用高效液相法測(cè)定腎特康膠囊中鹽酸小檗堿的含量

袁常青邢亮 李長(zhǎng)富 朱玲玲白斌

(1京東中美醫(yī)院，河北 三河 101601；2中美華醫(yī)（河北）制藥有限公司，065201)

腎特康膠囊是我院自制復(fù)方中藥制劑，由黃芪、黃連、地黃、人參、水蛭等十味藥組成，具有溫腎健脾，活血化瘀功能，用于慢性腎炎、腎功能不全、腎功能衰竭證屬脾腎陽虛、瘀血內(nèi)阻證者。黃連是方中臣藥之一，其主要成分鹽酸小檗堿是其藥理活性物質(zhì)，用高效液相法對(duì)該成分進(jìn)行測(cè)定，該方法準(zhǔn)確方便，干擾少。

1 儀器與材料

1.1 儀器 SSI二元高壓液相色譜儀，Thermo可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器和EZ Chrom Elite色譜工作站（美國(guó)科學(xué)技術(shù)公司），Thermo Hypersil C18色譜柱(4.6 mm × 25 mm，5 μm)；UV-1801紫外可見分光光度計(jì)（北京化分瑞利有限責(zé)任公司）；KQ-50B型超聲波提取器（昆山市超聲儀器有限公司）；AB265-S十萬分之一電子分析天平（梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司）。

1.2 試劑與試樣 鹽酸小檗堿對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110713-200208，供含量測(cè)定用）；乙腈為色譜純；純化水；磷酸、三乙胺、磷酸二氫鉀均為分析純；腎特康膠囊 （京東中美醫(yī)院制劑室，090503，090603，090805，090907，091101）。

2 方法與結(jié)果[1]

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

對(duì)鹽酸小檗堿甲醇溶液在200～400 nm進(jìn)行光譜掃描，有兩個(gè)最大吸收峰分別為265 nm和254 nm，同時(shí)參考黃柏藥材色譜條件[2]選擇265 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈－0.33 mol/L磷酸二氫鉀溶液（0.5%三乙胺，磷酸調(diào)pH值至3.0）30∶70為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為265 nm。理論板數(shù)以鹽酸小檗堿峰計(jì)算應(yīng)不低于4 000。

在上述色譜條件下，鹽酸小檗堿保留時(shí)間約9.1 min，且陰性對(duì)照在相應(yīng)的位置無干擾。見圖1～圖3。

圖1 鹽酸小檗堿對(duì)照品

圖2 腎特康膠囊鹽酸小檗堿陰性

圖3 腎特康膠囊供試品

2.3 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取在100℃干燥5 h的鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.1 mg的溶液，即得。

2.4 供試品溶液的制備

取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，研細(xì)，取0.2 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入流動(dòng)相25 mL，稱定重量，加熱回流30 min，取出，放冷，再稱定重量，用流動(dòng)相補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.5 線性關(guān)系考察

精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品1.168 0 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密吸取對(duì)照品溶液2、5、8、10、12、15 μL，注入液相色譜儀，按擬定的色譜條件測(cè)定峰面積分別為 317985、768251、1235748、1554219、1856922、2 269 632。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，鹽酸小檗堿進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（見圖4），計(jì)算回歸方程：Y=12 97 759.284 X+20 114，r=0.999 7，鹽酸小檗堿在0.233 6～1.752 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

圖4 鹽酸小檗堿線性關(guān)系

2.6 精密度試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液10 μL，按上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定其峰面積分別為1465806、1495460、1490 340、1 497 411、1 465 970，RSD=1.1%（n=5），表明儀器精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批（批號(hào)090503）樣品，按供試品溶液制備方法平行制備供試品溶液5份，測(cè)定鹽酸小檗堿含量，結(jié)果分別為 2.22、2.12、2.10、2.22、2.18mg/粒，平均含量 2.168mg/粒，RSD=2.58%（n=5），結(jié)果表明方法重復(fù)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一份供試品溶液，按上述色譜條件，分別在不同時(shí)間（0、2、4、6、12 h）進(jìn)樣 10 μL,測(cè)定鹽酸小檗堿的峰面積，結(jié)果分別為 788 282、790 444、788 647、777 784、786 548，平均峰面積為 786 341，RSD=0.6%，（n=5），結(jié)果表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的同一批號(hào)（批號(hào)：090503，平均裝量0.447 mg/粒，平均含量2.168 mg/粒）的樣品約0.1 g，分別精密加入鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液（0.497 mg/mL）各1 mL，揮干溶劑，按“供試品溶液制備”項(xiàng)下的方法制成供試品溶液并測(cè)定，計(jì)算回收率，平均回收率為98.47%，RSD=3.0%（n=5），結(jié)果見表 1。

2.9 含量測(cè)定結(jié)果

取樣品 5 批，分別為 090503，090603，090805，090907，091101，按“供試品溶液制備”項(xiàng)下的方法制成供試品溶液并測(cè)定，結(jié)果分別為 2.20、1.98、1.96、1.90、2.16 mg/粒，平均含量為2.04 mg/粒。

表1 加樣回收率試驗(yàn)

3 討論

3.1 經(jīng)對(duì)乙腈-0.1%磷酸溶液（50∶50）（每100 mL加十二烷基磺酸鈉0.1 g），乙腈-0.33 mol/L磷酸二氫鉀溶液（0.5%三乙胺，磷酸調(diào)pH值至3.0）30∶70等流動(dòng)相條件選擇，均能達(dá)到較好分離，但考慮到離子對(duì)試劑和色譜柱的性能影響較大，故選擇乙腈-0.33 mol/L磷酸二氫鉀溶液（0.5%三乙胺，磷酸調(diào)pH值至3.0）30∶70為流動(dòng)相，結(jié)果鹽酸小檗堿與雜質(zhì)峰分離度良好，峰形對(duì)稱，經(jīng)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，均能符合要求，且陰性樣品無干擾。

3.2 供試液制備方法參考《中國(guó)藥典》2005版（一部）黃連藥材的制備方法，經(jīng)對(duì)回流提取與冷浸放置過液提取效果比較，兩者沒有明顯的區(qū)別，為縮短檢驗(yàn)時(shí)間，確定回流提取為供試液制備方法，該方法分析迅速、準(zhǔn)確。

[1]謝秀瓊.中藥新制劑開發(fā)與應(yīng)用［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：298-314.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：214，附錄 114-116.