RP-HPLC測定鹽酸卡替洛爾骨架緩釋微丸的含量及有關物質

張 賀 羅永煌 田翠翠 戈振凱 張玉潔 羅玲艷

（西南大學藥學院，重慶 400715）

鹽酸卡替洛爾（Carteolol Hydrochloride）最早由日本大冢制藥株式會社于1972年研制成功，1991年收載于日本第十二版藥局方[1]，劑型有片劑、顆粒劑、滴眼劑和緩釋膠囊劑等。中國藥典從2000年版開始收載鹽酸卡替洛爾，目前僅有滴眼劑上市。在日本、美國等，鹽酸卡替洛爾已廣泛用于高血壓、心律失常、心絞痛、心肌梗死以及心臟神經癥（Cardiac Neurosis）和小兒法洛四聯癥（Congenital Fetralogy of Fallot）等的治療[2,3]，是國外目前唯一一個上市的用于治療心臟神經癥的β受體阻斷劑，有效率可達73%以上[4]。本課題組與重慶市北碚現代應用藥物研究所合作，研發了鹽酸卡替洛爾骨架緩釋微丸，該緩釋微丸能夠實現藥物12h內緩慢釋放，提供平穩的血藥濃度，減少服藥次數，提高患者的依從性。迄今為止，國內外未見鹽酸卡替洛爾骨架緩釋微丸的研究報道，僅有本課題組申請的鹽酸卡替洛爾緩釋微丸專利[5]。

2010年版中國藥典采用電位滴定法測定鹽酸卡替洛爾原料藥的含量，采用紫外-可見分光光度法測定鹽酸卡替洛爾滴眼液含量[6]，本文參照美國藥典對鹽酸卡替洛爾普通片的含量測定方法[7]，建立了RPHPLC測定鹽酸卡替洛爾骨架緩釋微丸含量及有關物質的方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀（SPD-M20A檢測器，LC-20AD泵，日本島津公司）；PHS-3C型酸度計（上海虹益儀器儀表有限公司）；藥品強光照射實驗箱（重慶市永興實驗儀器廠）；HitachiU-1800型紫外分光光度計（日本Hitachi公司）。

1.2 試藥

鹽酸卡替洛爾工作對照品（重慶北碚現代應用藥物研究所，含量99.86%，批號：100801）；鹽酸卡替洛爾骨架緩釋微丸（自制，批號為110701、110702和110703）；乙腈為色譜純（天津四友精細化學品有限公司）；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：VP-ODSC18柱（4.6mm×150mm，4.6μm）；流動相：0.067%的Na2HPO4溶液（H3PO4調節pH至3.0）-乙腈（87∶13）；流速：1mL/min；檢測波長：251nm；柱溫30℃。進樣量：20μL；進樣前過0.22μm的微孔濾膜。理論板數按鹽酸卡替洛爾峰計算不低于3000，分離度＞1.5，鹽酸卡替洛爾色譜圖，見圖1。

圖1 鹽酸卡替洛爾色譜圖

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液

精密稱取鹽酸卡替洛爾工作對照品適量，加流動相溶解并定容制成0.1mg/mL溶液，精密量取5mL置50mL容量瓶中，用流動相定容，搖勻，即為對照品溶液（10μg/mL）。

2.2.2 供試品溶液

取鹽酸卡替洛爾緩釋微丸，研細，精密稱定約相當于10mg鹽酸卡替洛爾的粉末，置100mL容量瓶中，加流動相適量，機械振搖1h，再以流動相定容至刻度，搖勻，過濾，從續濾液中精密量取10mL置于100mL容量瓶中，用流動相定容至刻度，搖勻，即為供試品溶液。

2.2.3 空白輔料溶液

按處方比例稱取輔料制成空白微丸，照“2.2.2”項下方法制備空白輔料溶液。

2.3 專屬性試驗

稱取鹽酸卡替洛爾緩釋微丸粉末適量，配制濃度為500μg/mL樣品溶液，量取樣品溶液5mL，分別經2mL的30%過氧化氫溶液（室溫放置3h），4500Lx±500Lx光照12h，2mL的1mol/L氫氧化鈉溶液100℃水浴加熱3h，2mL的1mol/L鹽酸溶液100℃水浴加熱3h，100℃水浴加熱3h處理，作為氧化破壞、光破壞、堿破壞、酸破壞和高溫破壞溶液。照“2.1”項下色譜條件測定其含量，記錄色譜圖。結果，鹽酸卡替洛爾在高溫、強光照射、酸性條件下較穩定；在氧化、堿性條件下有降解產物出現，其色譜圖，見圖2。

圖2 鹽酸卡替洛爾骨架緩釋微丸破壞性試驗色譜圖

2.4 線性關系考察

按“2.2.1”項下方法配制2、4、10、20、40μg/mL 5個不同濃度的對照品溶液，以濃度（μg/mL）為X軸，以峰面積為Y軸，繪制標準曲線。結果，鹽酸卡替洛爾濃度在2～40μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。線性回歸方程為：Y=33419X+4040.5，r=0.9998。

