芹菜根提取物對D-氨基半乳糖所致急性肝損傷的保護作用研究Δ

陳妍，劉軍，林伊梅，馬亮英，烏莉婭·沙依提（.新疆醫科大學第二附屬醫院藥劑科，烏魯木齊市830063；.新疆醫科大學中醫學院中藥系，烏魯木齊市 830054）

新疆地產維藥芹菜根系傘形科植物歐芹Petroselinum crispum（Mill）Hill的干燥根，主要分布在和田、阿克蘇一帶。與其他芹菜相比，其根部粗壯，色深，有著獨特的地域特色，是維吾爾醫藥中常用的植物藥。

芹菜根作為一種常用的維藥以飲片形式在臨床廣泛用于高血壓、高血脂、病毒性肝炎、關節炎等的治療，但對其活性成分和藥理學研究卻未見系統報道。目前，其臨床應用尚缺乏科學的實驗依據。本研究采用D-氨基半乳糖（D-GaIN）復制大鼠急性肝損傷模型，觀察維藥芹菜根提取物對急性肝損傷的保護作用，為維醫臨床肝病用藥及進一步研發該藥提供理論依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器

75型紫外分光光度計（上海精密儀器儀表有限公司）。

1.2 試藥

芹菜根原材料（購于新疆維吾爾民族醫院，經筆者鑒定為真品）；聯苯雙酯滴丸（浙江醫藥股份有限公司新昌制藥廠，批號：33020232）；D-GaIN（重慶醫科大學生物工程研究室，批號：070312），臨用時將其配成10%的生理鹽水溶液，用0.01 mol·L-1NaOH調pH值至7.0；超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）測試盒（南京建成生物工程研究所提供）。

1.3 動物

普通級Wister大鼠50只，♀♂兼用，體重（200±20）g，由新疆醫科大學動物中心提供（動物生產許可證號：SCXK（新）2003-0001）。

2 方法

2.1 藥物的提取

取芹菜根原藥材粗粉適量，加入6倍量70%的乙醇，回流提取2次，每次1 h，過濾，濾液濃縮、干燥，即得芹菜根提取物。其得率為10.14%，1 g提取物相當于9.86 g生藥。

2.2 分組與給藥[1]

將50只大鼠隨機分為正常對照（等容生理鹽水）、模型對照（等容生理鹽水）、聯苯雙酯（0.2 mg·kg-1）和芹菜根提取物高、低劑量（3、1.5 g·kg-1）組。ig給藥，連續7 d。末次給藥1 h后，除正常對照組外，各組均按0.5 mg·kg-1ip D-GaIN溶液。

2.3 指標的測定

大鼠禁食不禁水20 h后，腹主動脈取血，分取血清，測定天冬氨酸氨基轉移酶（AST）、丙氨酸氨基轉移酶（ALT）。取肝右葉同一部位肝組織，用黃嘌呤氧化酶法測定SOD活性，用硫代巴比妥酸比色法測定MDA含量。

2.4 統計學方法

實驗數據均以±s表示。假設檢驗水準定為0.05，用統計學軟件對計量資料進行正態性、方差齊性檢驗，5組間各檢測指標的比較用單因素方差分析，兩兩比較用q檢驗法。所有數據均用SPASS11.0統計軟件包處理。

3 結果

3.1 芹菜根提取物對D-GaIN誘導的急性肝損傷模型大鼠血清ALT和AST活性的影響

大鼠注射D-GaIN溶液后，血清ALT、AST活性顯著增強（P＜0.01），表明D-GaIN引起了大鼠急性肝損傷，復制模型成功。與模型對照組比較，高劑量芹菜根提取物能顯著降低模型大鼠ALT與AST活性（P＜0.01），低劑量芹菜提取物能降低模型大鼠AST（P＜0.05），但對ALT的影響無顯著意義，提示芹菜根提取物高劑量組對大鼠急性肝損傷有明顯的保護作用。芹菜根提取物對D-GaIN所致大鼠急性肝損傷血清ALT、AST活性的影響見表1。

3.2 芹菜根提取物對D-GaIN誘導的急性肝損傷模型大鼠肝組織MDA含量與SOD活性的影響

與正常對照組比較，模型對照組大鼠MDA含量顯著升高，SOD活性顯著下降（P＜0.01），表明復制模型成功。芹菜根高、低劑量組與模型對照組比較MDA含量顯著降低，SOD活性顯著升高（P＜0.01）。提示高、低劑量芹菜根提取物對D-GaIN誘導的大鼠急性肝損傷肝組織的MDA含量升高和SOD活性減弱有抑制作用。芹菜根提取物對D-GaIN所致大鼠急性肝損傷肝組織MDA含量與SOD活性的影響見表2。

表1 芹菜根提取物對D-GaIN所致大鼠急性肝損傷血清ALT、AST活性的影響（±s）Tab1 Effects of P.crispum root on the activities of ALT and AST in rats with D-galactosami induced acute liver injury（±s）

表1 芹菜根提取物對D-GaIN所致大鼠急性肝損傷血清ALT、AST活性的影響（±s）Tab1 Effects of P.crispum root on the activities of ALT and AST in rats with D-galactosami induced acute liver injury（±s）

與正常對照組比較：＊P＜0.01；與模型對照組比較：#P＜0.05，##P＜0.01vs.normal control group：＊P＜0.01；vs.model control group：#P＜0.05，##P＜0.01

