葛根醇提物對2型糖尿病模型大鼠的保護作用研究

方道碩（成都大學附屬醫院藥劑科，成都市 610106）

隨著現代生活節奏的加快，人們越來越忽略自身的健康，從而導致營養過剩、形體肥胖、運動減少，而以上因素也是誘發2型糖尿病的重要原因。有研究表明[1，2]，胰島素抵抗（IR）貫穿于2型糖尿病的始終，是2型糖尿病發生各種慢性并發癥的病理基礎。如果能減輕IR就能相應地增加胰島素的敏感性，從而能有效地降低血糖水平，延緩并發癥的發生。已有文獻報道[3，4]，我國傳統中藥葛根具有擴張冠狀動脈、降低外周血管阻力、抑制血小板聚集及改善微循環等作用，臨床上主要用于心、腦血管疾病的治療。近年來發現其對缺血-再灌注后的心、肺、腦等臟器具有較好的保護作用。但葛根對于糖尿病保護作用的報道少見，因此筆者通過2型糖尿病大鼠模型來研究葛根對其的保護作用，以為葛根的臨床應用提供理論依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器

UV751GD型紫外-可見分光光度計（上海精科實業有限公司）；AX-120型電子天平（日本島津公司）；OneTouch型強生血糖儀（美國強生公司）；腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-6（IL-6）ELISA測定試劑盒由成都晶美生物制品有限公司提供。

1.2 試藥

葛根（購自成都大學附屬醫院中藥房）由筆者鑒定為真品。鹽酸二甲雙胍片（上海延安藥業有限公司，批號：101204）；鏈脲佐菌素（STZ，廣州市齊云生物技術有限公司，批號：110112）；其余試劑為分析純。

1.3 動物

健康Wistar大鼠60只，♂，體重（200±40）g，由四川大學實驗動物中心提供（動物生產許可證號：SCXK（川）2009-09）。

2 方法與結果

2.1 方法

2.1.1 葛根醇提物的制備 將葛根磨成細粉，加處方量6倍的50%乙醇，回流提取2次，第1次2 h，第2次1.5 h，合并2次濾液，即得葛根醇提物，備用。

2.1.2 復制模型 Wistar大鼠60只，適應性喂養1周，隨機取10只大鼠作正常對照，空腹12 h后尾iv檸檬酸鈉-檸檬酸緩沖液2.5m L·kg-1，給予正常飲食。取100m L檸檬酸鈉-檸檬酸緩沖液（pH 4.5）溶解STZ 2 g，配制成2%溶液，50只大鼠空腹12 h后尾iv STZ（25mg·kg-1，即2%STZ溶液2.5m L·kg-1），給予高糖高脂飼料喂養，自由進食及飲水，均不使用胰島素。72 h后測大鼠空腹尾靜脈血糖，血糖值以11.1mmol·L-1≤空腹血糖（FBG）≤33.3mmol·L-1且伴有糖耐量減退者為2型糖尿病大鼠模型復制成功。

2.1.3 分組與給藥 Wistar大鼠分為6組，分別為正常對照（等容生理鹽水）、模型（等容生理鹽水）、二甲雙胍（70mg·kg-1）和葛根醇提物高、中、低劑量（150、100、50mg·kg-1）組。ig給藥，每天1次，連續8周。

2.1.4 指標的測定 ig給藥結束后，大鼠空腹12 h稱體重，ip 2%戊巴比妥鈉生理鹽水溶液40mg·kg-1麻醉，股動脈取血并檢測FBG、血清胰島素（Flns）含量、血清IL-6、TNF-α。胰島素敏感性指數（ISI）的計算參照文獻方法[5]：ISI＝ln（1/Flns×FBG），因其為非正態分布，分析中取其自然對數，并以正常對照組為對照，計算相對胰島素敏感性。FBG采用強生血糖儀檢測；血清IL-6、TNF-α含量采用試劑盒測定。

2.2 結果

2.2.1 葛根醇提物對2型糖尿病模型大鼠ISI的影響 模型組大鼠的ISI較正常對照組顯著升高（P＜0.01）；二甲雙胍組和葛根醇提物高、中劑量組的ISI較模型組顯著降低（P＜0.01或P＜0.05），提示葛根醇提物有降低ISI的作用。葛根醇提物對2型糖尿病模型大鼠ISI的影響見表1。

