不同酒制工藝對丹參中丹酚酸B含量的影響*

常明泉，陳芳，黃良永，袁勝浩，葉立紅，葉方，安志斌，楊光義

(1.湖北醫藥學院附屬太和醫院藥學部，湖北十堰 442000;2.湖北醫藥學院藥檢學院，湖北十堰 442000)

丹參為唇形科植物丹參(Salvia mihiorrhiza Bge)的干燥根及根莖，其味苦，微寒，歸心、肝經，具有祛瘀鎮痛、活血通經、清心除煩、涼血消癰之功效。其水溶性成分丹酚酸B具有較強的抗氧化作用，是治療冠心病、改善微循環、抑制血小板聚集的主要有效成分之一［1-4］。丹參因品種、氣候、產地、采收期及生長年代的不同，所含主要成分差異較大。房陵丹參產于湖北省十堰市房陵地區，是當地政府重點發展的道地藥材之一。特殊的地理環境、氣候條件、炮制方法對房陵丹參中有效成分含量可能有一定影響，筆者采用三種傳統的酒制工藝對房陵丹參進行炮制，用高效液相色譜(HPLC)法對樣品中丹酚酸B含量進行測定，比較不同酒制工藝對其含量的影響，篩選最佳酒制工藝，為道地藥材資源的合理開發利用、發揮最佳臨床療效提供參考依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 戴安UltiMate3000型高效液相色譜儀(包括四元梯度、自動進樣器、柱溫箱、紫外檢測器);FA2004上皿電子天平(上海精科天平，d=0.1 mg);蒸鍋(蘇泊爾SZ26L2);炒鍋(廣東創生，直徑30 cm);燉藥罐(16號，康舒廚具公司);TDGC2j-2型調壓式電爐(1 kW，宏達電器公司);KWY-102型電熱干燥箱(2.4 kW，武漢市武昌實驗儀器廠)。

1.2 試藥 丹酚酸B標準品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號:110722-200807);2 a生房陵丹參(產地湖北房縣，批號:20090912，由湖北醫藥學院附屬太和醫院藥學部葉立紅副主任藥師鑒定為唇形科植物丹參的干燥根及根莖);黃酒(十堰市房縣神農泉皇酒有限公司，批號:20091217);甲醇:(色譜純Tedia，批號:910900);乙腈(色譜純，批號:20070907);甲酸(分析純，批號:20080414)，純化水(太和醫院新鮮生產)。

2 方法與結果

2.1 黃酒的選用 選用市售完整包裝的黃酒，性狀為淡黃色澄清液體，具有黃酒的特異濃香，用乙醇測量儀測定含醇量應為(10±2)%。

2.2 房陵丹參原藥材供試品的制備 取房陵丹參干燥根莖，除去雜質和殘莖，洗凈，潤透，切厚片，干燥;將飲片粉碎，取本品粉末(過孔徑0.355mm藥篩)0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入75%甲醇50mL，稱定質量，加熱回流1 h，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻濾過，取續濾液，即得［5-7］。

2.3 酒炙房陵丹參樣品的制備 取房陵丹參飲片10 g，用帶有6號針頭的注射器吸取黃酒3 g均勻噴灑于藥材表面，拌勻，置直徑為10 cm的玻璃平皿內加蓋悶潤2 h，待黃酒被藥材全部吸盡后，置炒藥鍋內，用文火炒至規定程度(嗅到藥物固有香氣)，取出，放涼，按原藥材供試品的制備方法同法制備供試品。

2.4 酒蒸房陵丹參樣品的制備 稱取房陵丹參飲片10 g，按“2.3”項下方法加入黃酒處理，然后取樣品置蒸鍋內加熱蒸制4 h，至蒸透后取出、置烘箱中50℃烘干，取出放涼，按原藥材供試品的制備方法同法制備供試品。

2.5 酒燉房陵丹參樣品的制備 稱取房陵丹參飲片10 g，按“2.3”項下方法加入黃酒處理，然后取樣品置燉藥罐內，密閉，隔水加熱8 h，燉至輔料完全被吸盡時，取出放涼，置烘箱中50℃烘干，取出放涼，按原藥材供試品的制備方法同法制備供試品。

2.6 含量測定

2.6.1 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;色譜柱為 Dikma-C18(200mm×4.6mm，10 μm);流動相為甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59);檢測波長為286 nm;理論板數按丹酚酸B峰計算應不低于2 000，柱溫為 30℃;流速為 1.0mL·min-1，進樣量為10 μL［8］。

2.6.2 丹酚酸B標準品溶液的制備 取丹酚酸B標準品14.7 mg，精密稱定，置100mL量瓶中，加75%甲醇至刻度，搖勻;制成0.147 mg·mL-1標準品溶液。

