益氣活血利水法治療心力衰竭大鼠的作用機(jī)制

劉淑榮 張曉華 于清華 孫 穎 翟 穎 (吉林省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院心病科,吉林 長(zhǎng)春 130021)

心力衰竭(心衰)是臨床常見(jiàn)的一種復(fù)雜的病理狀態(tài),是多種心臟病的終末期表現(xiàn)。心衰的發(fā)病機(jī)制主要為血流動(dòng)力學(xué)異常,神經(jīng)-體液內(nèi)分泌調(diào)節(jié)障礙,細(xì)胞凋亡,細(xì)胞因子異常等方面。心衰屬中醫(yī)的“心痹、怔忡、咳喘、支飲、水腫、虛勞”等病癥的范疇,多病程長(zhǎng),病情纏綿不愈,病位在心,與肺、脾、肝、腎有密切關(guān)系。病初為心氣虛,漸及脾腎,脾腎氣虛,不能運(yùn)化水濕及鼓動(dòng)營(yíng)血,水濕內(nèi)停,瘀血阻絡(luò),形成本虛標(biāo)實(shí)的病理變化。中醫(yī)診治多從本虛標(biāo)實(shí)立論,即心氣虛為本,血瘀水停為標(biāo)。故以益氣、活血、利水為法治療心衰,臨床效果顯著。本實(shí)驗(yàn)復(fù)制心衰動(dòng)物模型,并觀察該法擬定的復(fù)方的治療作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 研究對(duì)象 90只Wistar雄性大鼠,SPF級(jí),購(gòu)自吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心,許可證號(hào):SCXK-(吉)用2003-0001。對(duì)Wistar雄性大鼠在3%戊巴比妥鈉溶液300 mg/kg全麻下行腹主動(dòng)脈縮窄術(shù),造模后4 w進(jìn)行血流動(dòng)力學(xué)檢測(cè)觀察,鑒定慢性心衰模型成功與否。

1.1.2 藥物及儀器 益氣活血利水復(fù)方,黑褐色稠膏,由吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院化學(xué)室提供,實(shí)驗(yàn)時(shí)以蒸餾水配成不同給藥濃度的混懸液,供灌胃給藥。假手術(shù)組和模型組同時(shí)給等體積的蒸餾水;實(shí)驗(yàn)中藥物給藥劑量均以生藥量表示。鹽酸貝那普利片,上海新亞藥業(yè)閔行有限公司生產(chǎn),批號(hào):090301。AngⅡ放免試劑盒,醛固酮放免試劑盒,心鈉素放免分析試劑盒,內(nèi)皮素放免分析試劑盒,乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na),抑肽酶,Powerlab多導(dǎo)生理記錄儀,低速離心機(jī),LD2-A型,GC-20100型 γ免疫計(jì)數(shù)器,ES180-4型分析天平等。

1.2 方法

1.2.1 給藥方法 將造模后的Wistar大鼠飼養(yǎng)4 w,4 w后隨機(jī)取3只大鼠,其中假手術(shù)組大鼠1只,模型組大鼠2只,測(cè)定左室舒張末期壓、左室收縮壓、±dp/dtmax等血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)。確定模型成功后,將大鼠(假手術(shù)組除外)隨機(jī)分為模型組,陽(yáng)性對(duì)照組予藥鹽酸貝那普利片8 mg/kg,益氣活血利水復(fù)方高、中、低 (42、21、10.5 g生藥/kg)三個(gè)劑量給藥組,假手術(shù)大鼠歸為假手術(shù)組。將各組大鼠按相應(yīng)劑量連續(xù)給藥6 w,每日一次,假手術(shù)組和模型組同時(shí)給予同體積的蒸餾水15 ml/kg(益氣活血利水復(fù)方以下簡(jiǎn)稱試藥)。