組別正常對照組模型對照組聯苯雙酯組芹菜根提取物高劑量組芹菜根提取物低劑量組ALT/U·L-1 35.2±2.82 4 028.3±1 949.17＊941.6±1 131.33##1 205±456.84##5 106.8±3 297.11 n 10 10 10 10 10 AST/U·L-1 104.8±12.49 7 435.7±3 447.13＊936.2±930.28##1 178.5±592.44##5 149.5±2 736.22#

表2 芹菜根提取物對D-GaIN所致的急性肝損傷肝組織MDA含量與SOD活性的影響（±s）Tab2 Effects of P.crispum root on MDA content and SOD activity in rats with D-galactosami induced acute liver injury（±s）

表2 芹菜根提取物對D-GaIN所致的急性肝損傷肝組織MDA含量與SOD活性的影響（±s）Tab2 Effects of P.crispum root on MDA content and SOD activity in rats with D-galactosami induced acute liver injury（±s）

與正常對照組比較：＊P＜0.01；與模型對照組比較：#P＜0.01vs.normal control group：＊P＜0.01；vs.model control group：#P＜0.01

組別正常對照組模型對照組聯苯雙酯組芹菜根提取物高劑量組芹菜根提取物低劑量組SOD/U·L-1 178.52±5.05 80.35±10.00＊122.6±2.86#117.45±6.36#108.65±6.05#n 10 10 10 10 10 MDA/nmol·L-1 2.11±1.7 7.05±2.89＊2.71±0.92#2.86±1.04#4.93±1.23#

4 討論

肝臟損傷的原因大致可分為化學性損傷和免疫性損傷兩大類。D-GalN主要損傷胞質內細胞器，耗竭體內磷酸尿苷，使依賴其生物合成的核糖蛋白、脂糖等物質減少，限制細胞器及酶的生成和補充，使細胞器受損。由D-GalN引起的急性肝損傷模型常用作篩選抗肝炎藥物；D-GalN還可以產生氧化應激反應產生氧自由基，攻擊脂質細胞膜，造成肝細胞脂質過氧化性損傷[2]。

血清ALT水平的高低可靈敏反映肝細胞變性、壞死的程度，其大部分存在于細胞漿中[3]。AST主要位于線粒體，少部分位于細胞漿。當肝臟輕度受損、細胞膜通透性開始增加時，胞漿內ALT、AST釋放入血，而線粒體內AST則不釋放，只有肝細胞嚴重受損時才釋放入血。當肝實質細胞結構受損，特別是實膜性結構受損時，胞漿內ALT和線粒體內AST釋放，從而引起血清ALT和AST升高[4]。

聯苯雙酯在臨床上已經很少使用，但在很多動物藥理學實驗上依然廣泛應用，其原因是聯苯雙酯是專屬的降酶藥，而其降酶作用也比較明顯，其他作用的干擾程度較小，而本研究選用的檢測指標正是氨基轉移酶，因此筆者選用該藥作為陽性對照藥，主要是觀察對比芹菜根對肝損傷大鼠氨基轉移酶升高的抑制作用。

據筆者對維醫院醫師臨床使用該藥的調查結果來看，芹菜根是一種低毒性的藥物，且目前也沒有發現由于使用該藥而出現任何不良反應的情況。筆者對該藥做過半數致死量的實驗，發現無法測出半數致死量。因此，筆者又對該藥進行了限量實驗，大鼠禁食一夜后ig 5 g·kg-1（大鼠的胃所能容納的3 mL體積中藥物溶解的最大量）藥物浸膏，觀察14 d，沒有發現動物死亡。證實該藥物為低毒的受試物，劑量以＞5 g·kg-1表達。在選取劑量時，筆者選用了最大溶解量[5 g·kg-1，相當于臨床上人正常用藥（0.15 g·kg-1）的20倍]的60%，即3 g·kg-1為高劑量，50%的高劑量為低劑量作為實驗所用劑量。

實驗中選取7 d作為實驗天數是參考《藥理實驗方法學》第3版上規定的急性肝損傷的實驗天數。同時，在進行正式實驗之前，筆者以最常用的5、7、10、15 d做過預試，發現以上4個時間段所測結果沒有顯著區別，與《藥理實驗方法學》中規定的一致。

大鼠ip D-GalN后，血清ALT、AST活性與肝組織中MDA含量升高，SOD活性下降，顯著高于正常對照組。筆者以聯苯雙酯作為陽性對照，研究結果表明，聯苯雙酯組血清AST、ALT活性與肝組織中MDA含量顯著低于模型對照組，SOD活性高于模型對照組。給予芹菜根提取物后，各給藥組的血清ALT、AST活性與肝組織中MDA含量均低于模型對照組，SOD活性均高于模型對照組。說明維藥芹菜根對急性肝損傷有一定的保護作用。其中高劑量的作用更為顯著，顯示出一定的劑量依賴性。對于芹菜根護肝作用的機制，目前尚不清楚，還有待進一步的研究。

[1]徐叔云，陳 修.藥理實驗方法學[M].第3版.北京：人民衛生出版社，2005：200.

[2]王迪生，高繼君.赤芍甘草沖劑對D-半乳糖誘導肝損傷的保護作用[J].中國臨床藥理學與治療學，2006，11（9）：1 026.

[3]李 萍，謝金鮮，林啟云.民族藥余甘子對D-半乳糖胺致小鼠肝損傷的影響[J].中國民族民間醫藥雜志，2003，6（2）：61.

[4]姜 潔，竇昌貴，張玉彬.注射用鯊魚肝再生因子對小鼠急性化學性肝損傷的影響[J].藥物生物技術，2004，11（5）：324.