杜香提取物抑制荷瘤H22小鼠生長的實驗研究

劉海軍 孫晉民 賈蘭玲 (中國醫科大學實驗技術中心一部暨中藥工程實驗室，遼寧 沈陽 000)

細葉杜香(Ledum palustre L.Var.Angustum E.Busch)是杜鵑花科杜香屬(Ericaceae ledum)常綠直立小灌木，主要分布于我國東北(大、小興安嶺，長白山)、朝鮮、日本、西伯利亞、北美、歐洲等地，生于比較濕潤的溝谷和水甸子，種子繁殖。細葉杜鵑的葉、枝、花和果實中含有揮發油。揮發油可以入藥，有鎮咳、祛痰、平喘、擴張血管、降壓、殺菌止癢等作用，對慢性支氣管炎、結腸炎、急性鼻炎、流感、咳嗽、皮膚病有一定療效〔1，2〕。我國對杜香油的利用始于60年代，主要用于醫藥、香料行業。關于其體內外抗腫瘤作用至今未見報道。本研究主要探討杜香提取物熊果酸的抗腫瘤作用。

1 材料與方法

1.1 主要材料與試劑 H22小鼠肝癌細胞株由中國醫科大學腫瘤研究所提供，用昆明種小鼠傳代保種;實驗動物用昆明種小鼠60只，雌雄各半，體質量18～22 g，由中國醫科大學實驗動物中心提供;杜香采集地為黑龍江省加格達奇克河地區，由齊齊哈爾大學生命科學與工程學院劉慶華教授饋贈。

1.2 杜香提取物熊果酸的制備 采用水蒸氣蒸餾法，置杜香于圓底燒瓶內于67℃回流提取，合并流液，過濾冷藏備用。

1.3 H22荷瘤小鼠模型建立 取H22細胞，加入含10%胎牛血清的RPMI1640培養液，調整細胞密度為5 ～6×106/ml，取0.2 ml細胞懸液接種于昆明種小鼠背部皮下，建立實體瘤小鼠模型。

1.4 動物實驗 建立實體瘤小鼠模型后，將小鼠平均分成4組，每組15只，實驗組(熊果酸組)腹腔分別注射0.25、0.5、1.0 mg/kg熊果酸;正常對照組給予生理鹽水，按0.1 ml/g等容注入。連續給藥5 d后停藥，觀察20 d，取皮下接種的實體瘤組織稱重，計算腫瘤抑制率，實體瘤腫瘤抑制率(%)=(對照組小鼠瘤質量-實驗組小鼠瘤質量)/對照組小鼠瘤質量×100%。

2 結果

腹腔注射杜香提取物對小鼠荷瘤H22腹水瘤的生長具有明顯抑制作用，呈一定劑量依賴關系，且對荷瘤動物的體重增長沒有影響，提示杜香提取物無毒性。見表1。

表1 杜香提取物對小鼠荷瘤H22腹水瘤的生長抑制作用(± s，n=15)

表1 杜香提取物對小鼠荷瘤H22腹水瘤的生長抑制作用(± s，n=15)

與對照組比較:1)P＜0.05

組別 劑量(g/kg)動物體重用藥前 用藥后瘤重(g)抑瘤率(%)對照組 － 19.1 30.5 3.456±0.929 －實驗組 0.25 18.6 28.6 2.456±0.7431) 25.93 0.50 18.9 29.9 1.862±0.8061) 44.39 1.00 20.0 28.9 1.862±0.8061)65.56

3 討論

談華等〔3〕報道杜香揮發油對青霉菌和金黃色葡萄球菌有抑制和殺滅作用，不同菌類、菌體對杜香揮發油的敏感程度不同，酵母菌最敏感，青霉菌和金黃色葡萄球菌次之。Tomohiko〔4〕等研究發現杜香中熊果酸提取物對人舌鱗癌細胞株有抑制作用;Murakami〔5〕等認為杜香成分中含有一種抗氧化活性成分。關爽等〔6〕研究表明杜香熊果酸提取物對遺傳損傷有保護作用。Thaloor等〔7〕發現熊果酸能抑制細胞微管的形成和破壞已形成的微管，降低53 kD和72 kD金屬蛋白酶的明膠降解活性，減少72 kD金屬蛋白酶的轉錄和表達，認為熊果酸的抗血管生成作用是通過調節血管生成中蛋白水解酶的活性而實現的。杜香熊果酸提取物能降低細胞微核的發生率，實驗結果表明不同濃度杜香提取物0.25、0.5、1.0 mg/kg對荷瘤H22小鼠腹水瘤的生長有明顯的抑制作用，且與陰性對照組有顯著差異，可見在不同劑量下，杜香提取物有明顯抗腫瘤作用。

有關中藥杜香有效成分的抗腫瘤實驗研究已經有一定成果，但仍然存在不足，如中藥有效成分的分離和純化還需進一步加強，以及中藥有效成分抗腫瘤機制尚需進一步闡明等;這是我們后續探究的重點。

1 林克勤.杜香生物活性物質〔J〕.國土與自然資源研究，1995;17(1):73-6.

2 Huang MT，Ho CT，Wang ZY，et al.Inhibition of skin tumorigenesis by rosemary and its constituents carnosol and ursolic acid〔J〕.Cancer Res，1994;54(3):701.

3 談 華，劉慶華.細葉杜香揮發油抑菌和殺菌作用的研究〔J〕.齊齊哈爾大學學報，2005;21(3):33-6.

4 Tomohiko Kutsuna，Zheng HC，Hekmat Osman Abdel-Aziz，et al.High JC virus load in tongue carcinomas may be a risk factor for tongue tumorigenesis〔J〕.Virchows Archiv，2008;452(4):405-10.

5 Murakami S，Takashima H，Sato-Watanabe M，et al.Ursolic acid，an antagonist for transforming growth factor TGF-1〔J〕.FEBS Lett，2004;566(1):55-9.

6 關 爽，盧 靜，劉 靜.杜香熊果酸提取物對小鼠遺傳損傷的保護作用〔J〕.癌變畸變突變，2009;21(1):68-9.

7 Thaloor D，Singh K，Sidhu GS，et al.Inhibition of angiogenie differentiation of human umbilieal vein endothelial cells by cureumin〔J〕.Cell Growth Differ，1998;9(4):205-12.