轉(zhuǎn)錄抑制基因TBX2在甲狀腺癌中的表達及其臨床病理意義

宋曉環(huán) 李 偉 孫冬梅 甘 卉 王建偉 (長春醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，吉林 長春 3003)

甲狀腺是人體重要的內(nèi)分泌腺，在調(diào)節(jié)機體新陳代謝方面具有非常重要的作用。甲狀腺癌雖只占甲狀腺腫瘤的5%，但卻居內(nèi)分泌及頭頸部惡性腫瘤的第一位，是近年來發(fā)病率增長最快的惡性腫瘤之一，已嚴重危害人類身體健康。因此對甲狀腺癌進行有效的預(yù)防和治療已成為當(dāng)務(wù)之急，尤其是早期能否做出正確的診斷和鑒別診斷將直接影響隨后的臨床治療。因此迫切需要尋找甲狀腺癌特異性分子標(biāo)志物以便作為能夠早期正確診斷、指導(dǎo)臨床治療，或判斷甲狀腺癌預(yù)后的可靠指標(biāo)。TBX2(T-box gene2)是T-BOX基因家族成員之一，屬于發(fā)育調(diào)控相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子基因。研究發(fā)現(xiàn)TBX2在多種腫瘤組織中表達上調(diào)，可視為新的腫瘤分子標(biāo)志物。但TBX2在甲狀腺癌組織中的表達情況，尚未見相關(guān)研究報道。本研究采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測甲狀腺癌組織中TBX2的表達，并探討其表達的臨床意義，為臨床甲狀腺癌的診斷及治療提供指導(dǎo)與靶點。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 選取吉林大學(xué)第一臨床醫(yī)院2007～2009年甲狀腺腫瘤手術(shù)切除標(biāo)本80例，另選正常甲狀腺組織標(biāo)本9例。所有標(biāo)本整理標(biāo)記好后進行石蠟包埋固定組織切片制作，用于免疫組織化學(xué)染色。甲狀腺腫瘤石蠟包埋組織切片經(jīng)HE染色后，由兩位臨床病理專家進行雙盲閱片區(qū)分組織類型，結(jié)果為甲狀腺腺瘤13例，甲狀腺乳頭狀癌(PTC)28例，甲狀腺濾泡癌(FTC)23例，甲狀腺髓樣癌(MTC)14例，甲狀腺未分化癌(UTC)2例。

1.2 免疫組織化學(xué)染色 實驗用組織經(jīng)常規(guī)甲醛固定、石蠟包埋后，切成4 μm厚切片。兔抗TBX2多克隆抗體購于北京博奧森生物技術(shù)有限公司，SP免疫組化試劑盒購于北京中山生物技術(shù)有限公司。采用SP染色方法，具體步驟嚴格按試劑盒上的說明進行。DAB發(fā)色。以PBS緩沖液代替一抗做陰性對照，用已知的TBX2陽性的乳腺癌病理切片作陽性對照。

1.3 結(jié)果判定 TBX2陽性表達定位于細胞質(zhì)及細胞核。以細胞質(zhì)和/或細胞核呈棕黃色為陽性表達。400倍視野下選取3～5個陽性視野計數(shù)，綜合染色強度和陽性率進行評分:染色強度按下列標(biāo)準(zhǔn)評分:陰性0分，染色弱但明顯強于陰性對照者為1分，染色清晰者為2分;染色強者為3分;陽性率按下列標(biāo)準(zhǔn)評分:無陽性細胞或陽性率＜10%計0分，11～30%計1分，31～60%計2分;＞60%計3分。上述兩種評分相加＜3分為陰性(－)，≥3分為陽性〔1〕:其中3～4分為弱陽性(+～)，5～6分為強陽性()。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進行χ2檢驗。

2 結(jié)果

2.1 TBX2在正常甲狀腺、甲狀腺腺瘤及甲狀腺癌組織中的表達 TBX2蛋白在正常甲狀腺組織中陽性表達定位于細胞質(zhì)及細胞核，而在甲狀腺腫瘤中陽性表達定位于細胞質(zhì)。見表1、圖1。

2.2 TBX2在不同分化程度及不同類型甲狀腺癌組織中的表達 TBX2在不同分化程度及不同組織學(xué)分型甲狀腺癌組織中的表達有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。見表2。

