龍巖市規模化豬場豬腸道菌耐藥性調查及分析

李曉華，楊小燕，戴愛玲

（福建龍巖學院生命科學學院 預防獸醫學與生物技術福建省高等學校重點實驗室福建省人畜寄生與病毒性疫病防控工程技術研究中心，福建龍巖 364000）

腹瀉性疾病、呼吸道疾病、繁殖障礙性疾病以及高熱病并稱為當今養豬業四大疾病[1]。2006年以來，龍巖市規模化豬場仔豬持續性和頑固性腹瀉呈逐年上升趨勢。懷疑與腸道細菌混合感染以及耐藥性的產生有較大的關系。為此，我們對2006—2010年龍巖市規模化豬場的仔豬細菌性腹瀉進行了腸道菌的檢測及耐藥性分析，希望能夠對其他豬場的疾病預防和藥物治療提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 牛肉膏蛋白胨固體培養基、麥康凱培養基、微生物生化試劑購自杭州天和微生物科技有限公司。

1.2 菌株分離、鑒定

用滅菌棉拭子取腹瀉仔豬病例直腸內糞便或腸內容物，按文獻方法[2]，接種于麥康凱培養基，37℃培養18~24h后，對可疑菌株作進一步生化鑒定。

1.3 藥敏試驗

藥敏試驗采用標準Kirby-Bauer紙片法，根據美國臨床試驗室標準委員會（CLSI/NCCLS）2009版執行標準判定結果。

2 結果與分析

2.1 腸道菌流行情況

在送檢的腹瀉仔豬糞便或腸內容物中分離到多種細菌，細菌分離率為89.5%（221/247），大部分仔豬糞便或腸內容物中都可分離到不止一種細菌，其中以大腸桿菌分離率最高為76.2%，其次為沙門氏菌為35.2%，除了這兩種主要細菌外，少部分的腸內容物還分離到副嗜血桿菌為1.2%。

2.2 腸道菌藥敏情況

2.2.1 常用藥物的耐藥情況

對以上所選豬場糞便及腸內容物分離培養的大腸桿菌和沙門氏菌進行了耐藥性檢測，所選的藥物主要是臨床上常用的一些藥物，主要有氟苯尼考、乙酰甲喹、磺胺對甲氧嘧啶、利福霉素、林可霉素、恩諾沙星、氧氟沙星、慶大霉素、泰樂菌素、壯觀霉素、頭孢噻呋鈉、泰妙菌素、甲砜霉素、硫酸多黏菌素、阿莫西林、環丙沙星、復方治菌磺、鏈霉素、諾氟沙星、土霉素和青霉素等21種藥物。細菌產生耐藥性嚴重的藥物依次為青霉素、土霉素、利福霉素、磺胺對甲氧嘧啶、阿莫西林、甲砜霉素，耐藥率均高于80%。細菌耐藥率在50%~80%的藥物依次為壯觀霉素、諾氟沙星、林可霉素、泰樂菌素、環丙沙星、慶大霉素、氟苯尼考、乙酰甲喹；最敏感的藥物主要是硫酸多黏菌素、鏈霉素、頭孢噻呋鈉，其敏感率＞30%（見表1）。

表1 腸道菌藥敏試驗情況

2.2.2 多重耐藥情況

247例腸道菌對21種抗生素監測結果見表2，所有受檢菌株均表現出不同程度的耐藥性，247例中對全部抗生素耐藥的有3例（1.21%），其它都對1種或多種抗生素有耐藥性，多數為7耐以上的菌株，共有172株（69.64%）；其中12耐最高，共 34株（13.77%）（見表2）。

表2 腸道菌耐藥性統計

2.2.3 不同年份耐藥情況

根據2006—2010年統計數據來看，大部分藥物的耐藥率都有不同程度地上升。變化較大的是氟苯尼考的耐藥率45.16%→65.63%，泰妙菌素的耐藥率42.86%→54.55%，硫酸多黏菌素的耐藥率 0→18.97%，阿莫西林的耐藥率69.80%→82.86%，其中也有藥物的耐藥率出現了下降趨勢，林可霉素的耐藥率76.47%→55.10%，慶大霉素的耐藥率100%→64.81%，泰樂菌素的耐藥率90.48%→43.75%，頭孢噻呋鈉的耐藥率100%→88.57%，環丙沙星的耐藥率70.37%→57.14%，復方治菌磺的耐藥率65.52%→29.27%，鏈霉素的耐藥率64，29%→33.30%，土霉素的耐藥率88.00%→74.56%，青霉素的耐藥率100%→66.70%（見表 3）。

