細葉桉果實CO2超臨界流體萃取物化學成分的GC-MS分析Δ

周燕園，梁臣艷，陸海林，朱小勇(1.桂林醫學院，桂林市541004；.廣西中醫學院，南寧市530001)

細葉桉果實為桃金娘科植物桉樹屬細葉桉Eucalyptus tereticornisSmith.的果實。細葉桉又名小葉桉、柳葉桉[1]、褐桉樹[2]、羊草果樹[3]，原產澳大利亞，我國福建、廣東、廣西有栽培[4，5]。細葉桉始載于《陸川本草》，藥用部位為其葉子和果實，辛，微苦，溫。具有宣肺利氣、止咳平喘、活血散瘀、清熱解毒、消炎殺菌、收斂殺蟲之功效，用于治療感冒發熱、咳喘痰嗽、脘腹脹痛、瀉痢、鉤端螺旋體病、跌打損傷、瘡瘍、丹毒、乳癰、疥瘡、癬癢等病[3]。

超臨界流體萃取(Supercritical fluid extraction，SFE)技術是近年發展起來的一種分離新技術，已廣泛應用于醫藥、食品和香料等行業。CO2超臨界流體萃取(SFE-CO2)法應用于中藥領域，與傳統方法比較，有操作溫度低、分離效率高且無溶劑殘留等優點，尤其適用于熱不穩定性天然產物的分離精制，是目前研究中草藥等天然產物成分的重要方法之一[6，7]。目前，國內、外對SFE-CO2法提取細葉桉果實化學成分的研究尚未見報道。故筆者采用SFE-CO2法萃取細葉桉果實的有效成分，并用氣相色譜-質譜聯用(GC-MS)法進行分析鑒定。

1 儀器與試藥

HL-(5+1)/50 MPa-ⅡAQ型SFE-CO2萃取儀(杭州華黎公司)；Agilent 5973N-6890型GC-MS儀(美國Agilent公司)；LG16-W型高速微量離心機(北京醫用離心機廠)。

二氧化碳(≥99.5%，廣西南寧藍天醫用氣體有限責任公司)；乙醚、無水硫酸鈉均為分析純；細葉桉果實采自廣西南寧市郊外，經廣西中醫學院劉壽養副教授鑒定為桃金娘科植物細葉桉E.tereticornisSmith.的果實，樣品經自然陰干備用，標本存于廣西中醫學院藥學中心實驗室。

2 方法與結果

2.1 細葉桉果實SFE-CO2提取方法及條件

取細葉桉果實適量，粉碎，過10目篩，取120 g，采用SFE-CO2技術萃取揮發油成分。以揮發油得率為指標，考察不同萃取釜、分離釜1、分離釜2的壓力和溫度及萃取時間、CO2流量對揮發油得率的影響，比較最佳提取條件，篩選并確定SFE-CO2法提取細葉桉果實揮發油的最優化工藝條件:萃取釜壓力20～30 MPa反復升降(溫度40～46℃，1℃·min-1)；分離釜1壓力5 MPa(溫度45℃)；分離釜2壓力6 MPa(溫度35℃)；CO2流量12.0 kg·h-1；萃取時間60 min。從分離釜收集得棕黃色的萃取物共0.56 g，得率為0.47%。取適量萃取物，滴加重蒸乙醚溶解并稀釋10倍，用無水硫酸鈉除去水分，離心后取上清液1 μL注入GC-MS儀進行分析。

2.2 細葉桉果實萃取物GC-MS分析

2.2.1 GC-MS分析條件(1)GC條件:采用HP-5MS毛細管柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm)；柱溫:程序升溫，初始溫度60℃保持1 min，以5℃·min-1升至120℃，保持2 min，再以10℃·min-1升至135℃，保持3 min，以5℃·min-1升至210℃，保持3 min，以2℃·min-1升至230℃，保持1 min，以5℃·min-1升至280℃，保持10 min，最后升溫至280℃，溶劑延遲3.0 min；進樣口溫度:250℃；載氣:高純He；載氣流量:0.8 mL·min-1；進樣量:1 μL；無分流比。(2)MS條件:接口溫度:280℃；電離方式:EI；電子能量:70 eV；離子源溫度:230℃；四極桿溫度:150℃；倍增器電壓:1247 V；掃描范圍:45～550 amu；掃描間歇:2.94次·s-1。

