高效液相色譜梯度洗脫法同時測定保心寧片中3種皂苷含量

李海泉

(安徽中醫學院第一附屬醫院，安徽 合肥 230031)

保心寧片由丹參、三七、當歸、枳殼4味中藥組方[1]，具有活血化瘀、行氣止痛的功效，臨床用于心絞痛、心律失常，能改善冠心病癥狀等。但其質量標準中只有部分中藥的理化鑒別，尚缺定量測定內容。為控制保心寧片的質量，筆者參考有關文獻[2－3]，用高效液相色譜梯度洗脫法測定了方中主藥三七有效成分的含量。現報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀，包括四元泵、自動進樣器、檢測器、二極管陣列檢測器。人參皂苷Rg1對照品(批號為110703－200726)、人參皂苷Rb1對照品(批號為110704－200420)和三七皂苷R1對照品(批號為110745－200517)均購自中國藥品生物制品檢定所;保心寧片(通化正和藥業有限公司);乙腈為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱:Agilent Technologies Eclipse XDB C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動相A為乙腈，流動相B為水(按表1規定進行梯度洗脫);流速:1.0 mL/min;檢測波長:203 nm;進樣量:10 μL。理論板數按三七皂苷R1峰計算不低于4 000;三七皂苷R1與相鄰峰的分離度均大于1.5;拖尾因子均符合要求。在此條件下的色譜圖見圖1。

表1 梯度洗脫程序表

2.2 溶液制備

精密稱取保心寧片3.0g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定質量，放置過夜，置80℃水浴上保持微沸2 h，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的量，搖勻，濾過，精密量取續濾液10 mL，置25 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，微孔濾膜(0.45 μm)濾過，即得供試品溶液。精密稱取人參皂苷Rg1對照品 10.55 mg、人參皂苷Rb1對照品11.65 mg和三七皂苷R1對照品 12.73 mg，置 50 mL 量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，制成每1 mL 含人參皂苷 Rg10.211 mg，人參皂苷Rb10.233 mg和三七皂苷R10.254 6 mg的對照品混合貯備溶液。并按處方比例和供試品溶液制備方法制備缺三七的陰性對照品溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 方法學考察

標準曲線繪制:精密吸取對照品混合貯備溶液 3，5，10，15，20，25 μL，依法測定，以峰面積積分值為縱坐標、對照品進樣量(μg)為橫坐標繪制標準曲線，分別得回歸方程人參皂苷 Rg1Y=243.937 6X+12.362 4，r=0.999 9(n=6);人參皂苷 Rb1Y=230.240 9X+7.331 9，r=0.999 9(n=6);三 七 皂 苷 R1 Y=240.659 8 X+12.836 0，r=0.999 9(n=6)。結果表明，人參皂苷 Rg1進樣量在 0.633 ～5.275 μg范圍內、人參皂苷 Rb1在 0.699～5.825 μg范圍內、三七皂苷 R1在0.764～6.365 μg范圍內與峰面積積分值線性關系良好。

精密度試驗:精密吸取供試品溶液，重復進樣6次，測定人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1和三七皂苷R1的峰面積積分值，結果的RSD分別為1.5%，1.9%和1.3%(n=6)，表明方法精密度較好。

重現性試驗:取同一批(批號為090603)樣品，依法平行制備5份供試品溶液并測定，計算供試品中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1和三七皂苷 R1的含量，結果的RSD分別為1.2%，1.9%和1.5%(n=5)，表明方法重現性較好。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，于15 h內每隔3 h進樣1次。結果的 RSD分別為 2.2%，4.4%和 2.4%(n=6)，表明供試品溶液在15 h內穩定。

加樣回收試驗:取已知含量的樣品(批號為090401，三七皂苷R1含量 14.45 mg/g，人參皂苷 Rg1含量 5.74 mg/g，人參皂苷 Rb1含量3.95 mg/g)6份，每份約1.9 g，精密稱定，分別精密加入三七皂苷 R1對照品溶液(1.413 g/L)、人參皂苷 Rg1對照品溶液(1.083 g/L)和人參皂苷 Rb1對照品溶液(1.362 g/L)各 10 mL，按供試品溶液制備方法制備溶液并測定，計算回收率。結果見表2。

表2 加樣回收試驗結果(n=6)

2.4 樣品含量測定

分別精密量取不同批號的保心寧片，按供試品溶液制備方法操作，進樣分析，用標準曲線回歸方程計算3批保心寧片樣品中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1和三七皂苷R1含量。結果見表3。

表3 樣品含量測定結果(mg/片，n=3)

3 討論

本試驗以方中三七的有效成分三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1含量為質控指標。測定結果表明，三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1峰能與雜質峰很好分離，且陰性樣品無干擾，效果滿意。參照2005年版《中華人民共和國藥典(一部)》三七藥材含量測定的檢驗方法，采用十八烷基鍵合硅烷膠為填充劑的分析柱，比較不同的流動相。結果以乙腈－水為流動相進行梯度洗脫時樣品中的三七成分能有效分離，避免了其他成分的干擾。可見，本試驗所用方法簡單易行、結果準確、重現性好，對控制本品質量具有一定的意義。

[1]WS3－B－0345－90，中華人民共和國衛生部藥品標準·中藥成方制劑(第 2 冊)[S].

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業出版社，2005:10.

[3]劉玉珍，劉慶榮，錢車余.保心寧片質量標準的研究[J].中成藥，1994，16(1):20 － 21.