得力生注射液對鹽酸多柔比星藥動學的影響研究Δ

馮碧敏，葉 云，陳麗娟（瀘州醫學院附屬醫院藥劑科，瀘州市 646000）

鹽酸多柔比星（Doxorubicin，DOX）是目前臨床常用的抗腫瘤藥物，臨床上用于白血病、淋巴瘤等的治療，效果顯著，但有骨髓抑制、心臟毒性等不良反應。得力生注射液是斑蝥、蟾酥、人參、黃芪的全成分提取液，是我國第一個獲得國家二類新藥證書的復方抗癌中藥注射劑，具有明顯抑制腫瘤細胞增殖、促進腫瘤細胞凋亡、誘導腫瘤細胞分化的效應，并具有止痛和提高免疫功能的作用；與抗腫瘤藥物聯用時，能夠保護骨髓細胞免受化療藥物損傷[1]。本文旨在研究鹽酸多柔比星與得力生注射液聯合用藥后對大鼠的藥動學影響，為進一步減輕鹽酸多柔比星心臟毒性、骨髓毒性及促進其合理用藥提供參考和數據支持。

1 儀器與材料

1.1 儀器

DIONEX Ultimate3000型高效液相色譜儀（美國戴安公司）；Kromasystem2000色譜工作站（Bio.Tek Instrument Snl）；TGL16型臺式高速冷凍離心機（長沙英泰儀器公司）；AE240電子天平（瑞士Mettler Toledo公司）；YKH-Ⅲ型液體快速混合器（江西醫療器械廠）；pHS-3C型酸度計（成都方舟科技開發公司）。

1.2 試藥

鹽酸多柔比星注射液（浙江海正藥業股份有限公司，批號：091001，規格：10 mg/支）；得力生注射液（北京正邦制藥有限公司，批號：080207，規格：10 mL/支）；鹽酸多柔比星對照品（批號：130509-200301）、柔紅霉素對照品（批號：130559-200501）均購自中國藥品生物制品檢定所；甲醇（色譜純，批號：10071753）、乙腈（色譜純，批號：10071743）均購自Honeywell Burdick Jackson；水為重蒸餾水，其余試劑均為國產分析純。

1.3 動物

SD大鼠16只，♀♂兼半，體重（200±20）g，由瀘州醫學院實驗動物中心提供（動物生產許可證號：SCXK（川）2008-17號）。

2 方法

2.1 色譜條件

色譜柱：phenomenex C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-0.01 mol·L-1磷酸二氫銨溶液（pH4.65）-冰醋酸（30∶20∶0.1），經超聲清洗器脫氣30 min；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：35 ℃；進樣量：20 μL；紫外檢測波長：254 nm；進樣量：20 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 鹽酸多柔比星對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸多柔比星對照品8.46 mg（97.4%），置于25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，即得329.6 mg·L-1的鹽酸多柔比星對照品貯備液，并將其稀釋配成鹽酸多柔比星濃度為0.206、0.515、1.03、2.06、6.87、10.3、20.6 mg·L-1的系列溶液。4 ℃貯藏，備用。

2.2.2 柔紅霉素內標溶液（IS）的制備 精密稱取柔紅霉素對照品2.53 mg（91%），置于25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，即得92.1 mg·L-1的柔紅霉素對照品內標貯備液，并稀釋為3.68 mg·L-1濃度的內標液。4℃貯藏，備用。

2.3 血清樣品的處理

精密量取血清樣品100 μL，置于10 mL試管內，加入甲醇100 μL、3.68 mg·L-1IS 100 μL、乙酸乙酯1.0 mL，渦旋混合 5 min，5 000 r·min-1離心10 min，移取有機層于尖底離心管中，置30℃水浴中用空氣流揮干，殘渣用50 μL甲醇溶解，渦旋2 min，取上清液20 μL進樣。

2.4 給藥方法和樣本采集

2.4.1 分組和給藥 將SD大鼠隨機均分為2組，即Ⅰ組（鹽酸多柔比星注射液單用組，單用組）、Ⅱ組（鹽酸多柔比星與得力生注射液聯合用藥組，聯用組）。根據臨床用藥劑量反推大鼠劑量，Ⅰ組：給予鹽酸多柔比星注射液6 mg·kg-1；Ⅱ組：給予得力生注射液6.0 mL·kg-1，0.5 h后給予鹽酸多柔比星6 mg·kg-1，iv給藥。

