炮制規(guī)格對浙貝母有效成分提取影響的研究

金玉琴 王增壽

溫州醫(yī)學(xué)院附屬二院 溫州 325000

曾國武 浙江省溫州市第三人民醫(yī)院

王龍虎 浙江大學(xué)藥學(xué)院

浙貝母為百合科植物浙貝母Fritillaria thunbergii Miq.的干燥鱗莖，是道地藥材“浙八味”之一，以金華磐安、寧波鄞州為主產(chǎn)地。具有清熱化痰止咳、解毒散結(jié)消癰等功效[1]。主要有效成分為生物堿和皂苷[2],其中貝母素甲和貝母素乙的含量是《中國藥典》規(guī)定檢測的指標(biāo)成分。近年來浙貝母的炮制方法不一，厚片在常規(guī)煎煮時常有白心難以煎透，影響藥效[3]。為了符合2009年國家中醫(yī)藥管理局頒布的《醫(yī)療機構(gòu)中藥煎藥室管理規(guī)范》藥料應(yīng)充分煎透，做到無糊狀塊、無白心、無硬心的要求，本文通過HPLC-ELSD法檢測浙貝母三種主流炮制規(guī)格（鮮切烘干薄片、鮮切無硫厚片、硫熏厚片）的貝母素甲、貝母素乙含量，明確質(zhì)量最佳的炮制品；考察煎膏得率和有效成分含量的相關(guān)性，確定合理的煎煮方法。

1 實驗材料

1.1 樣 品 同批浙貝母原藥材均來自浙江磐安縣新渥鎮(zhèn)浙貝母標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)基地，由浙江中醫(yī)藥大學(xué)飲片廠鄭建寶和溫州市第三人民醫(yī)院曾國武藥師鑒定為百合科植物浙貝母Fritillaria thunbergii Miq.的鱗莖。鮮切烘干薄片：原產(chǎn)地趁鮮切薄片，通過帶式干燥機80℃干燥，外觀平展呈黃白色；鮮切無硫厚片：原產(chǎn)地趁鮮切厚片，曬干，外觀皺縮呈灰褐色；硫熏厚片：原產(chǎn)地趁鮮熏硫，切厚片，曬干，外觀光潔呈粉白色。

1.2 試 藥 貝母素甲對照品（110750-200608,中國藥品生物制品鑒定所），貝母素乙對照品（110751-200606,中國藥品生物制品鑒定所）；乙腈（色譜純，美國Tedia公司）；甲醇、二乙胺、鹽酸、氨水、氯仿、石油醚均為分析純。

1.3 儀 器 DIONEX U-3000高效液相色譜儀（配Chromeleon色譜工作站，美國戴安公司）；Alltech ELSD 3300蒸發(fā)光散射檢測器（美國奧泰科技有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 三種炮制規(guī)格浙貝母飲片有效成分含量比較

2.1.1 色譜條件 色譜柱：DIONEX Acclaim C18色譜柱（4.6mm×250mm，5um）；流動相：乙腈-0.1%二乙胺（70：30）；流速：1.0mL/min[1]；ELSD 條件：漂移管溫度為 42℃，載氣（高純N2）流速為 1.0L/min。

2.1.2 對照品溶液制備 精密稱取貝母素甲2.92mg、貝母素乙2.16mg置于10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成含貝母素甲0.292g/L、貝母素乙0.216g/L對照品溶液。

2.1.3 供試品溶液制備 取各樣品粉末（過四號藥篩）約2g，精密稱定，置燒瓶中，加濃氨試液4mL浸潤1h，精密加入三氯甲烷-甲醇（4：1）的混合溶液40mL，稱定重量，混勻，置80℃水浴中加熱回流2h，放冷，再稱定重量，加上述混合溶液補足減失的重量，濾過。精密量取續(xù)濾液10mL，置蒸發(fā)皿中蒸干，殘渣加甲醇使溶解并轉(zhuǎn)移至2mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻過0.45μm微孔濾膜即得。每個樣品平行制備兩份供試液。

2.1.4 測定方法 分別精密吸取對照品溶液5μL、10μL、20μL，供試品溶液 10μL，注入液相色譜儀，每份樣品液進樣兩次測定，用外標(biāo)法對數(shù)方程分別計算各樣品貝母素甲、貝母素乙的含量。

