超高效液相色譜－三重四極桿串聯質譜法檢測中藥制劑和保健品中非法添加的醋酸氟輕松

許 奇，繆 剛

(江蘇省蘇州市藥品檢驗所，江蘇 蘇州 215002)

醋酸氟輕松屬糖皮質激素，具有抗炎、抗過敏、抗休克、免疫抑制等多種作用，但使用不當會引起胸悶、氣喘、惡心、嘔吐、肌無力等不良反應[1]。一些不法商人利用患者急于見效的心理，在中藥制劑和保健品中非法添加激素，謀取暴利，對使用者的健康造成了威脅。筆者采用超高效液相色譜－三重四極桿串聯質譜法檢測用于皮膚及哮喘類疾病的中藥制劑和保健品中非法添加的醋酸氟輕松，現報道如下。

1 儀器與試藥

Waters Acquity型超高效液相色譜儀，配有二元溶劑管理器、樣品管理器、柱溫箱、PDA二極管陣列檢測器、Acquity TQD型串聯四極桿質譜儀、Masslynx數據處理系統(美國Waters公司);Millipore Simpak型超純水器(美國Millipore公司);AG245型電子天平(瑞士Mettler公司);HS 3120 D型超聲波清洗器(天津恒奧有限公司)。醋酸氟輕松(批號為100010－200507，中國藥品生物制品檢定所);乙腈、甲醇為色譜純。

2 方法與結果

2.1 超高效液相色譜條件

色譜柱:Waters Acquity UPLC BEH C18柱(50 mm ×2.1 mm，1.7 μm);流動相:乙腈 － 水，梯度洗脫程序為 0 ～2.5 min 乙腈由19%增加至 23%，2.5～4.5 min乙腈由 23% 增加至 33%，4.5～6 min乙腈由33%增加至95%，6～7 min乙腈由95%減至19%;流速:0.5 mL/min;柱溫:35 ℃;進樣量:3 μL;檢測波長:230 nm;紫外光譜范圍:210～300 nm。

2.2 質譜條件

離子化方式:ESI+;錐孔電壓:30 V;毛細管電壓:3.5 kV;離子源溫度:120℃;霧化氣溫度:350℃;霧化氣流速:650 L/h;錐孔氣

流速:50 L/h;掃描方式:多反應監測(MRM)。MRM選擇的母離子、子離子、錐孔電壓和碰撞能量見表1。

2.3 溶液制備

精密稱取醋酸氟輕松對照品10.8 mg，置50 mL量瓶中，用甲醇超聲溶解并定容，得對照品標準貯備液。精密吸取該標準貯備液10 mL，置100 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即得對照品溶液。樣品若為片劑或丸劑，則取適量，研細，精密稱取1.0 g，置錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定質量，超聲處理15 min，冷至室溫，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，用0.2 μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液;樣品若為膠囊劑，則精密稱取內容物1.0 g，置錐形瓶中，同片劑或丸劑供試品溶液制備方法制備溶液，另精密稱取膠囊殼1.0 g，加水10 mL，水浴加熱使膠囊殼溶解，再加甲醇10 mL，超聲處理15 min，冷至室溫，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.2 μm的微孔濾膜濾過，合并兩濾液，即得供試品溶液;若樣品為噴劑，則精密吸取0.5 mL，置20 mL量瓶中，加甲醇適量，超聲使溶解，再加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.2 μm的微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。以甲醇為空白溶液。

表1 MRM分析的質譜參數

2.4 檢測方法

2.4.1 醋酸氟輕松的色譜定性檢測

有關糖皮質激素的色譜定性檢測已有文獻報道[2－4]。在色譜優化過程中，筆者發現采用文獻[2]方法，大部分輔料和中藥成分的色譜峰保留時間會在4 min以前，而醋酸氟輕松峰的保留時間為5.49 min，這對醋酸氟輕松的檢出干擾不大。如果有中藥成分干擾，則通過對比對照品峰的保留時間、紫外光譜圖以及色譜峰的一級質譜圖和二級MRM圖，仍可以確定供試品中是否添加有化學成分。

2.4.2 醋酸氟輕松的串聯質譜(MS/MS)定性特征

本法所檢測的醋酸氟輕松易于加氫形成帶正電荷的[M+H]離子峰，因此試驗選用正離子檢測方式，結合文獻報道方法[4－5]，分析醋酸氟輕松可能的裂解方式如圖1。醋酸氟輕松的母離子峰為 m/z 495.2，m/z 495.2的二級全掃描質譜分析表明，產生的主要碎片離子有 m/z 475.4，337.3。

圖1 醋酸氟輕松的裂解方式

2.4.3 樣品提取方法考察

為了減少操作步驟并獲得盡可能高的提取率，筆者對樣品的提取采用超聲提取法，并分別考察了不同提取溶劑如甲醇、無水乙醇、乙腈 － 水(19 ∶81)、水和不同提取時間(10，15，20，25，30 min)的提取效果。結果表明，以甲醇為提取溶劑、超聲提取15 min的提取效率最高，待測定成分提取完全。

2.5 樣品檢測結果

以從市場上隨機購買的15批中成藥和保健品作為樣品，在相同的色譜質譜條件下，通過比較供試品溶液與對照品溶液的色譜峰保留時間、紫外光譜圖、MS特征譜圖和MRM圖，確定供試品中是否添加了醋酸氟輕松。結果發現，1批逸美真菌清噴劑摻有醋酸氟輕松(圖2－5)。

圖2 高效液相色譜圖

2.6 最低檢出限確定

對未檢出添加劑的樣品添加一定質量濃度的對照品溶液，使之在同樣條件下可以檢出。按信噪比為 S/N=3計算，最低檢出限確定為5 ng。

圖3 二極管陣列紫外光譜圖

圖4 一級質譜圖

圖5 二級質譜MRM圖

3 討論

本試驗建立的超高效液相色譜－三重四級桿串聯質譜法，方法選擇性強，靈敏度高，有效地提高了分析速度，可用于檢測純中藥和保健品中非法添加的醋酸氟輕松。

[1]吳西梅，朱炳輝，鐘志雄，等.鎮咳類平喘中藥中違禁添加的6種糖皮質激素的液相色譜質譜檢測[J].分析測試學報，2009，28(1):55－58.

[2]馬 強，王 超，王 星，等.超高效液相色譜法同時測定化妝品中的15種激素[J].色譜，2007，25(4):541－545.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:化學工業出版社，2005:848.

[4]崔曉亮，邵 兵，趙 榕，等.超高效液相色譜－串聯四極桿電噴霧質譜法同時測定牛奶中12種糖皮質激素的殘留[J].色譜，2006，24(5):213－217.

[5]王傳現，劉罡一，倪昕路，等.高效液相色譜－串聯質譜法檢測化妝品中糖皮質激素類違禁藥物[J].分析儀器，2008，39(6):23－27.

[6]夏 瑞，車寶泉，張 吉.液相色譜－質譜法同時鑒別中藥制劑中的15種糖皮質激素[J].色譜，2007，25(11):926－929.