尼美舒利膠囊有關物質的研究

謝斌，吳峰，任霞，郭庶東，王文清，方建國

(1.華中科技大學同濟醫學院附屬同濟醫院藥學部，武漢 430030;2.武漢醫藥衛生學會聯合辦公室《中國醫院藥學雜志》編輯部，武漢 430014)

尼美舒利化學名為N-(4-硝基-2-苯氧基苯)甲磺酰胺，于1985年由Roche公司首先在意大利上市，目前已在50個國家使用。尼美舒利是一種新型的非甾體抗炎藥，可選擇性抑制環氧化酶-2(cyclooxygenase，COX-2)，而對具有保護性的COX-1抑制作用很弱，在發揮有效的抗炎作用的同時，減少了其他非甾體抗炎藥常見的消化性潰瘍和胃腸道出血等不良反應［1-2］。臨床上主要用于治療慢性風濕性關節炎和骨關節炎、泌尿系統炎癥、呼吸道感染、手術后疼痛及癌性疼痛等［3-4］。

尼美舒利已被《歐洲藥典》和《英國藥典》收載多年，隨著尼美舒利在我國的廣泛使用，2010年版《中華人民共和國藥典》也收載了尼美舒利原料藥及片劑，增加了有關物質的限度檢查。隨著我國藥品質量標準的提升，除了尼美舒利原料藥及片劑以外，其他劑型如膠囊劑、分散片、顆粒劑、干混懸劑、緩釋膠囊劑、緩釋片劑、凝膠劑等的質量標準也將增加有關物質檢查項。筆者采用高效液相色譜(HPLC)法對尼美舒利膠囊的有關物質進行測定，報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters高效液相色譜儀(Waters600泵，Millennium32色譜工作站，Waters996二極管陣列檢測器)。

1.2 試藥 尼美舒利膠囊(湖北絲寶藥業有限公司，批號:20091001;海南康芝藥業股份有限公司，批號:20080901;廣東逸舒制藥有限公司，批號:20090802);尼美舒利對照品(天津藥物研究院藥業有限責任公司，批號:0511259，純度:99.9%);對氯苯胺(Sigma-Aldrich，分析純);2-苯氧基苯胺 (Sigma-Aldrich，99%);4-硝基-2-苯氧基苯胺(德國LGC公司，純度＞99%);乙腈(Dima technology INC.，色譜純)，磷酸二氫銨(天津市博迪化工有限公司，分析純)，水為純化水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱為Hypersil C18柱(250mm×4.6mm，5 μm)，流動相:乙腈-1.15 g·L-1磷酸二氫銨溶液(用氨水調 pH 至7.0)(34∶66);流速:1.3mL·min-1;檢測波長:230 nm;柱溫:35℃。

2.2 系統適用性實驗 《英國藥典》方法［5］:精密稱取尼美舒利雜質C(2-苯氧基苯胺)和雜質D(4-硝基-2-苯氧基苯胺)對照品適量，加甲醇適量使溶解并稀釋制成每毫升中含尼美舒利雜質C和雜質D各8 μg的溶液，搖勻，濾過，量取20 μL注入液相色譜儀，所得色譜圖見圖1。尼美舒利雜質C和雜質D的色譜峰之間的分離度＞2.0。

圖1 尼美舒利雜質C與D的HPLC色譜圖

《中華人民共和國藥典》方法［6］:精密稱取尼美舒利對照品和對氯苯胺適量，加甲醇適量使溶解并稀釋制成每毫升含尼美舒利100 μg和對氯苯胺40 μg的溶液，搖勻，濾過，量取20 μL注入液相色譜儀，所得色譜圖見圖2。理論板數以尼美舒利計算≥3 000，對氯苯胺峰與尼美舒利峰之間的分離度＞2.0。

圖2 對氯苯胺與尼美舒利對照品HPLC色譜圖

2.3 破壞性實驗

2.3.1 未破壞樣品的制備 取尼美舒利膠囊粉末適量(相當于尼美舒利50 mg)，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，量取20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的7倍。按處方取等比例的各輔料作空白樣品，平行操作，空白輔料峰對檢測無干擾。

