殺菌劑吡唑醚菌酯在大白菜上的殘留動態

張少軍 鄭振山 陳勇達 王 莉 錢 訓

（河北省農林科學院遺傳生理研究所，河北石家莊 050051）

大白菜〔Brassica compestrisL. ssp.pekinensis（Lour）Olsson〕是我國冬春季主要的消費蔬菜，也是出口創匯的主要蔬菜品種之一。我國大白菜播種面積居各類蔬菜之首，而由真菌引起的霜霉病等病害嚴重影響著大白菜的品質和產量，流行年份減產可達50%左右（呂佩珂，1982）。新型殺菌劑吡唑醚菌酯（圖1）是以天然的Strobilurin A為先導化合物開發出的醚菌酯類殺菌劑（侯春青 等，2002；Karadimos et al.，2005；Forster et al.，2006；王佩圣 等，2007；張福遠 等，2007；張鳳蘭，2008；Mercader et al.，2008），其抑菌機理是作用于真菌線粒體呼吸鏈中細胞色素bc1復合物，阻止電子轉移，最終導致細胞死亡，與常用的殺菌劑沒有交互抗藥性，藥效試驗表明對蔬菜的真菌性病害如白粉病、霜霉病、炭疽病和葉斑病等有較好的防治效果（侯春青 等，2002）。

在我國，農藥的不合理使用導致的農產品及其加工制品中的農藥殘留問題時有發生，對消費者的健康構成了威脅；此外，農藥殘留問題也是影響農產品出口貿易的一個重要因素。目前尚沒有吡唑醚菌酯在我國大白菜上的殘留研究數據，本試驗圍繞吡唑醚菌酯在大白菜上的殘留動態開展研究，以探明吡唑醚菌酯在我國大白菜上的殘留規律，提出殺菌劑吡唑醚菌酯在我國大白菜上的合理使用建議。

圖1 吡唑醚菌酯

1 材料與方法

1.1 試劑

250 g·L-1吡唑醚菌酯乳油，吡唑醚菌酯標準品（99.7%），國家農藥質檢中心提供；乙腈，色譜純；水，二次去離子水；丙酮、正己烷、甲苯、二氯甲烷、氯化鈉，分析純試劑；無水硫酸鈉，550 ℃烘烤2 h，于干燥器中冷卻后置于密閉容器中保存；硅膠柱：120 mm×10 mm玻璃柱，下塞脫脂棉，1 g硅膠，加8 mL正己烷調勻后濕法裝柱，上部以1 cm厚無水硫酸鈉封頂，用5 mL正己烷預淋。

1.2 儀器

Agilent 1100液相色譜儀，帶可變波長檢測器和色譜工作站（安捷倫科技有限公司生產）；高速組織搗碎機（江蘇江陰科研器械廠生產）；勻漿機（德國IKA生產）；超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司生產）；旋轉蒸發器（上海亞榮生化儀器廠生產）；常規玻璃儀器（天津市天玻玻璃儀器有限公司生產）；QTH-16噴霧器（臺州市綠蜻蜓噴霧器有限公司生產）。

1.3 田間試驗

試驗于2010年在河北省石家莊市、湖南省長沙市進行。河北試驗點大白菜品種為天正夏白2號（河北省農業科學院提供），8月8日播種，起壟種植，定植密度2 800株·（667 m2）-1；湖南試驗點大白菜品種為夏冬青（湖南省農業科學院提供），8月 20日播種，起壟種植，定植密度 3 000 株·（667 m2）-1。

1.3.1 消解動態試驗 在大白菜長至成熟個體 1/2大小時一次性施藥，用背負式噴霧器均勻噴霧，施藥劑量25 g·（667 m2）-1，藥液量40 L·（667 m2）-1，3次重復，小區面積30 m2。于施藥后1 h，1、3、7、14、21、28、35 d隨機采集大白菜樣品，每小區至少采集4株，不少于2 kg，切除根部，去掉明顯腐壞和萎蔫部分的莖葉，將剩余大白菜全株切碎混勻，采用四分法留取150 g樣品2份供測定。