表1 葛根醇提物對2型糖尿病模型大鼠ISI的影響Tab 1 Effects of Pueraria lobata ethanol-extract on ISI in type2 diabeticmodel rats

2.2.2 葛根醇提物對2型糖尿病模型大鼠TNF-α、IL-6含量的影響 模型組大鼠的TNF-α、IL-6的含量較正常對照組顯著升高（P＜0.01）；二甲雙胍和葛根醇提物高、中劑量組較模型組顯著降低（P＜0.01或P＜0.05），提示葛根醇提物有降低TNF-α、IL-6含量的作用。葛根醇提物對2型糖尿病模型大鼠TNF-α、IL-6含量的影響見表2。

表2 葛根醇提物對2型糖尿病模型大鼠TNF-α、IL-6含量的影響Tab 2 Effects of P.lobata ethanol-extract on the contents of TNF-αand IL-6 in type 2 diabeticmodel rats

3 討論

IR是2型糖尿病發病的重要原因，并貫穿2型糖尿病的全過程，也是2型糖尿病發生各種慢性并發癥的病理基礎，改善IR成為近年來糖尿病治療領域關注的熱點。筆者通過測定FBG、Flns的含量，計算出ISI，發現用藥后ISI明顯低于模型組，說明葛根醇提物能降低模型大鼠的ISI。

有報道指出，IR人群的脂肪組織中存在TNF-α過度表達，IR的2型糖尿病患者的肌細胞中TNF-α表達比胰島素敏感的正常人群高4倍[6]。TNF-α可干擾周圍組織胰島素作用從而引起IR，伴有IR的肥胖嚙齒類動物和人類肥胖者的脂肪組織TNF-α基因均呈過度表達，而去TNF-α基因肥胖小鼠ISI明顯高于正常肥胖小鼠，表明TNF-α參與IR的形成[7]。筆者通過測定TNF-α含量，發現用藥后葛根醇提物高、中劑量組TNF-α含量顯著低于模型組，說明葛根素醇提物能通過下調TNF-α改善脂肪組織IR。

IR與急性相反應的激活有關。IL-6作為急性相反應的主要細胞因子，可能通過多種途徑影響2型糖尿病的發病機制，如IL-6水平增高，使肝細胞處于應激狀態而大量分泌急性相蛋白，使纖維蛋白原、C反應蛋白等增加，纖維蛋白原增加從而使血黏度增加，易于形成血栓和發生栓塞。通過IL-6激活腦、肝、血管內皮、脂肪組織的急性相反應，參與IR和2型糖尿病的發病等。筆者通過測定IL-6含量，發現用藥后葛根醇提物高、中劑量組IL-6含量顯著低于模型組，說明葛根醇提物能通過下調IL-6改善脂肪組織IR。

綜上所述，葛根醇提物可降低2型糖尿病模型大鼠ISI和TNF-α、IL-6含量，以為葛根在2型糖尿病治療的臨床應用提供理論依據。

[1]Haffner SM，Agostino R，Mykkanen L.Insulin sensitivity in subjectswhith type 2 diabetes[J].Diabetes Care，1999，22（3）：562.

[2]Bloomgarden ZT.American diabetes association annual meeting，insulin resistance，exercise and obesity[J].DiabetesCare，1999，22（3）：517.

[3]耿 慶，高尚志，烏 達，等.葛根素對兔肺缺血再灌注損傷的保護作用[J].中華實驗外科雜志，2005，22（8）：973.

[4]婁海燕，魏欣冰，王汝霞，等.葛根素對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后炎癥反應的抑制作用[J].中國病理生理雜志，2007，23（2）：366.

[5]李光偉，潘孝仁，Stephen Lillioja，等.檢測人群胰島素敏感性的一項新指標[J].中華內科雜志，1993，32（10）：656.

[6]沈 雋.TNF-α與肥胖、2型糖尿病的胰島素抵抗[J].國外醫學生理病理科學與臨床分冊，2001，20（2）：154.

[7]Baynes KCR，Whitehead J，Krook A，etal.Molecularmechanisms of inherited insulin resisatance[J].Q J Med，1997，90（8）：557.