2.2.2 細葉桉果實萃取物分析經GC-MS分析后，得到細葉桉果實SFE-CO2提取物的化學成分總離子流色譜圖，見圖1。對總離子流圖中的各峰經MS掃描后得MS圖，經過NIST02/WILEY275標準譜圖庫進行檢索，人工譜圖解析，并查對有關MS資料，從基峰相對豐度等幾個方面進行比較，從而確定出細葉桉果實中的化學成分，并按照峰面積歸一化法計算各成分的相對含量。

圖1 細葉桉果實SFE-CO2提取物化學成分總離子流色譜圖Fig 1Total ion current chromatograms of chemical components from the fruits of E.tereticornis extracted by SFE-CO2

按“2.2.1”項下條件對廣西細葉桉果實的SFE-CO2提取物進行成分分析，鑒定出34個化合物，占色譜峰總面積的80.26%，其中以二十九烷(10.36%)、1，1'-(1，2-乙基)二十氫萘(8.20%)、3-(1-甲?；?3，4-亞甲二氧基苯基)苯甲酸甲酯(5.04%)、二十七烷(5.04%)、十五烷(4.84%)、甲氧基肉桂酸乙酯(4.33%)、9-甲基十九烷(4.24%)為主。細葉桉果實SFE-CO2提取物的化學成分分析結果見表1。

表1 細葉桉果實SFE-CO2提取物的化學成分分析結果Tab 1Analysis of chemical components from the fruits of E.tereticornis extracted by SFE-CO2

續表1Subtab 1

3 討論

在本文試驗條件下，采用SFE-CO2技術，所得萃取物的揮發油成分主要為烷烴、單萜、倍半萜化合物及其衍生物。其中α-水芹烯(3.64%)、左旋樟腦(1.20%)、薄荷酮(0.83%)、(1S)-(-)-冰片(2.27%)、α-松油醇(0.73%)、茴香腦(1.13%)等單萜類總量占相對含量的9.80%；α-蓽澄茄油烯(2.12%)、香樹烯(1.13%)、α-石竹烯(0.95%)等倍半萜類化合物總量占相對含量的4.20%。這些萜類化合物具有止血、抗炎、止痛、消腫、健胃、清熱解毒等多種功效，這與細葉桉果實的藥效基本一致；而且多數具有較強的香氣和生物活性，是醫藥、食品、化妝品工業的重要原料。

SFE-CO2法具有萃取過程短、操作溫度低、有效成分不易被分解破壞、提取收率高、無溶劑殘留等優點，在萃取過程中排除了一些化學成分遇氧氧化及見光反應的可能性，既可以提取低沸點的易揮發性成分，避免破壞具有植物特征的香味成分，使萜烯類組分不易損失；又可以提取出較多的醇、酯、不飽和脂肪酸、長鏈烷烴和熱不穩定組分及易氧化的成分，更能真實、全面地反映藥材中的化學組分，從而可使各組分相對含量的數值直接用于鑒定藥材質量的真假與優劣。隨著科學技術的發展，相信這種新技術在中草藥的研究與新藥開發中會開辟出更加廣闊的應用領域。

[1]國家中醫藥管理局《中華本草》編委會.中華本草(第五冊)[M].上海:上海科學技術出版社，1999:638-639.

[2]江蘇新醫學院.中藥大辭典(上冊)[M].上海:上?？茖W技術出版社，1977:1482.

[3]《全國中草藥匯編》編寫組.全國中草藥匯編(下)[M].北京:人民衛生出版社，1978:753.

[4]中國科學院植物研究所.中國高等植物圖鑒(第二冊)[M].北京:科學出版社，1972:998.

[5]劉玉明，李素芳，吳玉田.桉屬藥用植物資源調查[J].中草藥，2003，34(10):957.

[6]陳振德，李澎灝，謝立，等.超臨界CO2流體萃取榧樹假種皮揮發油化學成分的研究[J].中國藥房，2003，14(9):525.

[7]張建超，方穎，劉焱文，等.正交法優化纈草揮發油超臨界CO2流體提取工藝[J].中成藥，2008，30(2):202.