化瘀通脈煎劑不同煎煮方法的指紋圖譜研究

鄧震亭，馬 瑛，劉 芳，柴士偉（天津中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院，天津市 300193）

煎劑是中藥的傳統(tǒng)劑型之一，是臨床醫(yī)師辨證論治、隨方加減治療疾病的重要手段。長期以來，煎劑的制備以采用飲片手工煎煮為主，但隨著人們生活方式的改變，中藥煎藥機得到越來越廣泛的應(yīng)用，特別是在醫(yī)院中已經(jīng)被普遍的應(yīng)用[1]。煎藥機分為2種類型：常壓和高壓。這兩種煎煮方法對中藥煎劑造成的質(zhì)量差異一直缺乏全面、系統(tǒng)的評價；目前，文獻多是以某一種主要成分作為指標對不同的煎煮方法進行比較，所得結(jié)果比較片面，不能全面的反映不同煎煮方法的特點[2，3]。因此，筆者在化瘀通脈煎劑的指紋圖譜研究的基礎(chǔ)上，采用指紋圖譜技術(shù)對采用不同煎煮方法的化瘀通脈煎劑的質(zhì)量差異進行全面的評價[4～6]。

1 儀器與試藥

Waters 600E高效液相色譜儀，配有UV檢測器、四元梯度泵、在線脫氣裝置、自動進樣器，EMPOWER工作站（美國Waters公司）；AX205分析天平（瑞士Mettler-Toledo公司）。

丹酚酸 B（批號：880200010）、阿魏酸（批號：110773-200611）對照品均購于中國藥品生物制品檢定所；丹參、川芎、當歸、雞血藤均購于河北美威中藥材有限公司，經(jīng)天津中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院馬瑛主任藥師鑒定為真品；甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備

精密稱取阿魏酸對照品5 mg，置于25 mL量瓶中，用體積分數(shù)為50%的甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

精密稱取丹酚酸B對照品5 mg，置于25 mL量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2 供試品溶液的制備

2.2.1 高壓煎煮溶液的制備 取同一批化瘀通脈處方飲片5份，加10倍量水，浸泡20 min后放入高壓煎煮機煎煮40 min，溶液定容至1 000 mL，備用。

2.2.2 常壓煎煮溶液的制備 取同一批化瘀通脈處方飲片5份，加10倍量水，浸泡20 min后放入常壓煎煮機煎煮40 min（先武火，溶液沸騰后改用文火），溶液定容至1 000 mL，備用。

2.3 色譜條件

色譜柱：大連依利特Hypersil ODS2 C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.05%甲酸溶液，線性梯度洗脫（0→40→60→80 min，乙腈的比例為10%→20%→80%→90%；0.05%甲酸溶液的比例為90%→80%→20%→10%）；流速：1.0 mL·min-1；檢測波長：280 nm；柱溫：30 ℃。

2.4 精密度試驗

分別吸取阿魏酸、丹酚酸B對照品溶液各20 μL，按“2.3”項下色譜條件連續(xù)進樣測定5次。結(jié)果，色譜峰的保留時間的RSD分別為1.96%、2.32%，相對峰面積積分值的RSD分別1.23%、2.47%，n均為5，表明儀器精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗

取同一常壓煎煮供試品溶液20 μL，分別在 0、4、8、12、24、48 h進樣6次。結(jié)果，14個共有峰相對保留時間的RSD平均為2.13%，相對峰面積積分值的平均RSD為2.56%，n均為6，表明供試品溶液48 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 重復(fù)性試驗

取同一批次的化瘀通脈煎劑9份，按“2.2.1”項下方法，取供試品溶液20 μL，照“2.3”項下色譜條件進樣分析。結(jié)果，14個共有峰保留時間的RSD平均為2.41%，相對含量的RSD平均為3.72%，n均為9，表明方法重復(fù)性良好。

2.7 指紋圖譜的建立

在前期試驗中，筆者對不同批次12份高壓煎煮樣品進行檢測，建立了化瘀通脈煎劑的共有模式指紋圖譜，包含14個共有峰，其中6號峰為阿魏酸，9號峰為丹酚酸B，相似度均在0.92以上。色譜見圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

2.8 樣品溶液的測定

分別將上述2種供試品溶液減壓濃縮至干，加50%甲醇溶解，定容至25 mL。進樣前用0.45 um濾膜過濾，按上述色譜條件進樣測定，圖譜見圖2。

圖2 常壓、高壓下煎劑指紋圖譜比較Fig 2 Comparison of fingerprints of decoctions under atmospheric and high pressure

由圖2可知，常壓煎煮所得煎劑中6號峰（阿魏酸）、8號峰比高壓煎煮含量稍高，而9號峰（丹酚酸B）含量明顯增加；高壓煎煮煎劑中1、2、3、4、7號峰含量比常壓煎煮含量增加明顯，其中11號峰增加最顯著；兩種煎煮方法對12、13、14號峰影響不明顯。

3 討論

分析兩種煎煮方法所造成的煎劑的質(zhì)量差異：高壓煎煮中9號峰（丹酚酸B）含量降低可能是由于丹酚酸B不穩(wěn)定，在高壓煎煮過程中降解所導(dǎo)致；11號峰增加明顯推測可能為丹酚酸B的降解產(chǎn)物。

利用指紋圖譜比較兩種煎煮方法的化瘀通脈煎劑的質(zhì)量差異，總體上看：高壓煎煮后有些共有峰的含量有所提高，但臨床療效還需要進一步進行臨床試驗，以期為中藥選擇煎煮方法提高臨床療效提供指導(dǎo)。

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