HPLC法測定人血漿中伊曲康唑的含量及其藥代動力學研究

房紹鵬

吉林省食品藥品審評中心，吉林長春 130062

伊曲康唑系三唑類抗真菌藥，具有抗菌活性強、抗菌譜廣、不良反應少等特點，尤其是對深部真菌感染療效較好[1]。食物特別是油脂類食物會促進伊曲康唑的腸道吸收[2]，所以選擇餐后給藥。通過研究探討伊曲康唑的藥代動力學特征，報道如下。

1 資料與方法

1.1 儀器與試劑

高效液相色譜儀（日本島津，LC-2010A），包括自動進樣器、四元低壓梯度泵、紫外檢測器和N2000工作站。伊曲康唑對照品（香港偉民制藥廠有限公司）；洛伐他定（中國藥品生物制品檢定所）。進口膠囊（意大利Janssen-Cilag股份有限公司）；國產膠囊（偉民制藥廠有限公司）。乙腈為色譜純，剩下試劑為分析純。

1.2 受試對象

20名健康男性受試者，平均年齡為（24.1±1.5）歲，體重（61.5±4.0） kg，身高（170.3±4.2） cm，血壓、心臟、肝腎功能、血尿常規各指標檢查均正常，試驗期間禁服其它藥物和咖啡、煙、酒、茶等，試驗前14 d未用任何藥物。所有受試者均簽署知情同意書，試驗方案經筆者所在醫院倫理委員會審批同意。

1.3 試驗方法

受試者隨機雙周期交叉單劑量口服受試制劑或參比制劑100 mg，清洗期為12 d。受試者提前1晚禁食，第2天早晨7：00統一進食標準早餐，進餐時間為40 min，后用200 mL溫開水送服試驗藥物，服藥2 h后方可飲水，服藥后4 h和10 h統一進食標準中、晚餐。分別于服藥前和服藥后0.5、1、2、3、4、5、6、8、10、12、24、48 和 72 h 依次抽取靜脈血 5 mL， 置于肝素化抗凝試管中，分離血漿后于-40 ℃冷凍貯存，備用。

1.3.1 色譜條件 迪馬C18柱（ 4.6 mm×250 mm，5μm），流動相為水∶乙腈（35∶65，V/V），柱溫40℃，流速1.0 mL/min，檢測波長263 nm，進樣量20 μL。

1.3.2 貯備液的配置 對照品貯備液（精密稱取伊曲康唑對照品約5 mg，置50 mL量瓶中，用萬能溶劑（DMF）溶解并稀釋至刻度，得伊曲康唑對照品貯備液）。4 ℃冰箱避光貯存，測定時用甲醇稀釋至所需濃度。內標貯備液（精密稱取洛伐他定適量，用甲醇溶解并稀釋至20 μg/mL）。

1.3.3 血漿樣品的處理方法 取血漿0.2 mL，置10 mL離心管內，加內標貯備液20μL，渦旋混勻5 min后，加入乙醚5 mL，渦旋振蕩 5 min，離心（4 200×g）10 min，取上清液于 40 ℃下氮氣吹干，剩余物用流動相100 μL復溶，待測。

2 結果

2.1 專屬性考察

將受試者空白血漿的色譜圖和血漿中加入樣品伊曲康唑和內標洛伐他定得到的色譜圖進行對照比較，證明血漿中的內源性物質不干擾其測定。其中伊曲康唑和內標洛伐他定的保留時間分別為10.5min、8.6 min。

2.2 標準曲線的制定

取空白血漿，精密加入伊曲康唑對照品貯備液適量，制得伊曲康唑濃度分別為 5、10、25、50、100、200 和 500 μg/L 的系列濃度標準溶液。按“1.3.3”項下方法處理后進樣測定，記錄其色譜圖。以待測物伊曲康唑的濃度為橫坐標，以待測物伊曲康唑與內標物洛伐他定的峰面積比值為縱坐標，用加權最小二乘法進行線性回歸，得回歸方程：R=2.096×10-2C–0.009 8，r=0.994 5。表明伊曲康唑在5～500 μg/L濃度范圍內線性關系良好。最低定量限為5μg/L，配制該濃度的血漿樣本6份，進樣分析，得偏差均小于15%，RSD為8.9%。

2.3 方法的精密度和準確度的確證

制備伊曲康唑低、中、高（10、50、400μg/L）3個濃度的質控樣品各6份，持續測定4d，計算求得本法的精密度與準確度。伊曲康唑3個濃度水平的批內和批間的精密度和準確度的RSD均＜15%，方法回收率為97.0%～99.1%。

2.4 穩定性測定

本試驗分別考察了血漿樣品經提取后在室溫放置24、48 h和反復凍融3次后的穩定性，結果顯示伊曲康唑的血漿樣品在本研究的試驗條件下是穩定的，方法回收率為96.2%～98.8%。

2.5 參比制劑與受試制劑主要藥動學參數

Ke（/h）分別為（0.011±0.008）和（0.012±0.004）：t1/2（h）分 別 為（22.1±5.2）和（21.3±2.6）：tmax（h）為（4.7±1.3）和（4.2±0.9）：Cmax（μg/L）為（2 112.4±821.0）和（135.6±47.2）：AUC 0-324 [μg / （L·h） ]為（2 112 .4±821.0）和（2 089.8 ±798.1）：AUC 0-∞ [μg /（ L·h） ]為（2 430.4±899.0）和（2 360.5±821.9）：CL/F（L/h）為（89±21）和（82±15）。

3 討論

本研究發現，經雙單側t檢驗及90%置信區間法評價，受試制劑的相對生物利用度為（99.7±9.2）%，由此確定兩種制劑生物等效。本研究采用的高效液相內標法測定伊曲康唑血漿濃度[3]，經方法驗證，定量為5.0 μg/L，結果較為理想，乙醚干擾少，與主藥內標分離良好，所以選用乙醚作為提取溶劑處理血漿樣品[4]。20 名健康受試者進食高脂食物后單劑量口服伊曲康唑膠囊100 mg，血藥濃度達峰時間約為4.2 h，在體內的消除半衰期約為21.3 h。伊曲康唑脂溶性較強但水溶性弱，尤其是高脂類食物可能會增加其腸道內的消化能力，從而使其有效吸收[5-6]。本試驗考察了高脂飲食后兩種制劑的藥動學特征、藥動參數及生物等效性，為臨床合理用藥提供了依據。

[1]宋一.HPLC 法測定伊曲康唑片的含量及有關物質的檢查[J].中國藥事，2006，20（3）：165-166.

[2]魏敏吉，張永龍，陳尤澤，等.國產伊曲康唑膠囊相對生物利用度研究[J].中國臨床藥理學雜志，2000，11（6）：415-418.

[3]孫黎.伊曲康唑制劑的臨床應用[J].醫學導報，2002，21（2）：99-101.

[4]苗彩云，陳江飛.抗真菌藥伊曲康唑的藥代動力學研究概況[J].中國臨床藥理學與治療學，2009，14（9）：1074-1080.

[5]陳鈞，江文明，高小玲，等.3種伊曲康唑膠囊的人體相對生物利用度[J].中國臨床藥學雜志， 2004，13（1）：19-21.

[6]張曉紅，林琳.伊曲康唑分散片人體生物等效性研究[J].中國現代應用，2010，4（2）：12-13.