HPLC法測定江西不同產地蔓荊子中蔓荊子黃素的含量

楊人澤，鐘美興，鐘星明（贛南醫學院第一附屬醫院，贛州市341000）

蔓荊子為馬鞭草科植物單葉蔓荊Vitex trifoliaL.var.simplicifoliaCham.或三葉蔓荊Vitex trifoliaL.的干燥成熟果實，為辛涼解表藥，具有疏散風熱、清利頭目之功效，常用于治療風熱感冒、頭痛等證[1]。單葉蔓荊分布廣、產量大，其道地藥材產區為山東[2]，江西是其主產區之一[3]；三葉蔓荊主產于海南、廣西、云南等地。目前藥用的蔓荊子有野生和人工栽培之分，由于生長環境的不同，其有效成分的含量差異很大。為了確保其藥理作用和臨床療效，筆者采用高效液相色譜（HPLC）法[4]對江西5地10批次蔓荊子藥材中蔓荊子黃素進行了含量測定[5～7]，以為進一步開發利用蔓荊子[8，9]提供一定的科學依據。

1 儀器與試藥

Agilent1100 HPLC儀（美國惠普公司）；AEL204電子微量分析天平（瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司）；KQ-500B超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，頻率：40 kHz，功率：500 W）；YLD-2000電熱恒溫鼓風干燥箱（黃石市恒豐醫療器械有限公司）。

甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純；蔓荊子黃素（中國食品藥品檢定研究院，批號：111554-200903，純度≥98%）；10批蔓荊子藥材（江西南昌1、江西南昌2、江西樟樹1、江西樟樹2、江西撫州1、江西撫州2、江西九江1、江西九江2、江西贛州1、江西贛州2）均于2009年8月采自江西各地，經鑒定為單葉蔓荊V.trifoliaL.var.simplicifoliaCham.的干燥成熟果實。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Alltima HPC18（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈-50mmol·L-1磷酸二氫鉀溶液（磷酸調pH值為3.0）＝50∶50；流速：1.0m L·m in-1；檢測波長：254 nm；柱溫：室溫；進樣量：10μL。色譜見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.蔓荊子黃素對照品；B.蔓荊子Fig 1 HPLC chromatogram s A.vitexicarpin control；B.V.trifolia

2.2 對照品溶液的制備

取蔓荊子黃素對照品約10mg，精密稱定，置2m L量瓶中，加甲醇超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取1m L，置50m L量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得每1m L含0.1 mg的對照品溶液。0.45μm濾膜濾過，備用。

2.3 供試品溶液的制備

取蔓荊子藥材中粉約2 g，精密稱定，置索氏提取器中，加石油醚（60～90℃）適量，置水浴上提取3 h，棄去石油醚液，殘渣揮干，再加甲醇適量，索氏提取6 h，甲醇提取液濃縮至約25 m L，用甲醇轉移至50m L量瓶中并稀釋至刻度，搖勻，即得（相當于每1m L甲醇中含有蔓荊子藥材40mg）。

2.4 線性關系考察

分別精密吸取蔓荊子黃素對照品溶液2、5、7、10、12 μL，按上述色譜條件進樣分析。以進樣量（X）為橫坐標，峰面積積分值（Y）為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程為Y＝3 743.7X－2 878.2（r＝0.999 4，n＝5）。結果表明，蔓荊子黃素進樣量在0.2～1.2μg范圍內與峰面積積分值呈良好的線性關系。

2.5 精密度試驗

精密吸取同一對照品溶液10μL，連續進樣6次，測定蔓荊子黃素峰面積。結果，RSD＝1.28%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.6 重復性試驗

取同一批樣品適量，共6份，分別按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進樣測定。結果，RSD＝2.64%（n＝6），表明本方法重復性良好。

2.7 穩定性試驗

在室溫條件下，取適量供試品溶液于放置0、2、4、8、12 h時，按上述色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，RSD＝1.2%（n＝5），表明供試品溶液在12 h內穩定。

2.8 加樣回收率試驗

稱取9份已知含量的蔓荊子藥材中粉約1 g，分別按“2.3”項下方法制成供試品溶液（蔓荊子黃素含量為0.582 5mg·g-1），經0.45μm微孔濾膜過濾，各取續濾液0.5m L，置于25m L量瓶中，分別加入低、中、高濃度的蔓荊子黃素對照品溶液各適量，以甲醇定容，按上述色譜條件測定蔓荊子黃素的含量，計算加樣回收率，結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果（n＝9）Tab 1 Resultsof recovery tests（n＝9）

2.9 樣品含量測定

取10批樣品，分別按“2.3”項下方法制備供試品溶液，各取10μL按上述色譜條件進樣，測定峰面積，由線性回歸方程計算樣品中蔓荊子黃素的含量，結果見表2。

3 討論

從測定結果可以看出，江西不同產地的蔓荊子藥材中蔓荊子黃素的含量差異較大，最高的為0.063 7%，最低的為0.033 4%，含量相差2倍以上。其中含量較高的江西九江1、2號采自都昌縣的蔓荊子GAP種植基地。蔓荊子主要生長在海邊沙灘荒洲、河岸沙灘荒洲、鹽堿地三大環境中。研究結果表明，生長在鄱陽湖邊的1、2號樣品及生長在贛江流域周邊的3、4、5、6號樣品要比生長在非河流、湖泊周邊的山區樣品的含量高。本試驗結果可為蔓荊子的栽培、種植及采摘區域提供一定的科學依據，也表明藥用植物都具有一些特異的適應性生境[10]，同時也驗證了江西是蔓荊子的適應產區。

表2 江西不同產地蔓荊子中蔓荊子黃素的含量測定結果（n＝3）Tab 2 Results of content determ ination of vitexicarpin in V.trifolia from different producing areas of Jiangxi province（n＝3）

目前在江西都昌縣已建成全國最大的蔓荊子種植基地，面積達3萬余畝。已有實驗證明，蔓荊子中含有C2－C3雙鍵的黃酮類化合物可以抑制某些癌癥細胞的增殖[11]，可以看出它在癌癥的防治方面具有很大潛力。綜上，本方法簡便、快速、線性關系良好，可為進一步開發利用蔓荊子提供一定的科學依據，但該藥材的開發利用還應在種質、遺傳特性、生境、化學成分、藥理藥效方面做更深入的系統研究。

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