刺五加注射液的安全性考察

李秀梅，范能全，趙欣欣，楊柳，詹宇杰，張芳艷

(重慶市藥品檢驗所，401121)

刺五加注射液收載于《衛(wèi)生部藥品標準》中藥成方制劑第18冊，系刺五加科植物刺五加經提取有效成分而成的供靜脈滴注的中藥注射劑，除具有免疫調節(jié)、抗腫瘤作用外，還可治療心腦血管疾病、糖尿病、神經衰弱等癥。其質量標準中的生物安全性檢驗項目有熱原、異常毒性和無菌。通常按其現(xiàn)行質量標準檢驗上述指標均符合規(guī)定，然而在臨床使用中不時發(fā)現(xiàn)其存在以下不良反應:藥物熱、過敏性休克、全身癥狀、藥疹、呼吸道反應、胃腸道反應等［1-2］。

引起中藥注射液發(fā)生不良反應的原因通常是高分子物污染、抗原性、與輸液的配伍作用等［3-4］。為進一步考察刺五加注射液的安全性，筆者對3個廠家生產的刺五加注射液進行了一系列實驗考察，報道如下。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑 刺五加注射液76批(黑龍江烏蘇里江制藥有限公司59批，黑龍江省珍寶島制藥有限公司哈爾濱分公司2批，黑龍江多多藥業(yè)有限責任公司15批);刺五加標準抗原(中國藥品生物制品檢定所抗生素室，規(guī)格:4 mg·mL-1);特異性刺五加抗體(中國藥品生物制品檢定所抗生素室);牛血清白蛋白干粉(北京欣經科生物技術有限公司);羊抗兔辣根過氧化物酶抗體(中國藥品生物制品檢定所);凝膠緩沖液(三羥甲基氨基甲烷36.33 g，丙烯酰胺0.3 g，加適量水，調pH至8.45，定容至100mL);陽極緩沖液(三羥甲基氨基甲烷 12.1 g，加適量水溶解，用鹽酸液調pH=8.9，定容至500mL);陰極緩沖液(三羥甲基氨基甲烷 6.05 g，tricine8.96 g，丙烯酰胺 0.5 g，定容至500mL，pH8.0);0.1% 硝酸銀染色液;過硫酸銨、甘油、硝酸銀和 N，N，N＇，N＇-四甲基乙二胺(TEMED)(分析純，華美生物工程公司);MAKER(ABI公司生產，國內分裝);96孔酶標板(COSTAR 2592);500 μL超濾管(Sartorius Vivaspin)。

1.2 儀器 酶標儀(安圖2010);電泳儀(BIO-RAD公司);臺式高速離心機。

1.3 方法

1.3.1 用間接酶聯(lián)免疫實驗考察過敏物質 用間接酶聯(lián)免疫法，按照中國藥品生物制品檢定所抗生素室提供的試劑盒操作規(guī)程依法操作。結果判定標準(由中國藥品生物制品檢定所抗生素室提供):計算空白對照的均值和標準差，當待檢樣品吸光度值高于或等于空白對照均值+5倍標準差時，判定為陽性［5-6］。

1.3.2 超濾電泳實驗考察大分子物質 對制品中可能存在的大分子物質進行檢測。采用截留相對分子質量10 000的超濾膜對刺五加注射液進行超濾，并分別對原液、截留液、濾出液進行Tris-Tricine SDS-PAGE電泳分析，考察各廠家的超濾、過濾工藝對刺五加注射液大分子物質的截留效果，以評價不同廠家過濾工藝的優(yōu)劣［5，7］。膠液配方見表 1。

取刺五加樣品原液500 μL置于超濾管中，按轉速4 000 r·min-1超濾 2.5 ～4.0min，收集超截留液和濾出液。并分別將樣品原液、截留液和濾出液進行Tris-Tricine SDS-PAGE電泳。電泳畢，進行銀染。

1.3.3 其他實驗 按照現(xiàn)行質量標準進行了熱原、異常毒性以及無菌實驗考察，還進行了標準外的實驗考察:輸液配伍混合溶液的不溶性微粒實驗、滲透壓測定、降壓物質檢測以及豚鼠過敏實驗。