2.5 日內精密度

精密吸取對照品溶液20μL，注入液相色譜儀，連續進樣6次，按鹽酸卡替洛爾峰面積計算RSD為0.09%。

2.6 重復性

按“2.2.2”方法配制6份10μg/mL樣品溶液，濾過，進樣，記錄色譜圖，鹽酸卡替洛爾峰面積的RSD為0.68%。

2.7 回收率試驗

稱取處方量鹽酸卡替洛爾骨架緩釋微丸空白輔料3份，分別加入鹽酸卡替洛爾對照品40mg、50mg、60mg，混合均勻后，研細，分別稱取細粉適量至100mL量瓶中，加流動相適量，機械振搖1h，再定容至刻度，使其濃度分別為0.4mg/mL、0.5mg/mL和0.6mg/mL，過濾，取續濾液作為待測溶液，在上述色譜條件下，進樣測定，測得鹽酸卡替洛爾3種濃度的回收率（n=3）分別為101.2%（RSD=0.35%）、101.1%（RSD=0.41%）、101.4%（RSD=0.32%），平均回收率（n=9）為101.2%（RSD=0.36%）。

2.8 樣品溶液穩定性

取同一批供試品溶液，分別于0、4、8、12、18、24h進樣20μL測定峰面積，RSD為0.16%，結果表明樣品溶液在室溫條件下，24h內基本穩定。

2.9 最低檢測限和最低定量限

取“2.2.1”項下對照品溶液，加流動相不斷稀釋，記錄峰面積，在信噪比S/N為3∶1測得最低檢出限為0.4ng，在信噪比S/N為10∶1測得最小定量限為1.6ng。

2.10 樣品含量測定

取3批樣品，每批三份，照“2.2”項下方法制備供試品溶液及對照品溶液，分別進樣20μL，記錄色譜圖。按外標法以峰面積計算鹽酸卡替洛爾的含量。結果，見表1。

表1 鹽酸卡替洛爾骨架緩釋微丸含量及有關物質測定結果（%，n=3）

2.11 有關物質檢查

精密稱取鹽酸卡替洛爾骨架緩釋微丸細粉適量（約相當于鹽酸卡替洛爾50mg），照“2.2.2”項下方法制成0.5mg/mL的溶液作為供試品溶液，將供試品溶液用流動相稀釋100倍，作為1%的自身對照液。分別吸取上述兩種溶液各20μL注入液相色譜儀，計算除鹽酸卡替洛爾以外的各雜質峰面積總和，并與對照液主成分峰面積比較，以不加校正因子的自身對照法計算總雜質含量，3批樣品的有關物質含量均低于0.2%，符合藥典相關要求，結果見表1，色譜圖，見圖3。

圖3 鹽酸卡替洛爾骨架緩釋微丸有關物質色譜圖

3 討 論

3.1 檢測波長的選擇

照2.2.1項下配置鹽酸卡替洛爾10μg/mL的溶液，以溶劑為空白，在400～200nm波長范圍內測定紫外吸收光譜。根據測定結果可知鹽酸卡替洛爾在215nm和251nm 波長處均有最大吸收，分別以215nm和251nm作為檢測波長，發現在251nm波長處雜質峰與主峰分離良好，且能避免溶劑的末端吸收，故選用251nm作為檢測波長。

3.2 穩定性

鹽酸卡替洛爾在強氧化條件下不穩定，在堿性條件下會產生少量雜質；在酸性、高溫和強光照射條件下比較穩定。因此，鹽酸卡替洛爾原料藥及其制劑在使用和儲存過程中，應避免強氧化和強堿性環境。

3.3 有關物質

2010年版中國藥典采用薄層色譜法，對鹽酸卡替洛爾原料藥進行有關物質檢查，規定有關物質不得超過0.2%；英國藥典[8]采用高效液相色譜法對鹽酸卡替洛爾原料藥和滴眼劑進行了有關物質檢查。本文對3批鹽酸卡替洛爾骨架緩釋微丸進行了總有關物質考察，結果顯示，3批樣品有關物質總量均小于0.2%，符合2010年版中國藥典對鹽酸卡替洛爾原料藥有關物質的控制要求。

[1]Kikuchi T,Uwahodo Y,Tottori K,et al.The attenuating effect of carteolol hydrochloride,a β-adrenoceptor antagonist,on neurolepticinduced catalepsy in rats[J].Psychopharm,1997,131(2):108-114.

[2]黃賢勝,宮春明,趙紅蓮,等.心血管神經癥診治進展[J].中西醫結合心腦血管病雜志,2001,8(1):93-95.

[3]劉永欣.了解心臟神經癥[J].中國臨床醫生雜志,2008,36(3):40.

[4]Ohtsuka pharmaceutical CO.Specif i cations of carteolol hydrochloride tablets[Z].2008,10.

[5]羅永煌,喬彥茹,聶延君,等.鹽酸卡替洛爾微丸及其制備方法與制劑[P].中國:101690718,2010-04-07.

[6]國家藥典委員會.中國人民共和國藥典2010版第二部[S].北京:化學工業出版社,2010:661.

[7]The United States Pharmacopeial Conventio.USA Pharmacopoeia(USP32–NF27).Carteolol Hydrochloride Tablets[S].USP32-NF27:1810.

[8]British Pharmacopoeia2009 (英國藥典2009).Carteolol Hydrochlo ride[S].2009:1080.