1.2.2 血流動(dòng)力學(xué)、左心指數(shù)的測(cè)定 大鼠末次給藥1 h后,稱重,以烏拉坦1.2 g/kg腹腔注射麻醉,固定于手術(shù)臺(tái)上。將充滿3%肝素鹽水的硬膜外麻醉管經(jīng)三通管與壓力換能器與八道生理記錄儀相連接,排出管中所有氣泡,大鼠取頸正中縱行切口,長(zhǎng)約2～3 cm,鈍性分離筋膜肌間膜,至右頸總動(dòng)脈。游離出2 cm左右的右頸總動(dòng)脈。先結(jié)扎游離出來(lái)右頸總動(dòng)脈的遠(yuǎn)心端,再用動(dòng)脈夾夾住近心端。在遠(yuǎn)心端結(jié)扎線的下方用眼科剪將動(dòng)脈壁剪一小口,將已經(jīng)充滿肝素生理鹽水的硬膜外麻醉管自動(dòng)脈壁小口向近心端插入,進(jìn)入一定距離后在近心端用絲線將右頸總動(dòng)脈和插入其中的硬膜外麻醉管一起勒緊固定,松開(kāi)動(dòng)脈夾,則顯示波形為動(dòng)脈壓,穩(wěn)定數(shù)分鐘后,記錄動(dòng)脈波形,同時(shí)記錄心電圖。記錄完畢后繼續(xù)順著血管的方向推入硬膜外麻醉管,大約推入4.5～5 cm,進(jìn)入左心室,此時(shí)屏幕上顯示為波形高大的室內(nèi)壓波。穩(wěn)定數(shù)分鐘后記錄波形,同時(shí)記錄收縮期左心室內(nèi)壓下降最大變化速率(+dp/dtmax)和舒張期左心室內(nèi)壓最大變化速率(-dp/dtmax)。同時(shí)將大鼠處死,取心臟稱重,并分離左心室稱重,計(jì)算臟器指數(shù)及左心指數(shù)〔1〕。

1.2.3 血漿AngⅡ、醛固酮、心鈉素、內(nèi)皮素測(cè)定 記錄完畢,取血,采用核放射免疫法檢測(cè)血中的AngⅡ、醛固酮、心鈉素、內(nèi)皮素,將大鼠血漿低溫離心后取上清測(cè)定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以±s表示,相關(guān)資料進(jìn)行t檢驗(yàn)及相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1 對(duì)心衰大鼠左室舒張末期壓、左室收縮壓、±dp/dtmax的影響 與模型組大鼠比較,陽(yáng)性藥鹽酸貝那普利可升高+dp/dtmax、-dp/dtmax,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;可升高左室收縮壓,降低左室舒張末期壓,但無(wú)顯著性差異。試藥高劑量組可升高心衰動(dòng)物 ±dp/dtmax、左室收縮壓,降低左室舒張壓,均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。試藥中劑量組可升高心衰動(dòng)物 +dp/dtmax、-dp/dtmax、降低左室舒張壓,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。試藥低劑量組可升高心衰動(dòng)物 +dp/dtmax,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;雖也可升高-dp/dtmax、左室收縮壓,降低左室舒張壓,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。陽(yáng)性藥與試藥高中低劑量組比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。見(jiàn)表1。

2.2 對(duì)心衰大鼠心臟指數(shù)和左心指數(shù)的影響 與假手術(shù)組相比,模型組動(dòng)物心臟指數(shù)和左心指數(shù)明顯增大。與模型組大鼠相比,陽(yáng)性藥、試藥高、中、低劑量組均可降低心衰大鼠心臟指數(shù)和左心指數(shù),有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;其中試藥中劑量能明顯降低動(dòng)物的左心指數(shù),有極顯著差異。陽(yáng)性藥與試藥高、中、低劑量組比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。見(jiàn)表2。

2.3 對(duì)心衰大鼠血漿中 AngⅡ、醛固酮、心鈉素、內(nèi)皮素的影響 與假手術(shù)組相比,模型組動(dòng)物血漿中AngⅡ、醛固酮、心鈉素、內(nèi)皮素含量均增高;與模型組大鼠相比,陽(yáng)性藥及試藥高劑量組可降低血漿中AngⅡ、醛固酮、心鈉素、內(nèi)皮素含量,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,但兩者比較無(wú)差異;試藥中、低劑量組可降低血漿中AngⅡ、醛固酮、心鈉素含量,尤其對(duì)降低醛固酮濃度作用明顯,但對(duì)內(nèi)皮素影響無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表3。

表1 對(duì)心衰大鼠左室舒張末期壓、左室收縮壓、±dp/dtmax的影響( ±s,n=7)

表1 對(duì)心衰大鼠左室舒張末期壓、左室收縮壓、±dp/dtmax的影響( ±s,n=7)

與模型組比較:1)P＜0.05,2)P＜0.01,3)P＜0.001;下表同

組別 左室舒末壓(mmHg)左室收縮壓(mmHg)+dp/dtmax(mmHg/s)-dp/dtmax(mmHg/s)假手術(shù)組 5.58±0.95 3)111.04±8.061)3 190.51±29.503)2 989.11±168.583)模型組 10.63 ±1.12 100.33±7.36 2 042.39±377.59 1 945.27±157.20陽(yáng)性藥 9.2±1.37 104.43±8.59 2 582.40±350.971)2 290.60±173.071)試藥高劑量8.07±1.89 2)108.6±6.741)2 799.26±321.682)2 298.79±196.881)試藥中劑量8.98±1.09 1)107.5±4.36 2 477.02±260.961)2 369.07±190.883)試藥低劑量 9.25±1.28 98.67±13.14 2 181.50±306.391)1 989.30±200.52

