苗族藥材飛龍掌血藥材指紋圖譜研究＊

楊 亮 ，郭 晶 ，范寶成

(1.貴陽昊臻藥物開發有限公司，貴州 貴陽 550025; 2.貴陽市宏信藥業職業學校，貴州 貴陽 550025)

飛龍掌血為蕓香科植物飛龍掌血 Toddalia asiatica(L.)Lam.的干燥根皮，味微苦、辛、溫，具有祛風止痛、散瘀止血、消腫解毒的功效，用于治療風濕痹痛、胃痛、跌打損傷、吐血、刀傷出血、痛經、閉經、牙齦出血、口舌生瘡[1]。關于其指紋圖譜的研究至今尚未見報道。本研究旨在通過對其指紋圖譜研究，為飛龍掌血藥材建立嚴格的質量控制方法，從而為其臨床療效提供保證。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀，包括UV－200Ⅱ型紫外可變波長檢測器、P－200高壓恒流泵(大連依利特科學儀器有限公司);Easy－3000色譜工作站(中國科學院，浙江大學);TU－1800SPC型紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司);AUW120D型電子天平(日本島津株式會社)，101－2型電熱鼓風恒溫干燥箱(上海市崇明實驗儀器廠);AS3120型超聲清洗儀(天津津騰實驗儀器廠)。乙腈(色譜純，天津科密歐化學試劑公司);磷酸(分析純，貴陽磷山化工集團);白屈菜紅堿對照品(純度為97.3%，中國藥品生物制品檢定所)。飛龍掌血藥材分別采自貴州省的貴陽高坡鄉、息烽縣、織金縣、興義市、大方縣及羅甸縣，見表1。

表1 飛龍掌血藥材的來源、采集時間

2 方法和結果

2.1 色譜條件[2]

色譜柱:迪馬 C18柱(200 mm × 4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈 －0.1% 磷酸水溶液(20 ∶80);流速:1.0 mL/min;柱溫:室溫;進樣量:10 μL;測定波長:221 nm。

2.2 溶液制備

精密稱取白屈菜紅堿對照品0.010 43 g，置100 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，得0.104 3 g/L的對照品母液;精密量取此溶液0.6 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，超聲處理制成約為0.006 g/L的對照品溶液。取飛龍掌血藥材粉末約2 g，精密稱定，置具塞錐瓶中，加甲醇100 mL，精密稱定，超聲提取30 min，稱重，用甲醇補足質量，濾過，得供試品溶液。

2.3 方法學考察

精密度試驗:取飛龍掌血藥材粉末(批號為HZZ20090001)，依法制備供試品溶液，連續進樣6次。結果面積百分比不低于10%的共有峰相對峰面積的 RSD＜2%(n=6)，表明儀器的精密度良好。

穩定性試驗:取飛龍掌血藥材粉末(批號為HZZ20090001)，依法制備供試品溶液，分別于 0，2，4，8，12，24 h 時進樣測定。結果面積百分比不低于10% 的共有峰相對峰面積的 RSD＜2%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內穩定。

重復性試驗:取同一批樣品粉末(批號為HZZ20090001)5份，依法制備供試品溶液，進樣測定。結果面積百分比不低于10%的共有峰相對峰面積的 RSD＜2%(n=5)，表明方法重現性良好。

2.4 指紋圖譜建立

2.4.1 共有指紋峰標定

取不同產地和批次的樣品(11批)，依法制備供試品溶液，進樣，繪制指紋圖譜。采用國家藥典委員會推薦的中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統的操作規范軟件(版本2004A)，標定其中5個色譜峰為共有指紋峰(圖1)，其中4號峰為參照物質白屈菜紅堿峰(圖2)，其余共有峰與4(S)號峰相對保留時間與相對峰面積見表2及表3。

圖1 飛龍掌血藥材指紋圖譜

2.4.2 相似度評價

根據共有指紋峰的標定結果，計算相似度。11批飛龍掌血藥材與對照指紋圖譜的相似度結果均大于0.90，表明各批次藥材具有良好的一致性，本方法可用于綜合評價藥材的整體質量。

圖2 白屈菜紅堿對照品圖譜

表2 飛龍掌血藥材HPLC指紋圖譜各共有峰的相對保留時間

表3 飛龍掌血藥材HPLC指紋圖譜各共有峰的相對峰面積

3 討論

曾考察了95%乙醇和甲醇兩種溶劑，甲醇的提取效果明顯較好;并考察了甲醇超聲和水浴回流兩種提取方法，結果兩者無明顯差別;提取時間考察了超聲15 min，30 min及60 min，前者效果較差，后兩者無明顯差別。因此選擇超聲提取30 min。

曾檢測了315，274，221 nm波長下的藥材指紋圖譜。比較分析發現，檢測波長為221 nm時，色譜峰較多，且各色譜峰能較好地分離，因此選221 nm作為檢測波長。本試驗比較了飛龍掌血藥材根、莖及葉，發現飛龍掌血藥材根、莖及葉的指紋圖譜完全不一致，這可作為本藥材藥用部位確定的依據。

通過全面系統研究建立的飛龍掌血藥材指紋圖譜，具有穩定性、重現性好的特點。本研究有助于飛龍掌血藥材的標準化種植和質量控制，并可在貴州省中藥材、民族藥材質量標準基礎上對飛龍掌血藥材的鑒別及質量控制起到一定的補充作用，有助于全面、科學地評價和控制飛龍掌血藥材的質量。

[1]DB52/YC059－2003，貴州省中藥材、民族藥材質量標準(2003年版)[S].

[2]安彩賢，楊廣德，葉建濤，等.RP－HPLC法同時測定小果博落回中血根堿和白屈菜紅堿的含量[J].中成藥，2001，11(23):824.