497株腸桿菌科細菌耐藥性分析

谷 巍,尚 峨,張曉靜,姚興偉*,劉百歌*

(1.吉林公安邊防總隊通化支隊衛生隊,吉林通化 134000;2.北京中醫藥大學第一臨床醫學院;3.吉林大學中日聯誼醫院）

革蘭陰性桿菌尤其是腸桿菌科細菌目前是臨床感染中最重要的病原菌,也是醫院感染中較為常見的病原菌。為了解臨床腸桿菌科菌耐藥性,我們對2009年10月-2010年9月間我院臨床標本中分離出的497株腸桿菌科細菌進行了分析,現報道如下。

1 材料與方法

1.1 菌株來源無菌方法采集標本進行細菌培養獲得2009年10月-2010年9月我院臨床標本中分離出的腸桿菌科細菌497株。

1.2 細菌培養和鑒定按《全國臨床檢驗操作規程》進行,培養分離得到的純種菌在生物梅里埃公司的VITEK-32細菌鑒定儀上進行菌種鑒定。

1.3 藥物敏感性試驗藥敏試驗 按CLSI推薦的紙片擴散法(K-B法）,判斷標準按CLSI2009年版。

1.4 超廣譜β-內酰胺酶檢測(1）雙紙片協同法檢測超廣譜β-內酰胺酶:選用阿莫西林/克拉維酸、頭孢他啶、頭孢曲松、頭孢噻肟、氨曲南藥敏紙片。將初篩可疑菌株按K-B法操作,將阿莫西林/克拉維酸紙片貼于M-H瓊脂平皿中央,周圍分別貼頭孢他啶、頭孢曲松、頭孢噻肟、氨曲南藥敏紙片,每種紙片于中央紙片間距20 mm。經35℃培養18-24小時觀察結果,如發現任意一個紙片和阿莫西林/克拉維酸紙片間出現協同效應,即判斷為產ESBLs菌株。(2）ESBL確證試驗[1]:按CLSI確證試驗,將初篩可疑菌株用頭孢他啶、頭孢他啶/克拉維酸、頭孢噻肟、頭孢噻肟/克拉維酸紙片作紙片法藥敏試驗。經35℃,18-24小時觀察結果,含克拉維酸和不含克拉維酸的抗生素紙片間的抑菌環直徑相差≥5 mm可證實產ESBLs。

1.5 質量控制以金黃色葡萄球菌ATCC25923和大腸埃希菌ATCC25922為質控標準菌株。

1.6 統計學分析用WHONET5.4進行。

2 結果

2.1 臨床分離的常見腸桿菌構成由表1可以看出,2009年10月-2010年9月從我院臨床標本中共分離出497株常見的革蘭陰性腸桿菌,構成比占前三位的分別是大腸埃希菌198株(39.8%）,肺炎克雷伯菌115株(23.1%）,陰溝腸桿菌110株(22.1%）其他腸桿菌科細菌74株(15.0%）。

表1 常見腸桿菌分離情況

2.2 臨床分離腸桿菌在各種標本中的分布我院臨床分離出的腸桿菌科細菌主要來自尿液標本(275株）見表2。

表2 497株腸桿菌在不同標本中的分布情況

2.3 腸桿菌對常用抗菌藥物的耐藥性腸桿菌科細菌對15種常用抗菌藥物的耐藥率見表3。大腸埃希菌和克雷伯菌對抗菌藥物的耐藥率,見表4。

3 討論

在我院2009年-2010年間檢出的腸桿菌科細菌中檢出率排在前三位的分別為大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌和陰溝腸桿菌。大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌中產ESBLs的菌株為100株(20.1%）,ESBLs可以通過接合、轉化和轉導等形式使耐藥基因在細菌間擴散,從而造成嚴重的醫院交叉感染和院外耐藥菌的擴散[2]。同時,隨著三代頭孢菌素的廣泛應用,在藥物的選擇性壓力下也促進了產ESBLs菌株的產生。

表3 腸桿菌科細菌對抗菌藥物的耐藥率

從表4可以看出,產ESBLs大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐藥率明顯高于非產ESBLs株。產ESBLs菌不僅對頭孢菌素和氨曲南耐藥,而且對氨基糖苷類、喹諾酮類和磺胺類交叉耐藥[3]。根據CLSI2009年規定[1],對于產ESBLs大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌,即使體外試驗對青霉素類、頭孢菌素類、單環β-內酰胺類抗菌藥物敏感,也應報告耐藥。在我們的資料中,產ESBLs的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌對這些藥物也有一定的敏感率,這會誤導臨床治療。因此,加強臨床微生物實驗室對產ESBLs菌株的檢測及其藥敏結果的正確報告,對指導臨床用藥具有十分重要的意義。

表4 大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌對抗菌藥物的耐藥率

碳青霉烯類抗菌藥亞胺培南和美羅培南對產ESBLs和非產ESBLs菌株的敏感率為100%,這與碳青霉烯類抗菌藥物特殊的空間構象有關[4],因此目前碳青霉烯類抗菌藥物是治療產ESBLs菌感染的首選藥物。但國內外已有報道指出[5],已經分離出耐碳青霉烯類抗菌藥的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌,這可能由于碳青霉烯類抗菌藥物的廣泛應用,造成其耐藥菌株逐漸產生,因此,應引起足夠的重視。

[1]Clinical and Laboratory Standards Institute.Performance standards for antimicrobial susceptibility testing:Nineteenth informational supplement

[2]徐加勤,朱紅國,曹娟,等.肺炎克雷伯菌AmpC酶和超廣譜β-內酰胺酶的檢測及耐藥分析[J].實用醫學雜志,2008,24(10）:1817.

[3]Jacoby GA,Han P.detection of extended-spectrum beta-lactamases in clinical isolates of Klebsiella pneumoniae and Escherichia coli[J].J Clin Microbiol,1996,34(7）:908.

[4]Jacoby GA,Archer GL.New mechanisms of bacterial resistance to antimicrobial agents[J].N Engl J Med,1991,324(9）:601.

[5]蒯守剛,邵海楓,王衛萍,等.肺炎克雷伯菌介導碳青霉烯類耐藥的基因型檢測[J].2008,5.