2.4.2 血清樣品采集 于iv鹽酸多柔比星后0.083、0.167、0.5、1、3、6、12、24 h時間點采血0.2 mL。取血后血樣靜置30 min，3 000 r·min-1離心15 min，分取血清，于低溫冰箱－20℃存放，待測血藥濃度。按“2.3”項下方法操作，測定血藥濃度。

2.5 統計學方法和藥動學分析

測得的血液濃度-時間數據用中國藥理學會編制的DAS（Drug And Statistics ver 2.1.1）藥動學程序擬合，并計算主要的藥動學參數；各藥動學參數采用SPSS 14.0軟件，用t檢驗進行統計學分析。

3 結果

3.1 HPLC的方法學驗證

3.1.1 標準曲線的制備 在選定色譜條件下，鹽酸多柔比星與內標峰峰形良好，分離完全，空白血清在鹽酸多柔比星、內標柔紅霉素的保留時間（分別為6.45、11.30 min）處無雜峰出現。血清HPLC見圖1。

圖1 血清HPLC圖A.空白血清；B.空白血清＋鹽酸多柔比星＋內標；C.血清樣品；1.鹽酸多柔比星；2.內標（柔紅霉素）Fig1 HPLC chromatograms of serumA.blank serum；B.blank serum+doxorubicin hydrochloride+internal standard；C.serum sample；1.doxorubicin hydrochloride；2.internal standard（daunorubicin）

以測定的樣品峰高與內標峰高的比值（Y）為縱坐標，鹽酸多柔比星濃度（X）為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程為Y＝0.342 9X+0.268 5（r＝0.998 0）。結果表明，鹽酸多柔比星檢測濃度在0.206～20.600 mg·L-1范圍內同樣品峰高與內標峰高的比值線性關系良好。

3.1.2 加樣回收率試驗 于空白大鼠血清中分別加入高、中、低濃度的鹽酸多柔比星對照品溶液，照“2.3”項下方法操作，3種濃度平行操作5次，測定，以測得量與加入量之比計算空白加樣回收率，結果見表1。

3.1.3 精密度試驗 于空白大鼠血清中，分別加入低、中、高濃度的鹽酸多柔比星對照品溶液，照“2.3”項下方法操作，每種濃度樣品平行配制5份，在1 d內不同時間點測定，進行日內精密度考察；在1周內不同日期測定，進行日間精密度考察，結果見表1。

表1 回收率和精密度試驗結果（±s，n＝5）Tab1 Results of recovery and precision test（±s，n＝5）

表1 回收率和精密度試驗結果（±s，n＝5）Tab1 Results of recovery and precision test（±s，n＝5）

理論值/mg·L-1測得值/mg·L-1 x 0.486±0.021 5.210±0.113 10.570±0.379/%RSD/%4.41 2.16 3.59回收率/%94.4 101.2 102.6日間精密度測得值/mg·L-1 0.524±0.024 5.204±0.141 10.076±0.2220.515 5.150 10.300 99.4 RSD/%4.55 2.81 2.20日內精密度測得值/mg·L-1 0.493±0.027 5.132±0.174 10.162±0.336 RSD/%5.40 3.40 3.31

3.2 藥動學研究

單用、合用鹽酸多柔比星藥動學參數見表2；鹽酸多柔比星單用與合用平均藥-時曲線見圖2。

表2 單用、合用鹽酸多柔比星藥動學參數（±s，n＝5）Tab2 Pharmacokinetic parameters of doxorubicin hydrochloride alone or combined with other drug（±s，n＝5）

表2 單用、合用鹽酸多柔比星藥動學參數（±s，n＝5）Tab2 Pharmacokinetic parameters of doxorubicin hydrochloride alone or combined with other drug（±s，n＝5）