2.3.2 高溫強堿破壞實驗 取尼美舒利膠囊粉末適量(相當于尼美舒利50 mg)，置50mL量瓶中，用甲醇20mL溶解后，加 6 mol·L-1氫氧化鈉溶液 2mL，100℃水浴加熱1 h，放冷，用6 mol·L-1鹽酸溶液調節pH至7～10，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，量取20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的7倍。按處方取等比例的各輔料作空白樣品，平行操作，空白輔料峰對檢測無干擾。

2.3.3 高溫強酸破壞實驗 取尼美舒利膠囊粉末適量(相當于尼美舒利50 mg)，置50mL量瓶中，用20mL甲醇溶解后，加 6 mol·L-1鹽酸溶液 1mL，100℃水浴加熱1h，放冷，用6 mol·L-1氫氧化鈉溶液調節pH至7～10，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，量取20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的7倍。按處方取等比例的各輔料作空白樣品，平行操作，空白輔料峰對檢測無干擾。

2.3.4 高溫氧化破壞實驗 取尼美舒利膠囊粉末適量(相當于尼美舒利50 mg)，置50mL量瓶中，用20mL甲醇溶解后，加20%過氧化氫溶液1mL，100℃水浴加熱0.5 h，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，量取20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的7倍。按處方取等比例的各輔料作空白樣品，平行操作，空白輔料峰對檢測無干擾。

2.3.5 光照破壞實驗 取尼美舒利膠囊粉末適量(相當于尼美舒利50 mg)，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度。置4 500 lx光照箱中放置30 d，搖勻，濾過，量取20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的7倍。按處方取等比例的各輔料作空白樣品，平行操作，空白輔料峰對檢測無干擾。

2.3.6 高溫破壞實驗 取尼美舒利膠囊粉末適量，于120℃加熱12 h，用適量甲醇溶解并稀釋制成每毫升含尼美舒利1 mg的溶液，濾過，量取20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的7倍。按處方取等比例的各輔料作空白樣品，平行操作，空白輔料峰對檢測無干擾。

結果顯示，尼美舒利膠囊在高溫破壞條件下，無明顯降解產物;在高溫強堿破壞條件下主要降解產物在6.227，10.278，11.432min;在高溫強酸破壞條件下主要降解產物在12.386min;在高溫氧化破壞條件下主要降解產物在 3.572，3.767，4.110，4.524，4.784，5.073，5.455，6.221，9.076，10.245，11.494，13.582 及55.944min;在光照破壞條件下主要降解產物在23.626min。且上述各降解產物與主峰均能很好分離，該方法專屬性良好。

2.4 檢測限 精密稱取尼美舒利對照品適量，用適量甲醇溶解并稀釋制成每毫升中含尼美舒利1 mg的溶液。將此溶液逐級稀釋，依法測定，以S/N=3時計算檢測限，測得檢測限為0.30 ng。

2.5 重復性實驗 精密稱取市售樣品力美松(湖北絲寶藥業有限公司，批號:20091001)適量，用適量甲醇溶解并稀釋制成每毫升中含尼美舒利1 mg的溶液，濾過，量取20 μL注入液相色譜儀，連續進樣6次。有關物質的平均含量為0.028%，RSD為4.7%。

2.6 穩定性實驗 精密稱取市售樣品力美松(湖北絲寶藥業有限公司，批號:20091001)適量，用適量甲醇溶解并稀釋制成每毫升中含尼美舒利1 mg的溶液，濾過，分別在 0，2，5，7，24 h 量取 20 μL 注入液相色譜儀。有關物質的平均含量為0.035%，RSD為4.9%。

2.7 樣品的測定 精密稱取本品適量(相當于尼美舒利50 mg)于50mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，作為供試品溶液。取上述溶液1mL至200mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，作為對照溶液。精密量取對照溶液20 μL注入液相色譜儀，調節儀器靈敏度使主成分峰高約為滿量程的20%，再取供試品溶液20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的7倍。供試品溶液的色譜圖中如有雜質峰，單個雜質峰面積不得大于對照溶液中主峰面積(0.1%)，各雜質峰面積之和不得大于對照溶液中主峰面積的5倍(0.5%)。測定結果見表1。

