新疆維吾爾醫藥材黃花柳葉中總黃酮含量的測定

古麗克孜·阿日甫 李暮春 古力娜孜·熱西提

新疆維吾爾自治區分析測試研究院，新疆 烏魯木齊 830011

黃花柳 (Salix caprea L)為楊柳科柳屬植物 Salicaceae salix L。主要分布于我國新疆。長期以來在新疆維吾爾醫學中就作為藥物使用，主要用于治療冠狀動脈粥樣硬化性心臟病，高血壓，抗菌、抗病毒、解熱、消炎、止痛、消腫、風濕性關節炎、黃疸性肝炎等［1]。有關柳屬植物的化學成分研究，國內外已有些報道，但就新疆黃花柳葉藥材而言，其總黃酮含量的研究尚未見報道。為了初步了解新疆維吾爾醫藥材黃花柳葉的藥效與總黃酮含量的關系，本研究參照乙醇回流提取法，對采自新疆和田地區的藥用黃花柳葉中總黃酮的最佳提取條件進行了研究，在最佳提取條件下，對黃花柳葉總黃酮含量進行了測定。其黃花柳葉中總黃酮含量為4.17%，相對標準偏差為1.41%，最佳提取條件適合該藥材的提取。

1 材料與方法

1.1 材料

黃花柳葉采自新疆和田維吾爾醫醫院的栽培基地，由和田維吾爾醫院主任醫師巴克阿力木鑒定，采后自然陰干，粉粹使用。

1.2 儀器設備

HP－8452A型紫外可見見光光度計 (美國惠譜)，電子天平 (北京賽多利天平有限公司)，微型植物試樣粉碎機(河北省黃華市新興電器長)，電熱恒溫水浴鍋 (京泰克儀器有限公司)。

1.3 試劑

蘆丁 (中國藥品物制品檢定所)，乙醇，亞硝酸鈉，硝酸鋁，氫氧化鈉，均為分析純。

2 實驗方法

2.1 蘆丁標準溶液的配置

準確稱取蘆丁標準試劑20.7 mg用50%的乙醇溶解，并完全移入100mL容量瓶中，用50%的乙醇稀釋至刻度，得到濃度為0.207 mg/mL的蘆丁標準溶液。

2.2 最大吸收波長的選擇

取上述蘆丁標準溶液2.5 mL于25ml具塞試管中，用50%的乙醇至10 mL，加入5%NaNO20.6mL，搖勻，放置6min;加入10%Al(NO3)30.6mL，搖勻，放置6min后加入4%的 NaOH 4mL，搖勻，再用50%的乙醇定容至刻度，均勻，放置15min。以相應的溶液為空白，照分光光度法在430～700nm波長范圍內掃描吸收度。由曲線可知，波長在503nm處為最大吸收。

2.3 蘆丁標準曲線的制備

分別取上述蘆丁標準溶液0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3，3.5mL于25mL具塞試管中，用50%的乙醇至10mL，加入5%NaNO20.6mL，搖勻，放置6min;加入10%Al(NO3)30.6mL，搖勻，放置6min后加入4%的NaOH 4mL，搖勻，再用50%的乙醇定容至刻度，均勻，放置15min。以相應的溶液為空白，照分光光度法在503 nm處測定吸光度。以蘆丁濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線良好線性關系 (r=0.9974)。見圖1。

3 結果與分析

3.1 乙醇濃度對提取的影響

精確稱取5份 (4.00g)柳樹葉，分別加入體積分數為50%，60%，70%，80%，90%乙醇各為120mL，在60℃水浴中回流3小時，趁熱過濾，冷卻后，轉移到250mL的容量瓶中稀釋至刻度，取各1mL至25mL具塞試管補充10mL各自的溶劑后分別加入5%NaNO20.6mL，搖勻，放置6min;加入10%Al(NO3)30.6mL搖勻，放置6min后加入4%的NaOH 4mL，搖勻，再用各自的溶劑定容至刻度，均勻，放置15min后在503 nm波長處分別測定吸光度。吸光度 (A) 為 0.1014，0.0080，0.0322，0.0114，0.0035。從實驗中可以看出：50%乙醇的吸光值最大，所以乙醇濃度確定在50%。

3.2 回流時間對提取的影響

精確稱取5份 (4.00g)柳樹葉，加50%120mL的乙醇，在60℃水浴中回流1，1.5，2.0，2.5，3小時，趁熱過濾，冷卻后，按照3.1的方法分別測定吸光度。吸光度(A) 為：0.1101，0.1037，0.0838，0.0804，0.0771。實驗結果表明：當回流時間為1 h時，提取效果最好。而當時間繼續延長時，總黃酮含量反而降低，這可能是回流時間太長，有部分乙醇被揮發而導致沸點逐漸增大，從而破壞某些黃酮類化合物。

3.3 回流溫度對提取的影響

精確稱取5份 (4.00g)柳樹葉，加50%乙醇120ml分別在20℃，30℃，50℃，70℃，80℃水浴中回流1小時趁熱過濾，冷卻及在室溫下放1個小時過濾后，按照3.1的方法進行測定，吸光度 (A)為：0.0477，0.0871，0.1221，0.1757，0.1674。結果可見，70℃的黃酮提取率高。

3.4 料液比對提取的影響

精確稱取4份 (4.00g)柳樹葉，加50%乙醇80 mL，120mL，160mL，200mL，料液比分別為1：20，1：30，1：40，1：50在70℃水浴中回流1小時，趁熱過濾，冷卻后，按照3.1的方法進行測定，吸光度 (A)為：0.1025，0.1345，0.1105，0.0969。結果表明，料液比在1∶30時的值最大值，因此選擇料液比1∶30為考慮對象。

3.5 黃花柳葉中總黃酮的測定結果

精確稱取5份 (4.00g)柳樹葉，加50%乙醇120mL料液比分別為1：30在70℃水浴中回流1小時，趁熱過濾，冷卻后，按照3.1的方法進行測定，結果見表1。

表1 黃花柳葉中總黃酮的測定結果 (n=5)

4 結論

試驗結果表明：影響黃酮類物質提取量的因素主次順序為：提取溫度＞乙醇濃度＞回流時間＞料液比。確定了黃花柳葉中總黃酮的最佳條件為：乙醇濃度為50%，回流時間為1小時，料液比1：30，回流溫度為70℃。在最佳條件下的總黃酮得率4.17%。結果表明：新疆黃花柳葉中總黃酮的含量較高，達到4.17%，這說明黃花柳葉之所以有抗心臟病，高血壓，抗菌消炎、解熱、止痛、消腫、風濕性關節炎、黃疸性肝炎等作用與其中所含的黃酮類化合物具有密切關系。下一步將進一步考察黃花柳葉藥材的藥理活性，為開發新疆黃花柳葉的藥用價值提供科學依據。

［1]古麗克孜·阿日甫，李慕春，楊飛．新疆維吾爾醫藥藥材黃花柳葉中鞣質含量的測定［J]．中國民族民間醫藥，2009，10(18)：39－40．

［2]孫慧麗，艾來提·蘇里坦，買吾蘭·買提努爾等．黃花柳花中總黃酮含量的研究［J]．新疆農業科學，2008，45(1)：84－87．

［3]古麗克孜·阿日甫，阿依古麗·塔西．新疆維吾爾藥材黃花柳中無機元素的測定［J]．藥物分析雜志，2008，28(11)：1880－1882．