四川省攀西地區南瓜、甜菜和辣椒部分病毒種類的ELISA檢測

楊會房 阮 濤 包凌云 于云奇 楊水英 青 玲

（西南大學植物保護學院，植物病害生物學重慶市高校級重點實驗室，重慶 400716）

攀西地區自然條件得天獨厚，是四川省主要的蔬菜生產基地，但隨著南瓜、番茄、甜菜及辣椒等蔬菜的種植面積不斷擴大及種植年限的增加，病毒病的危害也日趨嚴重。了解這些蔬菜上的病毒種類、變化趨勢及復合侵染情況，對于有針對性地制定以抗病育種為中心的綜合防治措施具有重要指導意義。為此，筆者在攀枝花、西昌及德昌地區對甜菜、辣椒和南瓜病毒病進行了調查和取樣，利用蔬菜上常見的6種植物病毒的特異性血清對樣品進行了ELISA檢測，并對樣品中存在的病毒復合侵染現象進行了分析。

1 材料與方法

2010年4月從四川攀枝花、德昌和西昌等市蔬菜種植區采集了表現花葉癥狀的南瓜、甜菜和辣椒病毒病樣品共計87份，保存于- 80 ℃冰箱。

參考青玲等（2005）的方法，采用抗原直接包被ELISA法對樣品進行病毒檢測。煙草花葉病毒（Tobacco mosaic virus，TMV）、黃瓜花葉病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）、蕪菁花葉病毒（Turnip mosaic virus，TuMV）及蠶豆萎蔫病毒2號（Broad bean wilt virus 2，BBWV-2）相應的抗原及單克隆抗體由浙江大學生物技術研究所周雪平教授惠贈，馬鈴薯Y病毒（Potato virus Y，PVY）和馬鈴薯X病毒（Potato virus X，PVX）的抗原及多克隆抗體由西南大學植物保護學院植物病毒實驗室保存，堿性磷酸酶標記的羊抗鼠IgG及羊抗兔IgG購自美國Promega公司。

2 結果與分析

對采集的樣品進行ELISA檢測，結果表明，在87份樣品中共有72份樣品可與6種供試血清中的1種或多種血清發生不同程度的陽性反應（表1）。其中，PVY在攀枝花、西昌和德昌等3個地區樣品中的檢出率均最高，總檢出率達74.71 %；其次為TuMV，總檢出率為22.99 %；BBWV-2的總檢出率最低，為10.34 %；CMV、TMV和PVX的總檢出率分別為12.64 %、13.79%和14.94 %；表明PVY在該地區南瓜、辣椒及甜菜上的侵染最普遍（表1）。

在72份ELISA檢測呈陽性的樣品中，僅發現TuMV、PVX及PVY等3份病毒的單獨侵染。另有25份樣品檢測到2種以上病毒的復合侵染，陽性檢出率為34.72 %。值得一提的是同時檢測到6種病毒復合侵染的樣品在72份陽性樣品中所占比例為8.33 %。特別是攀枝花地區，檢測到6種病毒復合侵染的樣品在攀枝花地區的陽性樣品總數中所占比例達到20.00 %；且南瓜樣品中的病毒復合侵染情況較為嚴重，有28.57 %的南瓜陽性樣品受6種病毒復合侵染；與之相反，在該地區甜菜樣品上卻沒有檢測到任何病毒復合侵染的類型。此外，在德昌地區辣椒樣品上僅發現一種病毒復合侵染類型，即BBWV-2和PVY的復合侵染，其在陽性樣品中的總檢出率為2.78 %（表2）。

6種病毒在不同地區的分布有明顯差異。PVY在西昌地區的檢出率最高，為96.55 %；在攀枝花地區的檢出率最低，為40.63 %。與之相反，其余5種病毒在攀枝花地區的檢出率均明顯高于西昌和德昌地區。6種病毒對不同寄主的侵染率也有所不同。其中，在甜菜和辣椒上，PVY的檢出率分別為93.87 %和92.31 %，屬優勢病毒種類。但在南瓜上6種病毒的檢出率較接近，且 TuMV的檢出率略高于PVY，表明在南瓜上 PVY并不是優勢毒原。另外，辣椒上檢測到的病毒種類最少，僅檢出BBWV-2和PVY（表1）。在采樣過程中發現，西昌與德昌甜菜地周邊雜草叢生，且大多與茄科蔬菜間作。蚜蟲是病毒的重要傳播媒介，雜草和茄科蔬菜又是大多蔬菜病毒的常見寄主，因此，西昌與德昌甜菜上的病毒很可能來源于這些寄主和媒介昆蟲。攀枝花甜菜采集地田間管理較規范，因而其上病毒種類較少可能與此有關。

