山楂葉總黃酮對缺血性腦卒中活血化瘀作用研究*

胡敏 張曉丹 涂映 陳敏 萬云輝

（江西護理職業技術學院 南昌330029）

心腦血管疾病是目前發病率最高、對人類健康威脅最為嚴重的疾病之一。山楂葉總黃酮（flavone mixture of crataegus leaves，FMCL）為花期山楂葉中提取的抗自由基組分，淺棕色至黃色粉末，味澀微苦，含黃酮苷類、葡荊牡黃酮、葒草素、異葒草素、山楂納酰及去乙酰山楂納酰等。已有研究證實山楂葉總黃酮具有擴張冠狀動脈、降血壓、強心、降血脂等心血管方面的作用[1]。我們采用血瘀大鼠實驗模型，觀察山楂葉總黃酮對血栓形成、血小板聚集、全血和血漿黏度的影響，探討山楂葉總黃酮通過改善凝血狀態發揮其腦保護作用的機理，為其進一步深入研究和開發提供了理論依據。

1 材料與方法

1.1 藥品及試劑 注射用山楂葉總黃酮（益心酮注射液）批號：090510，由長春三九生物制藥提供；舒血寧注射液(銀杏葉提取物注射液)萬榮三九藥業有限公司提供，批號090620。

1.2 動物 Wistar大鼠，由南昌大學實驗動物部提供。

1.3 儀器 CNOOOO5256型6010紫外分光光度計（安捷倫分析儀器）；GF-D200型半自動生化分析儀（山東高密彩虹分析儀器有限公司）；BV-100型血液流變測試儀，北京泰諾德新技術研究所；D-37520型超速冷凍離心機，德國索孚。

1.4 分組及造模 取60只雄性大鼠，體重280～300 g，按體重隨機分為六組，每組10只，分別為：空白對照組、血瘀模型組、陽性對照組（注射舒血寧注射液0.9 mL/kg）、山楂葉總黃酮高劑量組（60 mg/kg）、山楂葉總黃酮中劑量組（30 mg/kg）、山楂葉總黃酮低劑量組（15 mg/kg）。陽性對照組及山楂葉總黃酮高、中、低劑量組連續給藥7 d，空白對照組及模型組腹腔注射等劑量的生理鹽水。于末次給藥30 min后，造血瘀模型。造模方法：皮下注射0.1%腎上腺素0.07 mL/100 g，共兩次，每次間隔4 h，并在此兩次間（前后各2 h）將大鼠浸入冰水中5 min，然后動物禁食不禁水[2]。空白對照組動物不造血瘀模型。

1.5 觀察及檢測指標

1.5.1 血瘀大鼠的全血黏度和血漿黏度的測定造模后次晨，動物腹腔注射水合氯醛350 mg/kg麻醉，腹主動脈取血，肝素抗凝置血液黏度計上測定不同切變率時的全血黏度。上述抗凝血測完全血黏度所余血液以2 000 r/min離心10 min，取上清測血漿黏度。

1.5.2 血瘀大鼠體內血栓形成時間的測定 麻醉后將大鼠固定于固定臺上，切開頸部皮膚，分離右側頸總動脈約15 mm，將實驗性體內血栓形成測定儀的刺激電極及溫度傳感器探頭置于動脈上，用2 mA的電流刺激血管7 min以損傷動脈內皮細胞，隨著動脈管腔內血栓逐漸形成，血流逐漸被阻斷，動脈遠端溫度逐漸下降，當血流完全阻斷時，溫度突降，儀器報鳴，此時儀器顯示時間即為體內血栓形成時間。

1.5.3 ADP誘導的血小板聚集率的測定 取50只雄性大鼠，體重200～220 g，隨機分為五組（每組10只）：空白對照組（給予生理鹽水），陽性對照組（阿司匹林7.0 mg/kg），山楂葉總黃酮高、中、低劑量組連續給藥7 d。末次給藥后禁食不禁水12～18 h，腹腔注射水合氯醛350 mg/kg麻醉，腹主動脈取血注入放有枸櫞酸鈉溶液的硅化離心管中（枸櫞酸鈉與血比例1:9），將血液與抗凝劑混合后1 000 rpm離心10 min，得富血小板（PRP），然后再3 000 rpm離心15 min，得貧血小板（PPP）。于血小板聚集儀上測定ADP誘導的血小板最大聚集率。

1.6 統計學分析 采用SPSS 11.5 for windows統計軟件包分析數據，所有數據均表示為均值±標準差(±S)，采用t檢驗法進行顯著性檢驗，P＜0.05為差異具有統計學意義，P＜0.01為差異具有顯著統計學意義。

2 結果

2.1 山楂葉總黃酮對血瘀大鼠全血黏度及血漿黏度的影響 與空白對照組比較，模型組全血高、中、低切黏度均明顯增加（P＜0.01或P＜0.001），表明血瘀模型成立。與模型組比較，陽性對照組及山楂葉總黃酮大劑量、中劑量組的全血黏度均有所下降，陽性對照組和山楂葉總黃酮組的血漿黏度也有所下降。見表1。

表1 山楂葉總黃酮對血瘀大鼠全血黏度與血漿黏度的影響 (±S) mPa·s

表1 山楂葉總黃酮對血瘀大鼠全血黏度與血漿黏度的影響 (±S) mPa·s

注：與模型組比較，*P ＜0.05，**P ＜0.01；與空白對照組比較，△P ＜0.001，△△P ＜0.01。

全血黏度組別 n 劑量(mg/kg)血漿黏度9/s 30/s 100/s空白對照組 10 － 6.03±1.88 4.71±0.66 3.66±0.35 0.85±0.09模型組 10 － 10.16±2.13△ 6.83±1.00△△ 5.15±0.36△△ 1.13±0.14陽性對照組 10 0.9 mL/kg 7.28±1.48** 5.53±0.45* 4.04±0.22* 1.01±0.21*10 60 8.31±1.59** 5.77±0.52* 4.15±0.43** 1.02±0.12*山楂葉總黃酮組 10 30 8.62±1.00* 5.97±0.7 4.43±0.40 1.09±0.10*10 15 8.79±1.21 6.52±0.34 4.55±0.68 1.10±0.08