1.3.2 最終殘留試驗 設2個施藥劑量，分別為12.50 g·（667 m2）-1和18.75 g·（667 m2）-1，各設3次、4次施藥，3次重復，小區面積30 m2，小區之間用保護田埂隔開。于大白菜收獲前1個月開始施藥，施藥間隔期為7 d，3次施藥處理晚于4次施藥處理7 d開始施藥。于最后一次施藥后3、5、7 d采集大白菜樣品，采樣和處理方法同1.3.1。

1.4 樣品前處理

1.4.1 提取 稱取上述經切碎混勻的大白菜樣品25 g，加入100 mL丙酮，勻漿后抽濾，濾液于50 ℃水浴中減壓蒸除大部分丙酮，加入100 mL 10%氯化鈉溶液，用二氯甲烷萃取3次，每次50 mL，收集二氯甲烷萃取液，減壓蒸至近干，加入5 mL正己烷，蒸至約3 mL，待硅膠柱凈化。

1.4.2 凈化 硅膠柱用5 mL正己烷預淋，待液面降至硅膠頂部時，將殘留物上柱，再用1 mL正己烷洗滌容器后上柱，棄去淋出液，依次用淋洗劑A（甲苯/正己烷，65V∶35V）、B（甲苯）、C（甲苯/丙酮，95V∶5V）、D（甲苯/丙酮，8V∶2V）各3 mL洗滌容器后上柱，淋完后再各用6 mL淋洗劑分兩次洗滌容器后上柱，合并收集C、D兩組分淋出液于20 mL試管中，50 ℃水浴氮氣吹干，用乙腈定容至5 mL待測。

1.5 色譜檢測條件

色譜柱：Kromasil 100-5 C18，4.6 mm×250 mm，5 μm；流動相：乙腈/水（70V∶30V）；流量：1 mL·min-1；檢測波長：275 nm；柱溫：40 ℃；進樣量：20 μL。

2 結果與分析

2.1 吡唑醚菌酯殘留分析方法考察

在本試驗色譜條件下測定吡唑醚菌酯的標準系列溶液，以峰面積對進樣量作圖，繪制吡唑醚菌酯的標準工作曲線，在0.1～10.0 μg·mL-1濃度范圍內其回歸方程為y=3.415 9x+2.941 7，相關系數r=0.999 9；以3倍信噪比計算，該方法的最小檢出量為 1 ng，最低檢出濃度為 0.04 mg·kg-1。取對照大白菜樣品，做添加回收率試驗，添加濃度分別為0.04、0.20、2.00 mg·kg-1，每個濃度做5個平行試驗，吡唑醚菌酯的回收率在70%～106%之間，變異系數為6.6%～10.0%（表1），表明該方法的準確度和精密度均符合農藥殘留測定的要求。從樣品譜圖可以看出（圖2），吡唑醚菌酯峰型對稱，與樣品基質中其他干擾組分能夠實現基線分離，譜圖和添加回收率試驗證明該方法能夠用于大白菜中吡唑醚菌酯殘留量的分析測定。

表1 吡唑醚菌酯在大白菜中的添加回收率

2.2 吡唑醚菌酯在大白菜中的消解動態

對河北和湖南兩地的消解動態試驗樣品進行了分析測定，吡唑醚菌酯在大白菜上的殘留消解動態曲線見圖3。兩地消解動態試驗樣品殘留量檢測結果均符合一級動力學特征，河北試驗點施藥當天吡唑醚菌酯在大白菜上的原始沉積量為40.4 mg·kg-1，殘留量按C=28.8e-0.234T降解，相關系數r=-0.943 4，半衰期為2.97 d；湖南試驗點施藥當天吡唑醚菌酯在大白菜上的原始沉積量為40.1 mg·kg-1，殘留量按C=22.4e-0.208T降解，相關系數r=-0.964 7，半衰期為3.34 d（表2）。兩組試驗數據顯示，在河北和湖南兩地不同的氣候條件下，吡唑醚菌酯在大白菜上的消解速率相差不大，且半衰期均較短，說明吡唑醚菌酯在大白菜上比較易于降解。