表2 心衰試藥對(duì)心衰大鼠心臟指數(shù)和左心指數(shù)的影響(±s,n=10)

表2 心衰試藥對(duì)心衰大鼠心臟指數(shù)和左心指數(shù)的影響(±s,n=10)

組別 心臟指數(shù)(%) 左心指數(shù)(%)假手術(shù)組 0.332±0.040 3) 0.229±0.0233)模型組 0.463±0.529 0.320±0.032陽(yáng)性藥組 0.401±0.052 1) 0.287±0.0361)試藥高劑量 0.394±0.072 1) 0.271±0.0641)試藥中劑量 0.388±0.063 1) 0.265±0.0273)試藥低劑量 0.412±0.046 1) 0.294±0.0181)

表3 對(duì)心衰大鼠血中AngⅡ、醛固酮、心鈉素、內(nèi)皮素含量的影響±s,n=7)

表3 對(duì)心衰大鼠血中AngⅡ、醛固酮、心鈉素、內(nèi)皮素含量的影響±s,n=7)

組別 AngⅡ(pg/ml) 醛固酮(ng/ml) 心鈉素(ng/ml) 內(nèi)皮素(pg/ml)假手術(shù)組 1 374.3±71.76 2) 0.596 ±0.31412) 0.636±0.06161) 155.8±38.24 1)模型組 1 529.8 ±105.46 1.134 ±0.1641 0.989 ±0.318 205.42 ±38.71陽(yáng)性藥組 1 373.3±135.88 1) 0.674 ±0.39631) 0.560±0.13381) 162.19±35.01 1)試藥高劑量 1 365.0±95.12 2) 0.886±0.11701) 0.599±0.05371) 165.43±23.31 1)試藥中劑量 1 314.2±180.02 1) 0.667±0.31872) 0.591±0.04331) 176.33±34.60試藥低劑量 1 404.8±79.84 1) 0.654±0.34022) 0.646±0.13761) 174.89±31.23

3 討 論

心力衰竭是各種心臟結(jié)構(gòu)或功能性疾病導(dǎo)致心室充盈及(或)射血能力受損而引起的一組綜合征,其發(fā)病率高,5年存活率與惡性腫瘤相仿。中醫(yī)認(rèn)為心衰乃五臟精氣衰微的危重病證,屬多臟同病,整體衰竭,但以心為主,病因雖多,但其病機(jī)最終歸結(jié)于氣虛(心脾腎)血瘀(肺肝)水結(jié)(肺脾腎)。治療從整體調(diào)節(jié)出發(fā),改善心功能,標(biāo)本兼治,選用人參、黃芪、五加皮、丹參、川芎、莪術(shù)、葶藶子、桑白皮、白茅根、車前子等中藥,起到益氣化瘀、利水消腫之功效。

心力衰竭從發(fā)病的急緩方面來(lái)說(shuō),分為急性心衰和慢性心衰,急性心衰是因急性的嚴(yán)重心肌損害或突然加重的心臟負(fù)荷發(fā)病,是心功能正常或處于代償期的心臟在短時(shí)間內(nèi)發(fā)生衰竭或使慢性心衰急劇惡化。慢性心衰有一個(gè)緩慢的發(fā)展過(guò)程,一般均有代償性心臟擴(kuò)大或肥厚及其他代償機(jī)制參與。本次實(shí)驗(yàn)對(duì)大鼠進(jìn)行腹主動(dòng)脈縮窄術(shù),最終導(dǎo)致壓力超負(fù)荷型心力衰竭型,為克服增高的外周血管阻力,心室肌代償性肥厚以保證射血量,持久的負(fù)荷過(guò)重,心肌必然發(fā)生結(jié)構(gòu)和功能改變而最終至失代償,心排血量下降,最終引起血流動(dòng)力學(xué)及神經(jīng)內(nèi)分泌因子的代謝異常。心衰試藥高、中、低劑量對(duì)腹主動(dòng)脈縮窄后的大鼠血流動(dòng)力學(xué)、心臟指數(shù)、左心指數(shù)、血漿中AngⅡ、醛固酮、心鈉素、內(nèi)皮素含量均有改善作用,以高、中劑量明顯,提示益氣活血利水法可以改善心衰大鼠的血流動(dòng)力學(xué),減輕心衰大鼠的心室肥厚,抑制心肌纖維化,拮抗神經(jīng)體液因子的過(guò)度激活,降低血中的 AngⅡ、醛固酮、心鈉素、內(nèi)皮素的含量可能是其抑制慢性心衰進(jìn)程的機(jī)制之一。

1 徐叔云,卞如濂,陳 修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)〔M〕.第3版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2002:15-79.