2.6.3 陰性樣品的制備 取不含房陵丹參的其他試劑，按“2.2”項下的方法制備成陰性樣品。

2.6.4 干擾實驗 分別取“2.2”“2.3”“2.4”“2.5”“2.6.2”“2.6.3”項下制備的各樣品溶液，按“2.6.1”項下色譜條件進樣，記錄色譜圖，結果除陰性樣品外其他各組樣品均在286 nm處有相同的色譜峰出現，見圖1。陰性樣品無干擾。

2.7 線性關系考察 分別精密吸取丹酚酸B標準品溶液 2.0，5.0，10.0，12.5，15.0，20.0mL 置于 100mL量瓶中，加 75% 甲醇制備成濃度為 2.940，7.350，14.700，18.380，22.050，29.400 μg·mL-1的樣品溶液，按“2.6.1”項下色譜條件進樣測定，以峰面積為縱坐標，濃度作為橫坐標，繪制標準曲線，回歸方程為:Y=19.44X－0.259 7，r=0.999 8，丹酚酸 B 在 2.940 ～29.400 μg·mL-1范圍內呈良好的線性關系。

2.8 精密度實驗 取丹酚酸B原藥材供試品溶液，按“2.6.1”項下色譜條件重復進樣5次，依次測定各峰面積值，結果RSD為0.86%，表明該方法精密度良好。

2.9 穩定性實驗 分別精密吸取房陵丹參原藥材供試品、酒炙品、酒蒸品、酒燉品溶液，于 0，1，2，4，8，12，24 h 在“2.6.1”項下色譜條件各進樣 10 μL，測定丹酚酸 B的含量，結果 RSD分別為 1.07%，1.30%，1.04%，1.12%，表明各樣品溶液在24 h內穩定。

2.10 重復性實驗 分別取房陵丹參原藥材供試品、酒炙品、酒蒸品、酒燉品粉末各6份，每份0.2 g，分別按“2.2”“2.3”“2.4”“2.5”項下的方法制備供試品溶液，按“2.6.1”項下色譜條件各進樣，測得丹酚酸B的平均含量分別為 6.43%，2.73%，1.85%，4.66%，RSD分別為 0.94%，0.79%，0.85%，0.98%(n=5)。

2.11 加樣回收率實驗 分別精密量取已測知含量的房陵丹參原藥材供試品、酒炙品、酒蒸品、酒燉品溶液各6份，再分別加入丹酚酸B標準品溶液(1.838 μg·mL-1)適量，按“2.6.1”項下色譜條件各進樣，測定丹酚酸B的含量，結果其平均回收率分別為 97.9%，99.3%，97.8%，99.3%，RSD 分別為1.63%，1.86%，1.17%，1.47%。

圖1 6種溶液的HPLC色譜圖A.丹酚酸B標準品;B.房陵丹參原藥材供試品;C.酒蒸樣品;D.酒炙樣品 ;E.酒燉樣品;F.陰性樣品;1.丹酚酸BFig.1 HPLC chromatograms of 6 kinds of solutionsA.standard ofsalvianolic acid B;B.miltiorrhizafrom Fangling;C.wine steamed samples;D.wine fried samples;E.wine stewing samples;F.negative samples;1.salvianolic acid B

2.12 樣品含量測定 分別取“2.2”“2.3”“2.4”“2.5”項下的樣品溶液，按“2.6.1”項下色譜條件各進樣，測定丹酚酸B的含量，結果見表1。

表1 不同工藝房陵丹參中丹酚酸B的含量測定結果Tab.1 Determination results of the content of salvian olic acid B in salvia miltiorrhiza from Fangling processed by different technology %，n=3

3 討論

房陵丹參的干燥根及根莖質地堅實，外皮緊貼不易剝落，丹酚酸B為水溶性成分，多含在丹參外皮中，在實驗過程中，藥材必須粉碎完全、均勻，以免導致取、樣不均造成較大偏差而不能真實藥材質量。在藥材軟化時，采用了悶潤法，使藥材便于切制。

不同工藝的房陵丹參中丹酚酸B含量:原藥材供試品＞酒燉品＞酒炙品＞酒蒸品，可見酒制房陵丹參雖然具有緩和藥性、引藥上行、矯味矯臭、防腐、且易于煎出有效成分的作用［9］，但對其中丹酚酸B含量也有較大影響。在3種炮制工藝中，酒炙是于鐵鍋中直接加熱，在高溫翻炒過程中藥材中的丹酚酸B被破壞達57.5%;酒蒸是在密閉容器中循環加熱，回流的冷凝水反復透過藥材可能溶出一部分丹酚酸B滴入水鍋中，該炮制法使丹酚酸損失達71.2%;上述兩種炮制方法的丹酚酸B含量已低于《中華人民共和國藥典》規定(不低于3%)的質量要求;酒燉是隔水密閉加熱，丹參受熱溫度相對較低，沒有回流蒸汽及液體的洗脫，丹酚酸B損失只有27.5%，相對上述兩種方法而言損失較少，故認為酒制房陵丹參以酒燉為最佳工藝。

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