圖2 大白菜樣品液相色譜圖

圖3 吡唑醚菌酯在大白菜中的消解動態曲線

2.3 吡唑醚菌酯在大白菜中的最終殘留檢測結果

對河北和湖南兩地的最終殘留試驗樣品進行了分析測定，結果見表3。按推薦劑量 12.50 g·（667 m2）-1和 1.5 倍劑量 18.75 g·（667 m2）-1，施藥3次、4次，距末次施藥3、5 d，吡唑醚菌酯在大白菜中的殘留量為1.50～7.68 mg·kg-1；距末次施藥7 d，吡唑醚菌酯在大白菜中的殘留量為0.96～2.70 mg·kg-1。施藥次數和施藥劑量對大白菜的最終殘留結果有一定影響，在施藥次數相同的情況下施藥劑量大的處理最終殘留量高于劑量小的處理，在施藥劑量相同的情況下施藥次數多的處理最終殘留量高于施藥次數少的處理。

表2 吡唑醚菌酯在大白菜中的消解動態

表3 吡唑醚菌酯在大白菜中的最終殘留測定結果

3 結論

目前，我國和聯合國食品法典委員會（CAC）尚未規定吡唑醚菌酯在大白菜上的最高殘留限量（MRL）值，日本規定吡唑醚菌酯在大白菜上的MRL為5 mg·kg-1，美國規定吡唑醚菌酯在蔬菜上MRL值也為5 mg·kg-1。以此為依據，根據本試驗結果，250 g·L-1吡唑醚菌酯乳油防治大白菜炭疽病，按推薦劑量和次數施藥，距最后一次施藥 7 d收獲的大白菜中吡唑醚菌酯殘留量滿足殘留限量要求，食用安全。

侯春青，李志念，劉長令.2002.新型Strobin類殺菌劑唑菌胺酯.農藥，41（6）：34，41-43.

呂佩珂.1982.包頭市白菜霜霉病流行規律與防治.內蒙古農業科技，（4）：26-31.

王佩圣，程星，朱金鈺，趙清春，寇書蓮.2007.60%吡唑醚菌酯·代森聯水分散粒劑（百泰）防治黃瓜疫病田間藥效試驗.農藥科學與管理，（9）：43-45.

張鳳蘭.2008.大力發展大白菜生產和消費新模式.中國蔬菜，（1）：9.

張福遠，王紹敏，劉秀玲，李霞，梁金云.2007.60%吡唑醚菌酯·代森聯（百泰）水分散粒劑對卵菌綱真菌引起的蔬菜病害控制作用研究.農藥科學與管理，（7）：35-37.

Forster W A，Zabkiewicz J A，Liu Z Q.2006.Cuticular uptake of xenobiotics into living plants.part 2：influence of the xenobiotic dose on the uptake of bentazone，epoxiconazole and pyraclostrobin，applied in the presence of various surfactants，intoChenopodium album，Sinapis albaandTriticum aestivumleaves.Pest Management Science，62（7）：664-672.

Karadimos D A，Karoglanidis G S，Tzavella-Klonari K.2005.Biological activity and physical modes of action of the Qoinhibitor fungicides trifloxystrobin and pyraclostrobin againstCercospora beticola.Crop Protection，24（1）：23-29.

Mercader J V，Suarez-pantaleon C，Agullo C，Abad-somovilla A，Abad-fuentes A.2008.Production and characterization of monoclonal antibodies specific to the strobilurin pesticide pyraclostrobin.Journal of Agricultural and Food Chemistry，56（17）：7682-7690.