紫外分光光度法測定葛根黃豆苷元自微乳中藥物的含量Δ

張 娜，張 娜，康虞玲，楊更亮（河北大學藥學院/河北省質量分析控制重點實驗室，保定市 071000）

葛根黃豆苷元（daidzein），又名大豆苷元，提取于葛根，其化學成分為8-β-D-葡萄糖-4，7-二羥基異黃酮，1972年由我國人工合成。其具有治療冠心病、高血壓、高血脂，抗腫瘤與預防骨質疏松等多種藥理作用[1]。但是由于該藥脂溶性比較強、溶出速度慢、口服吸收差、生物利用度低，影響了藥效的發揮。自微乳化藥物傳遞系統（self-microemulsifying drug delivery system，SMEDDS）是一種新型藥物傳遞系統，由油相、表面活性劑和助表面活性劑（不含或含少量水）構成。SMEDDS因能提高難溶性藥物的溶解度，增加細胞膜的流動性，促進藥物淋巴吸收，從而能夠提高藥物的口服生物利用度[2]。

葛根黃豆苷元自微乳為本實驗室通過篩選、處方優化后制備的一種新制劑。為有效控制藥品質量，確保臨床療效，筆者建立了采用紫外分光光度法測定葛根黃豆苷元自微乳藥物含量的方法。該方法簡便、快速、結果準確，可用于本品的質量控制。

1 儀器與試藥

T6型紫外分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）；萬分之一電子天平（奧豪斯儀器（上海）有限公司）；KQ-250B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，工作頻率：40 kHz，功率：250 W）。

葛根黃豆苷元標準品（楊陵東科麥迪森制藥有限公司，批號：HD080201，含量：98.63%）；葛根黃豆苷元自微乳（河北大學藥劑實驗室自制，批號：100304、100307、100311）；無水乙醇、聚乙二醇400（天津市華東試劑廠，分析純）；乳化劑OP（天津市光復精細化工研究所，分析純）；油酸乙酯（上海千為油脂科技有限公司，分析純）；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 溶液的制備

2.1.1 標準品溶液 精密稱取葛根黃豆苷元標準品25.0 mg，用無水乙醇溶解至100 mL，配成250 mg·L-1的標準品貯備液。用無水乙醇稀釋適當倍數配制成濃度分別為0.5、1.0、2.0、5.0、7.0 mg·L-1的標準品溶液。

2.1.2 空白自微乳溶液 精密稱取乳化劑OP、聚乙二醇400、油酸乙酯各適量，37℃磁力攪拌（300 r·min-1）20 min即得空白自微乳。取適量空白自微乳，置于100 mL容量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.1.3 供試品溶液 向空白自微乳中加入一定量干燥至恒重的葛根黃豆苷元，70℃超聲振蕩至藥物完全溶解。取載藥自微乳適量，置于100 mL容量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2 檢測波長的確定

制備適宜濃度的標準品、供試品溶液。標準品溶液以無水乙醇為空白對照，供試品溶液以相同濃度的空白自微乳為空白對照，在200～600 nm波長范圍內掃描。結果，二者均在250 nm波長處有最大吸收，故選擇250 nm為檢測波長。紫外掃描光譜見圖1。

圖1 紫外掃描圖譜Fig 1 UV scanning spectra

2.3 標準曲線的制備

以無水乙醇為空白對照，用紫外分光光度計在250 nm波長處依次測定上述系列標準品溶液的吸光度。以吸光度（Y）為縱坐標，溶液濃度（X）為橫坐標，制備標準曲線，得回歸方程為Y＝0.086 48X+0.008 13（r＝0.999 5，n＝5）。結果表明，葛根黃豆苷元檢測濃度在0.5～7.0 mg·L-1范圍內與吸光度呈良好線性關系。

2.4 精密度試驗

取葛根黃豆苷元3.0 mg·L-1的標準品溶液適量，以無水乙醇為空白對照，在250 nm波長處連續測定吸光度5次。結果，RSD＝0.35%（n＝5），表明儀器精密度良好。

2.5 重復性試驗

取載藥自微乳適量，用無水乙醇稀釋至適宜濃度，平行配成6份同一濃度供試品溶液，以空白自微乳為空白對照，在250 nm波長處分別測定吸光度。結果，RSD＝0.47%（n＝6），表明本方法重復性良好。

2.6 穩定性試驗

取載藥自微乳適量，用無水乙醇稀釋至適宜濃度，以空白自微乳為空白對照，于0、1、2、4、8 h在250 nm波長處測定其吸光度。結果，RSD＝0.31%（n＝5），表明供試品溶液在8 h內穩定。

2.7 加樣回收率試驗[3]

分別精密稱取同一批次且已知含量的載藥自微乳適量，共9份，分別置于100 mL容量瓶中，分別精密加入葛根黃豆苷元標準品適量，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，以空白自微乳為空白對照，按“2.3”項下方法測定，計算加樣回收率，結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果（n＝9）Tab 1Results of recovery test（n＝9）

2.8 樣品含量測定

按“2.1.2”項下方法制成載藥的葛根黃豆苷元自微乳（標示量：2.20 mg·g-1）3批，按“2.1.3”項下方法配制成供試品溶液，按“2.3”項下方法測定吸光度，并計算含量，結果見表2。

表2 樣品含量測定結果（n＝3）Tab 2Results of content determination of samples（n＝3）

3 討論

對自微乳中成分的檢測，文獻報道的方法多為高效液相色譜法，而本試驗采用紫外分光光度法[4，5]，更簡單、快捷，結果準確。本試驗制備的葛根黃豆苷元自微乳在無水乙醇中溶解性能很好，且制備中所用的乳化劑及助乳化劑在250 nm波長處不影響葛根黃豆苷元的含量測定。

綜上，本法樣品處理簡便、去除干擾效果好、專屬性強，可用于自微乳藥物制劑的快速分析。

[1] 王艷梅，呂立勛.黃豆苷元的藥理作用及臨床應用[J].中國藥師，2007，10（9）：910.

[2] 李劍惠，胡 英.HPLC測定槲皮素自微乳中槲皮素的含量[J].華西藥學雜志，2006，21（5）：489.

[3] 邵紅燕，王封銳.琥乙紅霉素顆粒溶出度的測定[J].中國藥房，2010，21（25）：2 378.

[4] 葉建新，陳 杰.紫外-可見分光光度法測定豆腐果苷片中間體中豆腐果苷的含量[J].中國藥房，2009，20（19）：1 501.

[5] 呂長淮.格列齊特片（Ⅱ）鑒別與含量測定方法改進[J].中國藥房，2007，18（25）：1 977.