參數 單位t1/2α t1/2β h h Vl C L AUC（0-t）AUC（0-∞）Cmax L·kg-1 L·kg·h-1 mg·h·L-1 mg·h·L-1 mg·L-1單用組0.258±0.029 30.213±5.259 0.346±0.032 0.082±0.027 37.684±3.872 81.867±29.656 15.360±1.503聯用組0.266±0.003 35.243±2.590 0.573±0.084 0.143±0.044 23.252±3.651 46.791±18.063 9.593±1.495

圖2 鹽酸多柔比星單用與合用的平均藥-時曲線A.單用組；B.聯用組Fig2 Serum concentration-time curves of doxorubicin hydrochloride alone and combined with other drugsA.Stilamin group；B.Coupled group

4 討論

文獻[2，3]采用HPLC法檢測鹽酸多柔比星血藥濃度。由于鹽酸多柔比星與抗凝劑會發生反應從而會影響其濃度的測定，故筆者在本研究中采用了血清樣本。在血清預處理時選擇乙醚、乙酸乙酯和三氯甲烷作為提取溶劑進行比較，結果三氯甲烷的提取回收率較高，但毒性較大，且易乳化；乙醚揮發性較大，容易受溫度影響，故最后選擇乙酸乙酯作為提取溶劑，回收率較令人滿意，測定結果穩定可靠，且靈敏度可以達到要求。

目前有關鹽酸多柔比星的臨床藥動學和藥效學的研究多以單一藥物為主[4～7]，而與其他藥物尤其是中藥聯合應用的藥動學研究國內鮮有報道。筆者首次將得力生注射液與鹽酸多柔比星聯合應用，研究中藥對鹽酸多柔比星藥動學參數的影響，由藥動學數據推測：得力生注射液與鹽酸多柔比星聯合應用時，鹽酸多柔比星的AUC降低了35.08%，最大達峰時間（Cmax）降低了37.8%，消除半衰期（t1/2β）延長了16.6%，差異均有統計學意義（P＜0.05）。表明得力生注射液可影響鹽酸多柔比星的吸收參數。筆者認為可能是藥物促進了血液循環，使表觀分布容積變大，鹽酸多柔比星較多地向組織轉運，使得血藥濃度變低、AUC變小、t1/2β延長，同時也可能減少了藥物的毒副作用。

目前，在腫瘤治療過程中，中西藥物聯用的情況越來越普遍，它具有增強患者體質，提高患者對手術、放療、化療等的耐受力，減輕各種治療的毒副反應，提高生存質量，延長生存期，預防腫瘤復發等作用，成為腫瘤綜合治療的重要而獨特的手段之一。因此，研究聯合用藥時，藥動學參數的變化可以考慮是傳統用藥可能引起的毒性反應以及聯合用藥時產生的藥物相互作用，這對于調整臨床用藥方案、提高治療效果、減少不良反應、實現個體化用藥具有極其重要的意義。

[1]陳信義，雒 琳.得力生注射液組方科學依據與臨床應用前景分析[J].現代腫瘤醫學，2006，14（3）：378.

[2]侯 梅，余 萍，仲渝民，等.阿霉素不同劑量靜脈注射的藥動學及其臨床意義[J].中國藥房，1995，6（6）：25.

[3]湯致強，徐 弛，王麗焱，等.HPLC測定磁導向載體多柔比星在患者體內的血藥濃度[J].中國新藥雜志，2003，12（8）：641.

[4]Vora J，Boroujerlerdi M.Pharmacokinetic toxicodynamic relationships of adriamycin in rat：prediction of butylated hydroxyanisolemediated reduction in angh racycline cardio toxicity[J].J Pharm Pharmacol，1996，48（11）：1 264.

[5]Len WS，Karel U，Jiri S，et al.The pharmacokinetics of Polylmer-bound adriamycin[J].Biochem Pharmacol，1990，39（5）：1 125.

[6]安 杰，韓淑英，安國斌.阿霉素與維拉帕米聯合用藥與單一用藥的藥動學及組織分布比較[J].中國煤炭工業醫學雜志，2005，8（6）：600.

[7]龍曉英，朱 敏，李志強.中藥黃藥子對大鼠阿霉素藥物動力學的影響[J].中國臨床藥學雜志，2000，9（2）：91.