2.2 山楂葉總黃酮對血瘀大鼠體內血栓形成時間的影響 與空白對照組比較，模型組血栓形成時間明顯縮短（P＜0.001）。與模型組比較，陽性對照組及山楂葉總黃酮大、中劑量組均能明顯延長體內血栓的形成時間，山楂葉總黃酮小劑量組也能延長血栓形成時間，但無統計學意義。見表2。

表2 山楂葉總黃酮對血瘀大鼠體內血栓形成時間的影響 (±S)

表2 山楂葉總黃酮對血瘀大鼠體內血栓形成時間的影響 (±S)

注：與空白對照比較，△P＜0.001；與模型組比較，*P ＜0.05，**P ＜0.01。

組別 n 劑量(mg/kg) 體內血栓形成時間（min）空白對照組 10 － 13.51±2.15模型組 10 － 10.15±1.31△陽性對照組 10 0.9 mL/kg 12.90±2.31**10 60 12.01±1.34**山楂葉總黃酮組 10 30 11.85±1.66*10 15 11.36±1.50

2.3 山楂葉總黃酮對大鼠血小板聚集率的影響與空白對照組比較，陽性對照組可以明顯抑制血小板聚集，山楂葉總黃酮大劑量和中劑量對血小板的聚集也有一定程度的降低。見表3。

表3 山楂葉總黃酮對大鼠血小板聚集率的影響 (±S)

表3 山楂葉總黃酮對大鼠血小板聚集率的影響 (±S)

注：與空白對照組比較，*P＜0.05，**P ＜0.01。

組別 n 劑量(mg/kg) 血小板聚集率（%）空白對照組 10 － 67.33±11.86陽性對照組 10 0.9 mL/kg 49.22±15.01**10 60 52.41±7.96*山楂葉總黃酮組 10 30 57.53±9.07*10 15 61.25±9.24

3 討論

中醫理論認為，缺血性中風的發展演變主要是由于瘀血痹阻腦脈并進一步派生出痰飲、風熱、瘀毒等病理毒素，從而加劇腦脈病變，閉塞不通從而引發或加重各種臨床癥狀，甚至成為不可逆的腦缺血損傷[3]。血液流變學的研究內容涵蓋了血栓形成的三種要素：血液成分、血液狀態和血管壁狀況，因此與缺血性腦血管病有著密切的聯系。血液流變學因素與血液的高凝狀態和腦血流灌注不良有關，大多數的腦缺血患者血液流變學各項指標異常。隨著病情的好轉，腦缺血患者的血液流變學各項指標也逐漸好轉。在血液流變學中，全血黏度是反映血液流變性的一個重要指標，患者腦缺血后全血黏度和血漿黏度皆升高，尤其全血黏度低切升高更為顯著[4～5]。說明全血黏度對臨床診斷缺血性腦血管病及判斷其嚴重程度具有重要意義。腦缺血時，由于腦組織的缺血缺氧，造成腦內能量物質的缺乏，細胞膜的流動性下降，膜的脂質過氧化作用增強，紅細胞變形性下降，在毛細血管內的流動性降低，血流速度減慢，紅細胞聚集，最終導致血黏度上升，血流淤滯，引起一系列病理變化。除了紅細胞的作用外，血小板的粘附和聚集增強也可造成血黏度的上升。有研究顯示[6]血小板功能變化是腦梗死發病的因素之一，還是造成腦梗死之后缺血性加重的主要原因之一。Uchiyama[7]報道腦梗死、一過性腦缺血患者不僅血小板粘附性、聚集性增加，而且參與粘附反應的凝血因子增多，因此認為血小板的高反應性（粘附、聚集、釋放增強）與缺血性腦血管病的發生有關。本實驗結果顯示山楂葉總黃酮高、中劑量對ADP誘導的血小板聚集有一定的抑制作用，表明山楂葉總黃酮有降低血小板聚集、抗血栓形成的作用。綜上所述，山楂葉總黃酮對缺血性腦卒中具有保護作用，其機制是通過降低血黏度、抑制血小板聚集實現的。

[1]董英杰,張乃先,張明壘.大果山楂葉黃酮成分研究[J].沈陽藥科大學學報,1996,13(1):31

[2]徐叔云,卞如濂,陳修.藥理實驗方法學[M].第 3 版.北京:人民衛生出版社,2002.1 042

[3]胡國恒,祝美珍.活血化瘀法防治腦缺血損傷的理論探討[J].中華中醫藥雜志,2008,23(6):514-515

[4]王援朝,徐貴燕,戴惠婷,等.耳針治療大鼠實驗性缺血性中風癥的研究[J].中國針灸,2001,21(4):235-236

[5]王健,胡健鵬.缺血性中風氣虛血瘀證動物模型的初步研究[J].安徽中醫學院學報,1999,18(2):46-48

[6]張新江,周大柱.血小板形態變化與腦梗死[J].國外醫學·腦血管疾病分冊,1997,5(4):197

[7]Uchiyama S,Takeuchi M,Osawsa M,et al.Platelet function tests in thromboic cerebrovascular disorders[J].Stroke,1983,14(4):511-517