手足口病危重型患兒淋巴細胞亞群及免疫球蛋白檢測

莫 揚

莫 揚

湖北省襄陽市中心醫院檢驗科，襄陽441021

本文2011－09－19收到，2011－10－25修回，2011－10－28接受

手足口病是由腸道病毒引起的急性傳染病，以柯薩奇病毒A組16（Cox A16）型和腸道病毒71（EV71）型多見，多發生于學齡前兒童，尤以3歲以下發病率最高，為小兒常見的傳染病，患者和隱性感染者為傳染源，主要通過消化道、呼吸道和密切接觸等途徑傳播。病毒進入人體后在腸壁細胞中增殖，增殖后可侵入血流，形成病毒血癥，在易被壓迫的部位如手、足血流中游離出來，再在這些部位的細胞中增殖并引起病變［1］。本文對60例手足口病危重型患兒進行外周血淋巴細胞亞群及免疫球蛋白檢測，以探討手足口病患兒免疫功能變化，為臨床治療提供實驗室依據。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

按照衛生部醫政司發布的《手足口病診療指南（2010年版）》［2］確診為手足口病并符合入住ICU 指征的危重型患兒60例，其中男37例，女23例，年齡0.20～10.00歲，平均2.00歲。正常對照組30例為健康兒童，其中男17例，女13例，年齡0.50～8.00歲，平均2.50歲。

1.2 試劑和儀器

淋巴細胞亞群檢測單克隆抗體CD8－FITC、CD56－FITC、CD4－APC、CD19－APC、CD3Per CP、溶血素及流式細胞儀（型號FACSCalibur）均為美國BD公司產品。免疫球蛋白Ig G、Ig A、Ig M 檢測試劑由德國SIEMENS公司提供，特定蛋白儀型號為BN Prospec。

1.3 淋巴細胞亞群測定方法

采集患兒入院治療前及健康兒童空腹靜脈血2 ml，以EDTA－K2抗凝。測試分兩管進行，每管取細胞數1×106／ml，采用三色直接標記，分別加入CD8－FITC／CD3Per CP／CD4－APC 、CD56－FITC／CD3Per CP／CD19－APC 各 20μl，室溫暗處孵育15 min，加入溶血素溶血10 min，1 500r／min離心5 min，加PBS洗滌后上機分析，每測定管獲取10 000個細胞。測定結果采用Cellquestpro軟件分析：首先以FSC／SSC設門圈定淋巴細胞，然后分別以CD3－FITC／CD8－PE、CD3－FITC／CD4－APC、CD3－FITC／CD56－PE、CD3－FITC／CD19－APC的二維散點圖確定CD抗原結合相應抗體的表達率。

1.4 免疫球蛋白測定方法

采集患兒入院治療前及健康兒童空腹靜脈血2 ml，3 000r／min離心10 min，分離血清，使用BN Prospec特定蛋白儀檢測，方法學原理為免疫散射比濁法。

1.5 統計學處理

采用EXCEL軟件進行統計分析。檢測數據用均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 兩組淋巴細胞亞群計數

手足口病危重型患兒外周血T淋巴細胞（CD3＋CD19－）、輔助 T細胞 Th（CD3＋CD4＋）、抑制T細胞Ts（CD3＋CD8＋）數明顯低于健康對照組，B淋巴細胞（CD3－CD19＋）數則較健康對照組增高，NK細胞（CD3－CD56＋）數及 Th／Ts比值無明顯變化，見表1。

表1 手足口病危重型患兒組與健康對照組淋巴細胞亞群測定結果（±s）

表1 手足口病危重型患兒組與健康對照組淋巴細胞亞群測定結果（±s）

注：與健康對照組比較，1）P＜0.05

Ts健康對照組 30 67.78±6.13 35.69±5.88 26.98±5.67 16.19±4組別 n T（%） Th（%） Ts（%） B（%） NK（%） Th／13.01±7.79 1.59±0.67.96 11.25±4.71 1.51±0.54疾病組 60 50.60±13.36 1） 28.13±9.62 1） 19.03±5.72 1） 33.73±11.56 1）