表1 兩種膠液配方mL

2 結果

2.1 酶聯(lián)免疫實驗考察過敏物質的結果

2.1.1 標準抗原的測定結果 見表2。

2.1.2 樣品測定結果 3個廠家的76批刺五加注射液吸光度檢測結果均＜1.322，按照判定標準，所含的過敏性物質均在規(guī)定限度范圍內，均呈陰性，均符合規(guī)定。不同廠家、同一廠家不同批次之間的數(shù)據(jù)差異無統(tǒng)計學意義。

2.2 超濾電泳實驗考察大分子物質的結果 3個廠家的47個樣品的電泳結果比較見表3。

電泳實驗結果表明:①3個廠家樣品的原液中都不同程度地殘存一些相對分子質量＞10 000的高分子物質，經過截留相對分子質量為10 000的超濾膜后，大分子物質明顯減少的為16批(34.0%)，有一定減少的為13 批(27.7%)，無明顯變化的為18 批(38.3%)，說明各廠家都應改進工藝;②3個廠家的過濾、超濾工藝的有效性的順序為:烏蘇里江公司＞多多藥業(yè)公司＞珍寶島公司。

表2 標準抗原的間接酶聯(lián)免疫法實驗結果

表3 超濾后大分子物質減少情況的比較

2.3 其他安全性實驗的結果 熱原、異常毒性以及無菌實驗均符合規(guī)定，輸液配伍混合溶液的不溶性微粒實驗考察、滲透壓測定、降壓物質檢測以及豚鼠過敏實驗，均未見異常。

3 討論

常規(guī)的SDS-PAGE電泳對相對分子質量＜10 000的物質作電泳分離時，實驗效果差，而Tris-Tricine SDSPAGE電泳適合分離相對分子質量范圍為1～10 000的物質［7］。

間接酶聯(lián)免疫實驗以空白對照均值加5倍標準差的和作為檢測限判定標準，可控制假陽性結果。

對3個廠家共76批樣品還按照質量標準做了熱原、異常毒性以及無菌實驗，結果均符合規(guī)定，又進行了輸液配伍混合溶液的不溶性微粒實驗考察、滲透壓測定、降壓物質檢測以及豚鼠主動過敏實驗等標外方法的實驗考察，也均未見異常。

對刺五加注射液開展的超濾電泳實驗發(fā)現(xiàn)，3個廠家的產品均不同程度地存在相對分子質量＞10 000的大分子物質。推測這些大分子物質可能是導致患者發(fā)生變態(tài)反應的原因。

間接酶聯(lián)免疫實驗未檢出刺五加抗原，可能是由于實驗采用的樣品原液成分復雜，影響了實驗結果。建議今后將樣品原液進行超濾，再對得到的截留大分子物質作間接酶聯(lián)免疫實驗，以進一步確證大分子物質是否為過敏物質。

［1］符壯.我院刺五加注射液不良反應分析［J］.中國藥房，2008，19(3):222－223.

［2］楊軍，陳蓮珍.刺五加注射液致不良反應119例分析［J］.山西醫(yī)藥雜志，2008，37(8):729－730.

［3］肖樹雄，李泳雪.中藥注射液安全性問題及質量控制探析［J］.中國藥師，2009，12(7):955－957.

［4］劉士敬.中藥注射劑不良反應原因分析［J］.中國社區(qū)醫(yī)師，2007，23(5):19－20.

［5］于風平，胡昌勤，崔生輝，等.刺五加注射液中過敏性雜質的分析［J］.中國藥學雜志，2008，43(5):384－387.

［6］林惠玲，龔海濤，林連成.變態(tài)反應性疾病過敏原特異性及總IgE 的檢測［J］.中國熱帶醫(yī)學，2008，8(4):580－581.

［7］王旭，何冰芳，李霜，等.Tricine-SDS-PAGE電泳分析小分子多肽［J］.南京工業(yè)大學學報，2003，25(2):79－81.