表1 3批樣品中有關物質含量的測定結果 n=3

3 討論

3.1 檢測波長的選擇 將尼美舒利對照品溶液和尼美舒利酸、堿、氧化、光照破壞溶液用DAD檢測器在200～400 nm范圍內掃描，結果發現，在吸收波長230 nm處有最大吸收，且230 nm處檢出的雜質個數最多，故選擇230 nm作為檢測波長。

3.2 流動相比例的選擇 當乙腈-1.15 g·L-1磷酸二氫銨溶液比例小于34∶66時，尼美舒利保留時間＞21min，尼美舒利雜質C出峰時間早于尼美舒利雜質D，且分離度＞2.0;當增大流動相中乙腈的比例時，尼美舒利保留時間稍有提前，尼美舒利雜質D出峰時間早于雜質C，但尼美舒利雜質C和D的分離度＜2.0。故選擇乙腈-1.15 g·L-1磷酸二氫銨溶液(34∶66)為流動相。

3.3 緩沖溶液pH的選擇 流動相的pH對尼美舒利的保留時間影響較大。由于尼美舒利為一弱酸，流動相酸度越低，其組分的K值越大，尼美舒利保留時間越長，當磷酸溶液pH為4.0時尼美舒利保留時間過長，為55.2min，當pH增加到7.0時尼美舒利有適宜的保留時間，并且與其降解產物有較好的分離度。故筆者采用乙腈-1.15 g·L-1磷酸二氫銨溶液(用氨水調pH至7.0)為流動相，在此條件下所有雜質峰與主峰的分離度均＞2.0，且峰形對稱，基線平穩，拖尾因子較低，有關物質能被較好分離檢測。

3.4 系統適用性 《中華人民共和國藥典》2010年版中考察尼美舒利有關物質檢測分析方法的專屬性時，選擇了對氯苯胺與尼美舒利地分離度作為考察指標，其原因可能是兩者的極性大小比較接近，如果所采用的方法能將此兩種物質較好的分離，那么則說明該方法的專屬性好。而《英國藥典》則是選擇尼美舒利雜質C和D的分離度作為考察指標，這兩種雜質結構相似，雜質D的結構比雜質C多一個硝基基團。筆者采用《英國藥典》流動相體系測定對氯苯胺和尼美舒利時，兩者能較好分離。

筆者分別參照了《英國藥典》2009年版和《中華人民共和國藥典》2010年版的方法對尼美舒利膠囊的有關物質進行了研究，結果發現，除了系統適用性研究有明顯差異外，其他條件均無明顯差異。以上實驗結果說明，參照《英國藥典》2009年版和《中華人民共和國藥典》2010年版的方法檢測尼美舒利有關物質，專屬性、靈敏度、重復性均較好，均適用于尼美舒利膠囊有關物質的檢測。

強化破壞實驗結果顯示，尼美舒利膠囊在常溫下穩定，但在氧化、長時間光照條件下會產生分解，應注意避光、密閉保存。

［1］陳永順，呂明，王啟斌，等.尼美舒利緩釋栓的制備與藥動學研究［J］.醫藥導報，2009，28(9):1194－1197.

［2］PAOLO F，MAURO B.Simultaneous determination of nimesulide and hydroxynimesulide in rat plasma，cerebrospinal fluid and brain by liquid chromatography using solid-phase extraction［J］.J Chrom B，2003，785(2):227－236.

［3］CLAUDIO G，ANNA T.Determination of nimesulide and hydroxynimesulide in human plasma by high performance liquid chromatography［J］.Biome Chrom，1998，12(1):50－56.

［4］李燕航，高詠梅.高效液相色譜(HPLC)法測定尼美舒利膠囊有關物質［J］.廣東藥學院學報，2006，20(5):518－520.

［5］英國藥典委員會.英國藥典［M］.倫敦:the Stationery Office，2009:373－376.

［6］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一 部)［M］.北京 :中國醫藥科技出版社，2010:225－226.