2.2 兩組免疫球蛋白檢測結果

手足口病危重型患兒免疫球蛋白Ig G、Ig A水平明顯高于健康對照組，而兩組間Ig M水平無明顯差異，見表2。

表2 手足口病危重型患兒組與健康對照組免疫球蛋白測定結果（±s）

表2 手足口病危重型患兒組與健康對照組免疫球蛋白測定結果（±s）

注：與健康對照組比較，1）P＜0.05

組別 n Ig G（g／L） Ig A（g／L） Ig M（g／L）健康對照組1.39±0.11 30 7.89±1.25 0.51±0.20 1.36±0.29疾病組 60 9.78±1.79 1）0.88±0.39 1）

3 討 論

本實驗結果顯示手足口病患兒外周血T淋巴細胞減低。T細胞在腸道病毒感染后的免疫發病機制中起介導作用［3］，其數量減低說明細胞免疫功能下降。Th細胞在免疫應答中起輔助、誘導作用，還分泌細胞因子，啟動遲發性超敏反應，誘導巨噬細胞活化。Th細胞按分泌細胞因子不同又分為Th0、Th1、Th2、Th3四種亞型，其分泌的細胞因子如白介素－2、γ－干擾素等在免疫應答中起十分重要的作用。Ts細胞毒性T細胞對清除病毒感染有重要作用，其產生依賴于Th細胞的存在。從本實驗結果可見手足口病患兒細胞免疫功能下降，病毒可能直接攻擊T細胞，使其迅速裂解破壞，并破壞免疫系統，引起T細胞異常分布，導致患兒T淋巴細胞、Th細胞、Ts細胞的百分率均下降。

B淋巴細胞及免疫球蛋白可反應機體體液免疫功能，有學者［4］研究發現，在細胞免疫發育尚不成熟的手足口病患兒中，若自身細胞免疫弱于體液免疫，感染EV71后有進展為重癥手足口病的傾向。本文觀察對象即為手足口病危重型患兒，其B淋巴細胞的百分率顯著增高，免疫球蛋白Ig G、Ig A水平明顯高于健康對照組，說明患兒體液免疫增強，進一步證實了上述觀點。B淋巴細胞增高可能與機體增強抗病毒抗體、中和病毒作用有關。

NK細胞屬于固有免疫細胞，無需抗原的預先刺激與活化即可發揮細胞毒作用，并分泌多種細胞因子和趨化因子，為抗病毒免疫的第一道防線。本實驗結果中NK細胞在手足口病危重型患兒中的百分率增加不明顯，反映EV71病毒感染的危重期，固有免疫的作用已不能使疾病恢復，需啟動不同類型的特異性免疫反應［5］，如能進一步提高NK細胞比例和增強NK細胞的活性，將有利于疾病的早期痊愈或減少心肌并發癥的發生［6］。

有關手足口病患兒外周血淋巴細胞亞群和免疫球蛋白含量的報道，結果［7～9］不完全一致，這可能與病例選擇分組及所用試劑、方法不同有關，有待大樣本的檢測結果證實。但可以確定的是手足口病危重癥患兒體內存在免疫功能紊亂，提示在患兒治療過程中可以適當給予免疫調節藥物治療。

1 牛錄清，董曉君，董 偉.一起手足口病的臨床及流行病學分析.中國綜合臨床，2000：16（3）：219.

2 中華人民共和國衛生部.手足口病診療指南（2010）年版.國際呼吸雜志，2010，30（24）：1 473～1 475.

3 王季午.傳染病學.上海：上海科技出版社，2005：150～152.

4 Chang LY，Hsiung CA，Lu CY，et al.Status of cellular rather than humoral immunity is correlated with clinical outcome of enter ovir us 71.Pediatr Res，2006，60（4）：466～471.

5 周光炎.創新理論推動免疫學的發展：介紹和討論一些正在流行和有創意的免疫學假說.中國免疫學雜志，2009，25（1）：27～30.

6 高玉峰，張風英.細胞因子在病毒性心肌炎病程中的研究進展.北京醫學，2006，28（7）：440～442.

7 周 濤，馬力忠，付四毛，等.手足口病患者體液免疫與病情轉歸的相關性分析.廣東醫學，2010，31（18）：2 434～2 435.

8 劉亞敏，王春妍，宋立文，等.手足口病患兒體液免疫檢測分析.臨床和實驗醫學雜志，2009，8（8）：73～74.

9 王躍飛，鄭 瑞，陳葆國，等.手足口病相關免疫學指標檢測的病例對照研究.浙江預防醫學，2010，22（10）：15～16.