高效液相色譜法測定十五味龍膽花丸中原兒茶酸含量

程 民

(安徽省淮北市食品藥品檢驗所，安徽 淮北 235000)

十五味龍膽花丸是由白花龍膽、檀香、廣棗、肉豆蔻、沉香等15味藥組方，具有清熱理肺、止咳化痰的功效，臨床用于支氣管炎和肺氣腫、咳嗽氣喘、聲嘶音啞[1]。原標準中只有丸劑的常規檢驗項目。為全面控制質量，筆者參考相關文獻[2－5]，建立了測定方中主藥廣棗中原兒茶酸含量的高效液相色譜(HPLC)法，報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1100 Serise高效液相色譜儀，VWD紫外可變檢測器，Agilent 1100自動進樣器，Agilent液相色譜工作站;日本島津UV－2401PC型紫外可見分光光度計;Mettler AE－240型電子分析天平(0.01 mg)。原兒茶酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110809－200604);十五味龍膽花丸(青海金訶藏藥藥業股份有限公司，批號分別為20080203，20080209，20080318);甲醇為色譜純，水純化水，冰乙酸為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:Agilent Technologies Eclipse XDB C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇 －0.1% 冰乙酸(10 ∶90);檢測波長:260 nm;柱溫:25 ℃;流速:1.0 mL/min;進樣量:20 μL。

2.2 溶液制備

精密稱取原兒茶酸對照品19.51 mg，置100 mL量瓶中，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度，制成質量濃度為195.1 μg/mL的對照品貯備液。取本品約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加50%甲醇30 mL，稱定質量，浸漬過夜，超聲處理30 min，再稱定質量，用50%甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續濾液，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，即得供試品溶液。另按處方比例和供試品溶液制備方法制成不含廣棗的陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗:取2.2項下3種溶液，在選定條件下，測得原兒茶酸對照品的保留時間約16.1min;供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上有相同的色譜峰，且原兒茶酸與雜質分離度大于1.5;理論板數按原兒茶酸峰計算應不小于3 000;陰性對照無干擾。色譜圖見圖1。

線性關系考察:精密吸取質量濃度為 195.1 μg/mL 的對照品 貯 備 液 1.0，2.0，3.0，5.0，8.0，10.0 mL，分別置 100 mL 量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別吸取20 μL注入液相色譜儀，按上述條件測定，記錄峰面積。以質量濃度(X)為橫坐標、峰面積(Y)為縱坐標繪制標準曲線，回歸方程為 Y=78.131 7 X －1.965 1，r=0.999 9(n=6)。結果表明，原兒茶酸質量濃度在1.95～19.51 μg/mL范圍內與峰面積呈良好線性關系。

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗:取對照品溶液，重復進樣8次，記錄峰面積。結果的 RSD為1.3%(n=8)。表明方法精密度好，符合含量測定要求。

穩定性試驗:取同一供試品(批號為20080203)溶液，分別于0，1，2，4，6，8，10，12 h 時進樣，記錄峰面積。結果的 RSD 為 1.36(n=8)，表明供試品溶液在12 h內穩定。

重復性試驗:取同一批號(批號為20080203)樣品6份，每份約2 g，精密稱定，依法制備供試品溶液并測定含量。結果平均含量為0.095 4 mg/g，RSD=0.13%(n=6)，表明方法重復性好。

加樣回收試驗:取已知含量樣品(批號為20080203)6份，每份約1 g，精密稱定，精密加入原兒茶酸對照品溶液(質量濃度分別為3.00，3.75，4.50 μg/mL)，置具塞錐形瓶中，按供試品溶液制備方法制備溶液并測定含量，計算回收率。結果見表1。

表1 原兒茶酸加樣回收試驗結果(n=6)

2.4 樣品含量測定

取3批樣品，每批約2 g，精密稱定，依法測定。結果批號為20080203，20080209，20080318的樣品中原兒茶酸平均含量分別為0.095 4，0.096 4，0.097 6 mg/g。

3 討論

在供試品溶液制備時，比較了回流1 h與浸泡24 h后再超聲處理30 min，結果浸泡后再超聲，含量較回流法高，且方法簡便、含量測定結果準確、重復性好、回收率高。

本法試驗了不同的流動相，通過比較不同體系流動相的色譜行為，如甲醇 － 水(35∶65)、乙腈 － 水 －0.05%磷酸(15∶85∶1)、乙腈 －0.05 mol/L 磷酸二氫鉀(40∶60)、甲醇 －0.1%冰乙酸(10∶90)，并調整各流動相比例及流速，最后選擇峰形好、分離度符合要求的甲醇－0.1%冰乙酸(10∶90)為流動相。

[1]WS－58(Z－125)－2002，中華人民共和國衛生部藥品標準·藏藥(第一冊 )[S].

[2]趙志軍，劉鐵剛.血尿膠囊薄層鑒別及原兒茶酸含量測定方法的研究[J].中成藥，2006，28(4):604 － 606.

[3]陳 勇，方翠芬，向智敏，等.RP－HPLC測定勒馬回膠囊中原兒茶酸的含量[J].中成藥，2007，29(12):1 867 －1 869.

[4]陳樹和，孫麗娟，劉紅兵，等.不同產地牛至藥材中原兒茶酸的含量分析[J].中國醫院藥學雜志，2008，28(3):179 －181.

[5]鄧 華，賴海容.婦血康顆粒中原兒茶酸含量測定方法改進[J].中國藥業，2008，17(20):36.