在本試驗中，有15份樣品未檢測到上述6種病毒，分別為攀枝花地區南瓜樣品11份，攀枝花地區甜菜樣品1份，西昌地區甜菜樣品1份，德昌地區辣椒和甜菜樣品各1份，這些樣品病毒病癥狀均明顯。由于所用抗血清種類有限，因而這些樣品中可能仍含有其他病毒種類未被檢測出。此外，本試驗所用PVY的血清是多抗，故PVY的高檢出率也可能與檢測結果存在假陽性有關。由于采樣較分散，品種沒有代表性，因而本試驗未能反映品種與抗病性之間的關系。

表1 攀西地區蔬菜病毒病毒原的ELISA檢測

表2 病毒復合侵染的類型和比例

3 結論與討論

本試驗對攀西地區采集的87份南瓜、辣椒和甜菜病毒病樣品進行了針對PVY、PVX、CMV、TMV、BBWV-2及TuMV等蔬菜上常見的6種植物病毒的ELISA檢測，結果表明，共有72份樣品檢測呈陽性。其中PVY的侵染最普遍，總檢出率高達74.71 %，是該地區辣椒和甜菜上的優勢毒原。但在南瓜上TuMV的檢出率略高于PVY，不同于以往報道（李鳳梅，2002；楊國慧，2003；青玲 等，2010；文朝慧 等，2010）。由于田間病毒類型常處于動態變化中，這也可能是病毒病優勢毒原變化趨勢的客觀反映。已有研究表明，辣椒、甜菜和南瓜上的病毒種類很多（席德慧 等，1999；李鳳梅，2002；楊國慧，2003；柴偉國 等，2006；青玲 等，2010），由于本試驗受到采集樣品數量及地域的限制，且僅對 6種植物病毒進行了檢測，因而無法涵蓋引起該地區甜菜、南瓜和辣椒病毒病的所有毒原。此外，有15份樣品檢測呈陰性，但病毒病的癥狀明顯，不能排除感染其他病毒種類的可能性，還需進一步的鑒定。

在72份陽性樣品中，僅發現TuMV、PVX及PVY等3種病毒的單獨侵染，且主要是PVY的單獨侵染。另有25份樣品檢測到2種以上病毒的復合侵染，且復合侵染的病毒類型復雜。其中，南瓜上病毒的復合侵染很嚴重，這與已有報道的結果一致（青玲 等，2010）。另外，辣椒上檢出的病毒種類較少，這與筆者對重慶辣椒病毒病的檢測結果相一致（待發表），是否與寄主RNA沉默機制相關有待進一步研究。

柴偉國，朱麗萍，陳集雙. 2006. 杭州地區辣椒病毒病病原分子鑒定．上海蔬菜，（5）：78-80.

李鳳梅．2002．黑龍江省南瓜病毒病毒原鑒定和品種資源抗性篩選的研究〔博士論文〕．哈爾濱：東北農業大學．

青玲，劉映紅，馬麗娜．2005．武隆煙區煙草病毒病的病原初步鑒定．西南農業大學學報，27（3）：319-322．

青玲，包凌云，周常勇，楊水英，孫現超．2010．重慶南瓜病毒病病原ELISA檢測、CMV亞組鑒定及CMV CP基因序列變異性分析．園藝學報，37（3）：405-412．

文朝慧，劉志杰，張麗萍，劉箐，王軍平，劉雅莉，宋蕤，施穎波，侯健雄．2010．甘肅省河西地區辣（甜）椒病毒病毒原鑒定．中國蔬菜，（16）：74-78．

席德慧，向本春，陳衛東，黃家風，劉升學，謝浩．1999．新疆甜菜病毒病毒原類型的初步鑒定．新疆農業科學，（3）：97-99．

楊國慧．2003．滇黑兩省南瓜病毒病病原鑒定及其外殼蛋白基因克隆〔博士論文〕．哈爾濱：東北農業大學．