3 小結與討論

3.1 仔豬腹瀉長期困擾著養豬業的發展。通過對送檢豬場的問診調查（病豬日齡、臨床癥狀、發病率、死亡率等指標），結果發現仔豬大腸桿菌性腹瀉相當普遍，有的豬場幾乎每頭豬在仔豬階段均出現過腹瀉癥狀等，死亡率較高，經治療未死亡的豬也常導致病畜生長發育遲緩、生產能力低下，給畜牧業造成的損失相當嚴重，應該引起重視[3-4]。

3.2 在送檢的腹瀉仔豬糞便或腸內容物中分離到多種細菌，細菌分離率為89.5%（221/247），分離率很高。這說明腸道細菌在各規模化豬場發生頻率仍較高，大部分豬場糞便或腸內容物中都可分離到不止一種細菌，其中最主要的是大腸桿菌和沙門氏菌，這是臨床上發生仔豬黃白痢、副傷寒疾病的病原菌，除了這兩種主要細菌外，腸內容物中少部分還分離到副嗜血桿菌（1.2%）。這一結果與劉秀麗等報道一致[1]。副嗜血桿菌是條件致病菌，近年來，隨著免疫抑制性疾病如豬瘟、藍耳病、偽狂犬等發病嚴重，豬機體免疫力的下降，條件致病菌趁虛而入導致發病愈加嚴重。

3.3 藥敏試驗結果表明，所有分離菌株存在廣泛的耐藥性，以多重耐藥性為主，最多耐藥12種，以12耐、7耐、9耐、10耐、8耐、11耐為主，耐藥率分別為13.77%、13.36%、12.55%、10.12%、10.12%、9.72%，共占69.64%。最為敏感的藥物是硫酸多黏菌素、頭孢噻呋鈉，敏感率在30%以上；而甲砜霉素、阿莫西林、磺胺對甲氧嘧啶、利福霉素、土霉素、青霉素等均不敏感，耐藥率均在80%以上，這些耐藥性較高的抗生素經調查發現臨床使用頻率均較高，這可能與豬場長期應用某種抗菌藥物而誘導耐藥菌株的形成有關，也說明長時間使用單一抗生素是細菌產生耐藥性的重要原因[5]。因此，應重視用藥前的藥物敏感性監測，以篩選出幾種有效抗菌藥物交替用于大腸桿菌病的防治。

3.4 本次試驗結果表明，耐藥率從2006年到2010年呈逐年上升趨勢，其中變化較大的是阿莫西林的耐藥率69.80%→82.86%；氟苯尼考的耐藥率45.16%→65.63%；泰妙菌素的耐藥率42.86%→54.55%；硫酸多黏菌素的耐藥率0→18.97%。應引起重視的是：獸醫臨床使用時間較短的頭孢類藥物在本次檢測中也發現已經存在耐藥的趨勢。表明腸道細菌對其適應性產生速度之快，也提示獸醫臨床抗生素藥物的選擇并非越新的藥物效果越好，而是與該種藥物的使用頻率有關[6-7]。

表3 不同年份腸道菌的耐藥情況

[1]劉秀麗，胡冰，林久鋒.山東省大型豬場腸道菌的流行情況和耐藥性分析[J].畜牧市場，2008（4）：45．

[2]陸承平.獸醫微生物學[M].3版.北京：中國農業出版社，2001：223-230．

[3]謝永平，楊威，陳澤祥.廣西地區豬大腸桿菌血清型調查及耐藥性檢測[J].廣西農業科學，2010，41（4）：380-382.

[4]樊國燕，臧金燦，邊傳周．規模化豬場大腸桿菌的分離鑒定及耐藥性監測[J].河南農業科學，2008（3）：110．

[5]姜中其，陳曉紅，方維煥.規模化豬場仔豬斷奶腹瀉大腸桿菌耐藥性監測［J］.浙江大學學報：農業與生命科學版，2004，30（5）：567-571．

[6]施奉英.規模化豬場大腸桿菌、沙門氏菌耐藥性檢測與分析[D].北京：中國農業大學，2006．

[7]李衛東.規模化豬場仔豬大腸桿菌病的流行新特點和防制對策［J］.中國豬業，2007（6）：34-37．