復方丹參片中非法添加的三七莖葉的檢測

黃 捷，覃紅萍

(廣西壯族自治區食品藥品檢驗所，廣西 南寧 530021)

復方丹參片被收載于2005年版《中國藥典(一部)》[1]，是心血管類疾病常用的中成藥，處方為三七、丹參、冰片。其中三七是我國特產的傳統珍貴藥材，屬五加科人參屬多年生草本植物，入藥部分為根及根莖。相對于多年生的三七根資源，三七莖葉資源易得、價格便宜。依據2005年版《中國藥典(一部)》復方丹參片標準，不能有效區分所投藥材是三七還是三七莖葉，這給不法生產企業提供了可乘之機。筆者用薄層色譜法判斷是否摻入三七莖葉，用高效液相色譜法對薄層色譜法進行驗證。三七莖葉主要含人參皂苷Rb1、Rb3和Rc，其中人參皂苷Rb3是三七莖葉中特有的人參皂苷成分[2]。因此，以人參皂苷Rb3為指標進行驗證。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀;Millipore超純水器;Camag Reprostar 3型薄層數碼成像系統;薄層硅膠G板(煙臺工業研究所);乙腈(色譜純)，水(超純水)，其余試劑為分析純;三七對照藥材(批號為 120941－200304)，三七莖葉皂苷對照品(批號為0781－200201)，三七皂苷 R1對照品(批號為 0745－200109)，人參皂苷Rg1對照品(批號為110703－200726)，人參皂苷Rb1對照品(批號為110704－200420)，人參皂苷Rb3對照品(批號為111686－200501)均由中國藥品生物制品檢定所提供;復方丹參片(A廠，批號為C8A032;B廠，批號為070817;C廠，批號為8121177;D廠，批號為070501;E廠，批號為071003;F廠，批號為080322)。

2 方法與結果

2.1 薄層色譜法

取本品5片，除去包衣，研碎，加乙醚10 mL，超聲處理5 min，濾過，揮干溶劑，藥渣加甲醇25 mL，加熱回流15 min，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加水25 mL，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇25 mL振搖提取，取正丁醇提取液，用氨試液25 mL洗滌，再用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次25 mL，正丁醇液濃縮至干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液;另取三七對照藥材0.5 g，同法制成對照藥材溶液;再取三七皂苷R1對照品、人參皂苷Rb1對照品、人參皂苷Rg1對照品、三七莖葉皂苷對照品，分別加甲醇制成每1 mL含三七皂苷 R11 mg、人參皂苷 Rb11 mg、人參皂苷 Rg11 mg、三七莖葉皂苷10 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法[2005年版《中國藥典(一部)》附錄ⅥB]試驗，吸取上述6種溶液各1～3 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇－醋酸－水(4∶1∶5)放置分層的上層溶液為展開劑展開，展距15 cm以上，取出，晾干，噴以硫酸乙醇溶液(1→10)，110℃下加熱至斑點顯色清晰。由圖1可以看出，樣品5，7，8，10，11的色譜圖中，在與三七莖葉皂苷對照品色譜相應位置上，不顯完全一致的斑點(E，F);樣品6，9色譜圖中，在與三七莖葉皂苷對照品色譜相應位置上，顯完全一致的斑點。說明樣品5，7，8，10，11 不含三七莖葉皂苷，而樣品 6，9 含三七莖葉皂苷。

圖1 薄層色譜圖

2.2 高效液相色譜法

2.2.1 色譜條件與系統適用性試驗

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈為流動相A，水為流動相B，按表1規定洗脫，檢測波長為203 nm。

2.2.2 溶液制備

取人參皂苷Rb3對照品適量，精密稱定，加甲醇制成1 g/L的溶液;取人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Rb1對照品及三七皂苷R1對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含人參皂苷Rg10.25 mg、人參皂苷Rb10.30 mg及三七皂苷R10.05 mg的混合對照品溶液。取本品20片，除去包衣，研細，取約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱定質量，超聲處理(功率480 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，作為供試品溶液。

2.2.3 測定法

分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀測定即可。

表1 洗脫條件

2.2.4 結果

從色譜圖上可以看出，三七莖葉皂苷的高效液相色譜圖中無與人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1及三七皂苷R1對照品相對應的色譜峰，三七莖葉藥材的高效液相色譜圖中未見與人參皂苷Rg1及三七皂苷R1對照品相對應的色譜峰，在與人參皂苷Rb1對照品有保留時間相同的色譜峰，但峰高較三七藥材低，與人參皂苷Rb3對照品保留時間相同的色譜峰。

圖2 高效液相色譜圖

薄層色譜法未檢出三七莖葉皂苷的復方丹參片樣品，在高效液相色譜圖中均出現人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1及三七皂苷R1，未出現與人參皂苷Rb3對照品保留時間相同的色譜峰。這與三七藥材的高效液相色譜圖一致。

薄層色譜法檢出三七莖葉皂苷的復方丹參片樣品，高效液相色譜圖中未見人參皂苷Rg1及三七皂苷R1對照品相對應的色譜峰，有與人參皂苷Rb1對照品有保留時間相同的色譜峰，但峰高較三七藥材低，有與人參皂苷Rb3對照品保留時間相同的色譜峰，這與三七莖葉高效液相色譜圖一致。

3 討論

對于復方丹參片中摻入的三七莖葉的檢查，主要以三七莖葉皂苷為對照，與三七莖葉皂苷顯完全一致斑點的，即判檢出三七莖葉皂苷，為不合格樣品。本試驗采用高效液相色譜法，以三七莖葉中的特有成分人參皂苷Rb3為對照，結果與薄層色譜法的一致，三七莖葉皂苷的檢出率與重現性均較好，說明該方法用于檢測摻入的三七莖葉方法可行。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業出版社，2005:527.