高效液相色譜法測定鹽酸巴尼地平相關物質

萬 瓊 唐永豐 劉云華

（1 湖北百科亨迪藥業有限公司，湖北 荊門 448000；2 湖北荊門第二人民醫院藥劑科，湖北 荊門 448000）

鹽酸巴尼地平（Barnidipine hydrochloride）化學名hydrochloride，（s-（r*，r*）-hyl1-（phenylmethyl）-3-pyrrolidinyleste，本品為強效、長效二氫吡啶類鈣拮抗劑抗高血壓藥。具有較強的抑制鈣離子內流，使細胞中鈣離子減少，從而使血管松弛、擴張，降低外周血管阻力而發揮顯著的降壓作用。用于輕、中、重度高血壓的治療。在合成過程中可能引入相關的雜質，本文采用HPLC法對相關的雜質進行檢測，以保證產品的質量[1]。所用的分析方法靈敏、準確、可靠。

1 儀器與試藥

Agilent1100液相色譜儀，Agilent 色譜工作站，磷酸二氫鉀（AR）、磷酸（AR）、甲醇（色譜級）、鹽酸巴尼地平消旋體（雜質）、鹽酸巴尼地平對映體（雜質）、S-1-芐基-3-羥基吡咯烷（雜質）、右旋單羧酸酯（雜質），鹽酸巴尼地平對照品，鹽酸巴尼地平樣品。

2 實驗方法及結果

2.1 色譜條件及溶液

2.1.1 Agilent1100液相色譜條件

色譜柱：C18（4.6mm×150mm×5μm），檢測器：紫外檢測器，流動相：0.03mol/L磷酸二氫鉀緩沖液（用磷酸調pH值為4.0）-甲醇（50∶50），進樣量：10μL，流動相流速：1.25mL/min，波長：238nm，柱溫：室溫。

2.1.2 溶液的制備

專屬性溶液：分別稱取鹽酸巴尼地平樣品、鹽酸巴尼地平對映體、S-1-芐基-3-羥基吡咯烷、右旋單羧酸酯適量置4個量瓶中加流動相溶解得到濃度分別為25.17μg/mL、19.96μg/mL、1018μg/mL、7.74μg/mL的溶液。

對照品溶液-取鹽酸巴尼地平對照品適量用流動相制成濃度為524.8μg/mL的溶液。對照品對照溶液-精密移取對照品溶液1mL至100mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度制成濃度為5.248μg/mL的溶液。

定量檢測限貯備溶液：稱取鹽酸巴尼地平對照品適量置量瓶中，加流動相溶解，并稀釋至刻度制成濃度為480.2μg/mL溶液。

線性溶液配制：稱取鹽酸巴尼地平適量用流動相制成濃度為50.378μg/mL的溶液。再分別量取上述溶液1mL、3mL、5mL、10mL、12mL分別置5個100mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度搖勻，制成濃度分別為0.504μg/mL、1.511μg/mL、2.519μg/mL、5.038μg/mL、6.045μg/mL的溶液。

回收率溶液的配制：稱取鹽酸巴尼地平對照品適量用流動相制成濃度為50.346μg/mL溶液，再分別量取上述溶液1mL、3mL、10mL分別置3個100mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度搖勻，制成濃度分別為0.503μg/mL、1.510μg/mL、5.035μg/mL的溶液。

樣品溶液的制備：取鹽酸巴尼地平樣品約0.025g，精密稱定，分別置50mL的量瓶中，用流動溶解并稀釋至刻度，制成濃度約為500μg/mL的溶液。

樣品對照液的制備：量取鹽酸巴尼地平樣品溶液1mL置100mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度搖勻，制成濃度為5μg/mL的溶液。

2.2 專屬性試驗

將流動相進樣一針，無干擾。進四種專屬性溶液，各物質的保留時間分別為：鹽酸巴尼地平15.108min、對映體17.225min、S-1-芐基-3-羥基吡咯烷4.184min、右旋單羧酸酯9.307min，各物質不存在干擾或重合。

2.3 系統適用性試驗

在上述試驗條件下，取對照品對照溶液進樣5針，鹽酸巴尼地平峰面積RSD為0.93%，巴尼地平計算理論塔板數為：7716，拖尾因子1.1，鹽酸巴尼地平與最近雜質峰之間的分離度2.85，能夠完全分離和達到檢測要求。

2.4 定量檢測限

取定量檢測限貯備溶液逐級稀釋，按照上述試驗條件，當信噪比S/N=10時，平行測定6次，即鹽酸巴尼地平的定量檢測限為0.336μg/mL（相對于鹽酸巴尼地平樣品0.07%），RSD為3.47%。

2.5 檢測限

取定量檢測限貯備溶液逐級稀釋，按照上述試驗條件，當信噪比S/N=3時，平行測定3次，即鹽酸巴尼地平的定量檢測限為0.101μg/mL（相對于鹽酸巴尼地平樣品0.02%）。

2.6 線性范圍

在上述試驗條件下，相同濃度溶液平行測定2次。分別以鹽酸巴尼地平濃度為橫坐標（X），以鹽酸巴尼地平峰面積為縱坐標（Y），進行線性回歸，結果表明在各濃度范圍內線性關系良好。見表1。

表1 回歸方程與線性范圍試驗結果（n=5）

2.7 回收率試驗

在上述試驗條件下測定，根據對照品對照溶液5針鹽酸巴尼地平峰面積的平均值和鹽酸巴尼地平濃度進行計算，結果見表2。

2.8 溶液的穩定性

取鹽酸巴尼地平樣品溶液，以24h、48h分別連續進樣，單雜質和總雜質檢測結果沒有增加，且沒有出現新的雜質峰，溶液放置2d是穩定的。

2.9 樣品測試

取各批次供試品，按上述試驗條件進行測定，結果見表3。

表2 回收率試驗表

表3 樣品測試表

3 討 論

波長的選擇：鹽酸巴尼地平在紫外區的最大吸收波長為238nm，因此選擇238nm作為檢測波長。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].北京:中國醫藥科技出版社,2010.