2.1.5 測定結(jié)果 分別進樣對照品溶液5μL、10μL、20μL各測定兩次，以進樣量（μg）對數(shù)值為橫坐標(biāo)，峰面積對數(shù)值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到貝母素甲的線性方程為Y=1.3032X+0.9163（r=0.09996）；貝母素乙的線性方程為Y=1.3858X+0.0.8261（r=0.09997）。浙貝母的三種炮制規(guī)格中，鮮切無硫厚片的貝母素甲和貝母素乙的含量最高，見表1。

表1 三種炮制規(guī)格浙貝母飲片有效成分含量比較（n=2） %

2.2 煎煮方法對浙貝母煎膏得率和有效成分含量影響

2.2.1 浸泡時間對煎膏得率的影響 精密稱取浙貝母鮮切無硫厚片10g，分別置于燒杯中浸泡0.5h、1h、2h后煎煮兩次：第一次加10倍量的水煎煮30min，不時補足水量；第二次加8倍量的水煎煮15min，不時補足水量。煎煮后藥渣稱重，用剪刀小心剝離出白心部分，60℃烘干3h后稱重，比較白心部分占所取飲片的質(zhì)量比率；煎液分別用三層紗布過濾，合并濾液濃縮至適量置以干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3h，置干燥器中冷卻30min，迅速精密得到煎膏重量，并計算煎膏占飲片的含量（煎膏得率）。每種浸泡時間平行制樣兩份。

2.2.2 浸泡時間與對煎膏有效成分含量的影響 取前面制得的各煎膏加2%HCl溶解，酸水溶液以石油醚萃取，棄去石油醚層，以氨水調(diào)pH值至9以上后再以氯仿萃取，取氯仿萃取液合并后水浴蒸干，殘渣加甲醇使溶解并轉(zhuǎn)移2mL量瓶中，加甲醇至刻度[4]，搖勻過0.45μm微孔濾膜即得供試品溶液。按同樣的色譜條件，取各供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，每份樣品液進樣兩次測定，用外標(biāo)法對數(shù)方程分別計算各樣品貝母素甲、貝母素乙的含量。

隨著浙貝母鮮切無硫厚片浸泡時間的延長，煎煮后藥渣的白心比率降低，而煎膏得率及其中貝母素甲、貝母素乙總含量均是增高，見表2，圖1。

表2 浸泡時間對浙貝母飲片煎膏得率和有效成分含量的影響（n=2） %

3 討論

通過HPLC-ELSD法檢測浙貝母三種主流炮制規(guī)格的貝母素甲、貝母素乙含量，結(jié)果鮮切無硫厚片＞硫熏厚片＞鮮切烘干薄片，而且其單獨含量和總量都是上述的排序，初步判定，鮮切無硫厚片質(zhì)量最佳，硫磺熏蒸次之，后者雖然飲片外觀美白，有一定的防霉作用，但有效成分含量降低，殘留硫有損人體健康，不宜采用；鮮切烘干薄片有效成分含量最低，可能是浙貝母生物堿不耐高溫的原因，建議采用低溫干燥技術(shù)。

浙貝母的煎膏量與有效成分含量成正相關(guān)。浙貝母飲片在常規(guī)煎煮前應(yīng)先浸泡1h以上，才能使有效成分溶出更多。建議將“厚片”改為“薄片”，避免飲片白心、硬心、煮不透，這樣既能提高臨床療效，又能節(jié)約資源。

本文通過摸索一系列的漂移管溫度和載氣流速，比較對照品溶液的圖譜響應(yīng)值和峰面積大小，最終確定漂移管溫度42℃、載氣（高純N2）流速1.0L/min為最佳ELSD參數(shù)。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010版一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：274.

[2]李萍，季暉，徐國鈞.貝母類中藥的鎮(zhèn)咳祛痰作用研究[J].中國藥科大學(xué)學(xué)報，1993，24（6）：360.

[3]方錦霞，鄭師明，伍月紅.浙貝母炮制成厚片對藥材成分煎出量的影響[J].現(xiàn)代醫(yī)院，2008，8（6）：77.

[4]韋敏.不同炮制方法對浙貝母中貝母素含量的影響研究[J].中藥材，2008，31（8）：1129.