表1 TBX2在各種甲狀腺組織中的表達

表2 TBX2在不同分化程度及類型甲狀腺癌組織中的表達

圖1 TBX2在各種甲狀腺組織中的表達(SP，×400)

3 討論

TBX2基因是T-BOX基因家族成員之一，通過其特有的TBOX區(qū)域參與多種生物的發(fā)育調(diào)控，屬于發(fā)育調(diào)控相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子基因，且是T-BOX基因家族成員中僅有的兩個轉(zhuǎn)錄抑制基因之一〔2，3〕。人 TBX2基因位于 17號染色體長臂 2區(qū) 3帶(17q23)。其編碼蛋白TBX2至少有兩個結(jié)構(gòu)域，一個為與靶基因DNA特異性結(jié)合域(T結(jié)構(gòu)域)，另一為結(jié)合轉(zhuǎn)錄抑制物或激活物結(jié)構(gòu)域(C末端結(jié)構(gòu)域，功能域)，主要通過功能域發(fā)揮轉(zhuǎn)錄抑制作用〔4〕。TBX2在胚胎發(fā)育的各種組織和器官中廣泛表達并起重要的調(diào)控作用。研究發(fā)現(xiàn)，TBX2在多種腫瘤中高表達，并與細胞凋亡、細胞惡性轉(zhuǎn)化以及腫瘤細胞增殖等有關(guān)〔5〕。

本研究發(fā)現(xiàn)TBX2在9例正常甲狀腺組織、13例甲狀腺腺瘤組織及67例甲狀腺癌組織中均有陽性表達，陽性率分別為22.2%、53.8%及88.1%，與陳平等〔6〕在檢測13例正常胰腺組織和49例胰腺癌組織中TBX2表達的陽性率(17.7%、69.4%)相比偏高，與劉長民等〔7〕檢測TBX2在20例癌旁正常組織、60例大腸癌組織中表達的陽性率(45.0%，70.0%)相接近，這可能是由于TBX2在不同組織中的特異性不同所致。TBX2在甲狀腺癌組織中的陽性表達與其在正常甲狀腺及在甲狀腺腺瘤組織中的陽性表達相比較，差異有顯著性(均P＜0.05);與陳平等、劉長民等檢測的TBX2表達結(jié)果性質(zhì)一致，提示TBX2同樣也參與了甲狀腺癌的發(fā)生發(fā)展過程。

TBX2在不同分化程度及不同組織學(xué)類型甲狀腺癌組織中均顯著高表達，陽性率比較，差異無顯著性。TBX2在高中分化及低分化甲狀腺癌組織中的陽性表達強度〔即強陽性()與弱陽性(+～)〕比較，差異有顯著性;因未分化癌標(biāo)本例數(shù)太少而無法進行統(tǒng)計學(xué)比較，比較乳頭狀癌、濾泡癌及髓樣癌組織中TBX2陽性表達強度，差異有顯著性。說明TBX2的陽性表達強度與甲狀腺癌組織的分化程度及組織學(xué)分型有關(guān):隨甲狀腺癌組織分化程度的降低，惡性程度的增加，TBX2陽性表達強度逐漸增強。陳平等〔6〕在胰腺癌組織中檢測TBX2陽性表達結(jié)果也顯示TBX2陽性表達與腫瘤組織的分化程度相關(guān)。

綜上所述，本研究認為，TBX2在甲狀腺癌的發(fā)生、發(fā)展中起著重要的作用，TBX2在甲狀腺癌組織中陽性表達增強可能是甲狀腺癌惡性程度高，增殖迅速的原因之一。檢測甲狀腺癌中TBX2的表達，可為臨床甲狀腺癌的診斷、治療方案的選擇及預(yù)后評估提供參考指標(biāo)，同時也為甲狀腺癌的治療提供新靶點，具有重要的臨床意義。

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5 Vance KW，Carreira S，Brosch G，et al.Tbx2 is overexpressed and plays an important role in maintaining proliferation and suppression of senescence in melanomas〔J〕.Cancer Res，2005;65(6):2260-8.

6 陳 平，田德安，劉 梅，等.Tbx2蛋白在胰腺癌組織和細胞中的表達及其意義〔J〕.臨床內(nèi)科雜志，2007;24(5):341-3.

7 劉長民.大腸癌中TBX-2的表達與P14ARF、E2F因子的相關(guān)性及對預(yù)后的影響〔D〕.蘇州:蘇州大學(xué)，2009.