不同生長環境灰氈毛忍冬中微量元素的含量比較Δ

王小翠，王永勝，張輝，徐曉玉（西南大學藥學院/重慶市藥效評價工程技術研究中心，重慶市400716）

灰氈毛忍冬Lonicera macranthoidesHand.-Mazz.屬于忍冬科植物，已收錄在2010年版《中國藥典》中，歸類為山銀花[1]。藥理學研究表明，山銀花具有清熱解毒、涼散風熱、保肝、免疫調節、降血脂等作用。其化學成分主要為綠原酸、黃酮類化合物、木犀草素及微量元素等，其中微量元素共15種[2]。中藥藥效與微量元素密切相關，但關于灰氈毛忍冬中微量元素的研究尚未見相關的文獻報道。筆者采用HNO3-HClO4消解法處理樣品，利用火焰原子吸收光譜法和原子發射光譜法，對4個不同生長環境的灰氈毛忍冬中9種微量元素進行含量分析，以為灰氈毛忍冬的規范化種植、GAP基地建設及飲片質量控制提供依據。

1 儀器與試藥

TAS-990型火焰原子吸收分光光度計、TPS-7000型原子發射光譜儀（北京普析通用儀器有限責任公司）；EL2046型電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。

銅（Cu）、鋅（Zn）、鐵（Fe）、錳（Mn）、鉛（Pb）、鉻（Cr）、鎳（Ni）、鎘（Cd）、硒（Se）的標準溶液（1 000 μg·mL-1）均購自國家標準物質研究中心（批號分別為GSB-04-1725-2004、GSB04-1761-2004、 GSB04-1726-2004、 GSB04-1736-2004、 GSB04-1742-2004、 GSB04-1723-2004、 GSB04-1740-2004、 GSB04-1721-2004，GSB04-1751-2004）；硝酸、高氯酸、鹽酸均為分析純，實驗用水為超純水；灰氈毛忍冬樣品采自重慶市秀山縣清溪場、鐘靈、川河蓋、隘口4個地區，分別命名為A、B、C、D產地，所有樣品經西南大學藥學院中藥教研室祝慧鳳副教授鑒定均為忍冬科植物灰氈毛忍冬L.macranthoidesHand.-Mazz.。

2 方法與結果

2.1 樣品和器皿的預處理

將灰氈毛忍冬用超純水沖洗干凈，60℃干燥4 h，粉碎，過60目篩，105℃干燥至恒重，置于干燥器中貯藏，備用。玻璃器皿先用重鉻酸鉀洗液浸泡12 h，用超純水洗凈，再用鹽酸溶液（1∶1）浸泡12 h，洗凈，烘干，備用。

2.2 儀器工作條件

采用空氣-乙炔火焰法，用火焰原子吸收分光光度計測定Cu、Zn、Fe、Mn、Pb、Cr、Ni、Cd的含量，其工作條件為燃氣流量：1.0 L·min-1；負高壓：300.0 V；預熱燈電流：2.0 mA；其余條件見表1。用原子發射光譜儀測定Se的含量，其工作條件為輸出功率：1 kW；載氣壓力：0.2 MPa；冷卻氣流量：700 mL·min-1；輔氣流量：10 mL·min-1；檢測波長：196.090 nm。

表1 火焰原子吸收分光光度計工作條件Tab1 Operation condition of flame atomic absorption spectroscopy

2.3 標準曲線及線性范圍

將Cu、Zn、Fe、Mn、Pb、Cr、Ni、Cd、Se 1 000 μg·mL-1的標準溶液按要求進行稀釋，得到系列標準溶液，按“2.2”項下工作條件進樣分析。以吸光度（A）或強度值（I）對濃度（c）進行線性回歸，得各元素的回歸方程和線性范圍，詳見表2。

表2 各元素的線性回歸方程和線性范圍（n＝5）Tab2 Linear range and linear regression equation of each element（n＝5）

2.4 供試品溶液及空白對照溶液的制備

精密稱取干燥至恒重的灰氈毛忍冬樣品1 g，置于150 mL錐形瓶中，加入10 mL硝酸、5 mL高氯酸，混勻，加熱消解，保持微沸狀態，至溶液澄明后升高溫度，繼續加熱至冒濃煙，白煙散盡時消解液呈無色透明狀。當消解液剩余約1 mL時停止加熱，放冷后用2%硝酸溶液溶解錐形瓶內的白色結晶物質，定容至25 mL，即為待測供試品溶液。取不加灰氈毛忍冬樣品，同法制備空白對照溶液。

