雙波長反相高效液相色譜法測定柴辛鼻敏康顆粒中芍藥苷和阿魏酸含量

王曉飛，于 玲，葛海生，柴江平

(1.中國人民武裝警察部隊藥品儀器檢驗所，北京 102613;2.中國中醫科學院廣安門醫院，北京 100053)

柴辛鼻敏康顆粒是由川芎、赤芍等多味中藥加工而成的中藥顆粒制劑，臨床用于過敏性鼻炎，療效顯著。為保證和控制該制劑的質量，筆者采用雙波長反相高效液相色譜(RP－HPLC)法同時測定了赤芍中芍藥苷和川芎中阿魏酸的含量，報道如下。

1 儀器與試藥

HP1050型高效液相色譜儀及其色譜工作站。芍藥苷對照品(批號為 110736－200703)，阿魏酸對照品(批號為 110773－200611)，均購于中國藥品生物制品檢定所;柴辛鼻敏康顆粒(批號為 20100513，20100609，20100711，醫院自制);乙腈、甲醇為色譜純，其余均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:Shiseido ODS 柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈 －0.1%磷酸溶液(20 ∶80);檢測波長:λ1=230 nm，λ2=320 nm;流速:1.0 mL/min;柱溫:30 ℃;進樣量:10 μL。

2.2 溶液制備

稱取60℃減壓干燥5 h的芍藥苷對照品約12.5 mg，精密稱定，置5 mL棕色量瓶中，加甲醇適量，超聲使溶解，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，作為對照品貯備液A;稱取阿魏酸對照品約8 mg，精密稱定，置25 mL棕色量瓶中，加甲醇適量，超聲使溶解，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，作為對照品貯備液B;分別精密吸取兩種對照品貯備液各1 mL，置5 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用濾膜(0.45 μm)濾過，作為對照品溶液(約含芍藥苷 0.5 g/L、阿魏酸0.064 g/L)。稱取樣品約2 g，精密稱定，置50 mL錐形瓶中，精密加甲醇25 mL，稱重，置80℃加熱回流1 h，放冷，稱重，用甲醇補足損失的質量，濾過，續濾液再用濾膜(0.45 μm)濾過，即得供試品溶液。依法制備不含赤芍、川芎藥材的陰性樣品，按供試品溶液制各方法操作，即得陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

專屬性考察:精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各10 μL，注入色譜儀，按2.1項下色譜條件進行測定，記錄色譜圖，見圖1。供試品溶液色譜中，在與芍藥苷(230 nm)、阿魏酸(320 nm)對照品溶液色譜相應位置有相同保留時間的色譜峰，保留時間分別為 16.28 min 和 28.76 min、16.38 min 和 28.78 min;陰性對照品溶液色譜相應位置無干擾峰，說明方法專屬性良好。

線性關系考察:精密量取對照品溶液(含芍藥苷0.512 g/L、阿魏酸 0.065 g/L)1，5，10，15，20，25，30 μL，注入高效液相色譜儀，按擬訂的色譜條件測定，記錄峰面積，以峰面積為縱坐標(Y)、進樣量(μg)為橫坐標(X)繪制標準曲線，得回歸方程，芍藥苷為 Y=1132.5 X+611.21(r=0.9998，n=7)，阿魏酸為 Y=4954.6 X+153.7(r=0.9999，n=7)。結果表明，芍藥苷和阿魏酸進樣量分別在 0.512 ～15.36 μg和 0.065 ～1.95 μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗:精密量取對照品溶液(含芍藥苷0.512 g/L、阿魏酸0.065 g/mL)，依法連續進樣6次。結果芍藥苷和阿魏酸峰面積的 RSD分別為0.61%和0.44%(n=6)。

重復性試驗:精密稱取同一批(批號為20100711)樣品6份，依法制成供試品溶液并測定含量。結果芍藥苷和阿魏酸含量的 RSD分別為1.17%和0.83%(n=6)，表明方法重復性良好。

穩定性試驗:精密稱取同一供試品溶液，于室溫放置0，2，4，6，8，10，12 h時后分別進樣測定。結果芍藥苷和阿魏酸峰面積的 RSD分別為0.57%和1.04%(n=7)，表明供試品溶液在24 h內穩定。

加樣回收試驗:稱取已知含量的樣品(批號為20100711，含芍藥苷 9.66 mg/g 和阿魏酸 0.91 mg/g)約 1 g，共 6 份，精密稱定，分別置50 mL錐形瓶中，分別精密加入對照液(含芍藥苷6.22 g/L和阿魏酸1.03 g/mL)1 mL，精密加入甲醇25 mL，按供試品溶液制備方法制成待測液，進樣測定含量，計算回收率。結果見表1。

表1 加樣回收試驗結果(n=6)

2.4 樣品含量測定

取3個批次的樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂的色譜條件測定，以外標法計算含量。結果見表2。

3 討論

試驗中，取相同批號的樣品，分別用甲醇、乙醇、70%甲醇、70%乙醇為溶劑，考察了加熱回流1 h、超聲處理1 h等方法。結果由于樣品含糖量較高，用70%甲醇、70%乙醇為溶劑時，樣品難以過濾;以芍藥苷與阿魏酸的測得含量為指標比較，以甲醇加熱回流1 h時，提取充分，效果最佳。在色譜條件的選擇中，對不同流動相[1－4]和2005年版《中國藥典(一部)》赤芍項下芍藥苷含量測定所用流動相[5]，以及不同的柱溫條件進行了篩選，結果以乙腈－0.1%磷酸溶液(20∶80)為流動相、柱溫為30℃時，對照品色譜峰與雜質峰的分離效果理想。方法學考察結果顯示，所建立的含量測定方法簡單、易于操作，可有效控制柴辛鼻敏康顆粒的質量。

表2 樣品含量測定結果(n=3，mg/g)

[1]岳 敏，毛彥杰，谷學新.高效液相色譜法測定千金止帶丸中芍藥苷的含量 [J].分析科學學報，2005，21(2):167 －169.

[2]毛曉敏，張小波，陳小清，等.HPLC同時測定十二烏雞白鳳丸中芍藥苷、阿魏酸和丹皮酚含量 [J].中成藥，2008，30(5):678－681.

[3]李福如，繆 婧，顧海琳，等.清腦寧顆粒質量標準研究 [J].中國藥業，2010，19(9):27 －28.

[4]朱 偉，王學美.黃芪劑量對補陽還五湯中芍藥苷、阿魏酸含量的影響[J].中國實驗方劑學雜志，2006，12(3):11－13.

[5]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業出版社，2005:109.