N型電子天平(上海精密科學有限公司，d=0.1 mg);TU－1901型雙光束紫外分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司);pHS－3C型精密pH計(上海精密科學儀器有限公司，編號為025016)。厄多司坦對照品(純度為99.7%，批號為20081005)，厄多司坦膠囊(規格為300 mg/粒，批號為091101，091115，091201)，均由浙江康樂藥業有限公司提供;甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法和結果

2.1 色譜條件

色譜柱:Hypersil ODS 柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，柱前加保護柱(4 mm ×4 mm，5 μm);流動相:pH 為 6.8的磷酸緩沖液(磷酸二氫鈉 1.95 g+0.1mol/L 氫氧化鈉 55 mL，用 0.45 μm 微孔濾膜過濾)－甲醇(95∶5);柱溫:室溫;流速:1.0 mL/min;檢測波長:237 nm;進樣量:20 μL。用外標法測定。

2.2 溶液制備

精密稱取樣品適量(約相當于厄多司坦25 mg)，置25 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過濾，精密吸取續濾液250 mL，置10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。按處方制備不含厄多司坦的陰性樣品，同法制成陰性對照品溶液。精密稱取厄多司坦對照品25 mg，置25 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻即得100 μg/mL的對照品貯備液。

2.3 方法學考察

系統適用性試驗:精密吸取2.2 項下 3 種溶液各 20 μL，注入液相色譜儀，在擬訂的色譜條件下，色譜圖見圖1?？梢?，供試品溶液與對照品溶液色譜在同一保留時間有相同的色譜峰出現，而陰性對照品溶液色譜則無此峰，說明輔料對測定無干擾。厄多司坦保留時間約為6.69 min，理論板數按厄多司坦峰計算為4822。

線性關系考察:分別精密吸取對照品貯備液適量，加流動相稀釋成質量濃度分別為50，40，25，20，10，4，1 μg/mL 的溶液。在上述色譜條件下取以上溶液各20 μL注入液相色譜儀中，測定峰面積。以厄多司坦質量濃度(X，μg/mL)為橫坐標、峰面積(Y)為縱坐標進行線性回歸，得回 歸 方 程 Y=20.289X－5.001，r=0.9997(n=5)。結果表明，厄多司坦質量濃度在 1～50 μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗:取質量濃度為20 μg/mL的對照品溶液，連續進樣5次，測定峰面積。結果的 RSD為0.87%(n=5)，表明儀器精密度良好。

重復性試驗:取同一批樣品，依法制備供試品溶液，連續進樣6次。結果峰面積的 RSD為0.92%(n=6)，表明方法重復性良好。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，分別在 0，2，4，6，8，12，24 h時進樣，測定峰面積。結果的 RSD為1.05%(n=7)，表明供試品溶液在24 h內穩定。

圖1 高效液相色譜圖

加樣回收試驗:取對照品約40 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，精密量取2，6，8 mL，置25 mL容量瓶中，再分別加入已測知含量的供試品溶液適量，用流動相稀釋至刻度，搖勻，精密吸取上述溶液各1 mL，分別置10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，即得低、中、高3組供試品溶液，每組2份。另取對照品貯備液，加流動相稀釋，制成25 μg/mL的對照品溶液，依法測定，按外標法計算回收率。結果見表1。

表1 厄多司坦加樣回收試驗結果(n=6)

2.4 樣品含量測定

取3批樣品，按2.2項下方法制備供試品溶液，吸取20 μL進樣，按外標法以峰面積計算含量。結果批號為091101，091115，091201的3批樣品中厄多司坦含量分別為標示量的98.52%，99.07%，98.76%(n=3)。

3 討論

厄多司坦是氨基酸衍生物，分子結構中既有酸性基團也有堿性基團，故流動相的pH決定了樣品分子以何種形式存在，從而決定樣品在色譜柱上的保留與峰形。文獻[2－3]采用水－乙腈－三氟醋酸或1 mmol/L醋酸銨－乙腈(80∶20，pH=3.2)為流動相，對柱子損傷較大。為此，本研究中采用了比較廉價易得的流動相，如甲醇、水和磷酸鹽緩沖溶液，并調整各流動相比例及流速，同時考察了反相色譜柱在其耐受的pH(即pH為2～8)條件下，厄多司坦色譜峰形及保留與流動相pH之間的關系。但由于厄多司坦極性較大，采用十八烷基鍵合硅膠為固定相做反相色譜分離時容量因子較小，在試驗中選擇流動相時曾嘗試25%甲醇、5%甲醇等，主成分峰保留時間均小于3 min，與相鄰雜質峰分離度不符合要求。最后發現選擇以甲醇－pH=6.8的磷酸鹽緩沖溶液(5∶95)為流動相時，樣品不僅保留好且峰形較好。

厄多司坦在熱水中微溶，易溶于甲醇。曾嘗試加熱水溶解，但雜質峰明顯增加，可能加熱導致其分解;當以甲醇為溶劑時，其對照品溶液紫外圖譜顯示237 nm波長處有最大吸收峰，但有肩峰出現;以流動相為溶劑配制的厄多司坦對照品溶液在237 nm波長處有最大吸收峰，且峰形較理想。因此，選擇流動相為溶劑。

取對照品貯備液，在190～360 nm波長處掃描，結果厄多司坦在237 nm波長處有最強吸收。為便于檢測，選擇檢測波長為237 nm。

本試驗對厄多司坦的含量測定方法進行了系統研究，結果顯示，方法靈敏度高、操作簡便、結果準確，輔料不干擾測定結果。

[1]劉 萍，邊 強.黏痰溶解藥物——厄多司坦[J].國外醫藥·合成藥、生化藥、制劑分冊，1996，17(4):239.

[2]Kim H，Chang KY，Lee HJ，et al.Sensitive determination of erdostein in human plasma by use of automated 96－well solid－phase extraction and LC－MS/MS[J].Pharm Biomed Anal，2004，34(3):661.

[3]Savu S，Mitrea M，Silvestro L，et al.HPLC with on－line mass spectrometry detection application to elucidate Erdosteine metabolism:preliminary study[J].Clin Pharrnacol Ther，2000，38(8):415.