2.5 精密度試驗

取Cu、Zn、Fe、Mn、Pb、Cr、Ni、Cd、Se 標準溶液適量，按“2.2”項下工作條件重復進樣6次，根據標準曲線計算各元素含量。結果，各元素的RSD分別對應為1.19%、1.89%、3.49%、6.12%、6.08%、6.58%、3.53%、2.48%、3.41%（n＝6），表明該方法精密度良好。

2.6 回收率試驗[3]

精密稱取已知含量的灰氈毛忍冬樣品（產地A）9份，各0.5 g，分為3組，置于150 mL錐形瓶中，分別按照已知樣品微量元素含量的25%、50%、75%加入各元素標準溶液，每個梯度做3份，按“2.4”項下方法制備待測供試品溶液，并按“2.2”項下工作條件進樣，根據標準曲線計算各元素含量和回收率，結果見表3。

表3 回收率試驗結果（n＝9）Tab 3Results of recovery test（n＝9）

由表3可知，Cu的回收率在100%～102%之間，Zn、Fe的回收率均在99%～102%之間，Mn的回收率在97%～100%之間，Pb的回收率在100%～101%之間，Cr的回收率在98%～101%之間，Ni的回收率在96%～102%之間，Cd的回收率在98%～105%之間。表明采用火焰原子吸收光譜法測定這8種微量元素穩定性好，結果準確、可靠，能夠達到檢測要求。

Se的回收率在97%～102%之間，表明采用原子發射光譜法測定Se穩定性好，結果準確、可靠，能夠達到檢測要求。

2.7 樣品含量測定

取待測供試品溶液，按“2.2”項下工作條件進樣，根據標準曲線計算各元素含量，結果見表4。

表4 不同產地灰氈毛忍冬中各元素的含量（n＝3）Tab4 Contents of every element in L.macranthoides from different habitats（n＝3）

3 討論

試驗結果表明，灰氈毛忍冬中含有豐富的人體必需的微量元素Fe，而重金屬元素Pb、Cr、Ni、Cd的含量較少。比較這4個生長環境的灰氈毛忍冬中微量元素的含量可以看出，B地區灰氈毛忍冬中Zn、Mn的含量相比其他3個地區較高，有極顯著性差異（P＜0.01）。可見，B地區所產灰氈毛忍冬藥材質量更優。

微量元素是維持人體物質代謝的重要化學元素，與人類的健康密切相關。Cu、Fe與機體的造血功能有關，Zn、Mn能參與多種酶的合成，能夠通過酶系統發揮抗菌、抗病毒作用[4]，并對免疫系統起調節作用[5]，這可能與山銀花具有清熱解毒、免疫調節之功效有關。有資料顯示，人體血清中的Cu/Zn比值與肝癌的發生密切相關，肝癌組Cu/Zn比值顯著高于對照組[6]。而本研究表明4個產地的灰氈毛忍冬均表現為Cu低Zn高的趨向，則Cu/Zn比值降低，有助于調節患者體內Cu、Zn的平衡，這可能與山銀花具有保肝功效有關。Se是谷胱甘肽過氧化物酶的組成成分[7]，能間接清除體內自由基、抗衰老，而且還是部分有毒重金屬元素如Cd、Pb的天然解毒劑。本試驗結果表明，灰氈毛忍冬能夠補充人體必需的微量元素，長期食用具有保健的功效。

本試驗對4個不同生長環境的灰氈毛忍冬進行了9種微量元素的含量比較，從而為灰氈毛忍冬類藥材GAP基地建設及飲片質量控制提供數據參考。由于2010年版《中國藥典》并未對山銀花中微量元素的含量進行限定[1]，建立一套關于灰氈毛忍冬中微量元素的含量限定標準，將有助于提高藥材的質量和市場競爭力。

[1]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（一部）[S].2010年版.北京：中國醫藥科技出版社，2010：28-29.

[2]騰紅麗.金銀花藥材的綜合研究分析[J].中藥材，2007，30（6）：744.

[3]霍仕霞，閆 明，劉曉東，等.白花丹中微量元素的測定[J].中國藥房，2010，21（11）：1 008.

[4]黃島平，莫建光，勞燕文.山藥中16種元素的分析比較[J].廣東微量元素科學，2002，9（2）：47.

[5]孔祥瑞.必需微量元素的營養、生理及臨床意義[M].合肥：安徽科學技術出版社，1982：299.

[6]鄭美蓉，阮幼冰，武忠弼.微量元素銅和鋅在實驗性肝癌中的變化及意義[J].微量元素與健康研究，2000，17（1）：6.

[7]王勇健.微量元素與疾病的關系[J].家庭醫學（新健康），2007，5（1）：7.