高效液相色譜法測定清開靈注射液中綠原酸含量

周海燕，李 丹

(北京中醫藥大學藥廠，北京 101300)

清開靈注射液是臨床必備中藥注射劑之一，具有清熱解毒、化痰通絡、醒神開竅的功效，用于治療熱病神昏、中風偏癱、神志不清等癥。該品種由膽酸、豬去氧膽酸、水牛角粉、珍珠母粉、黃芩苷、金銀花、梔子及板藍根組成，被2005年版《中國藥典(一部)》收載[1]。金銀花與梔子藥材中均含有綠原酸，為全面控制產品質量，筆者用高效液相色譜法測定清開靈注射液中綠原酸含量，并擬訂了作為內控質量標準的含量限度。現報道如下。

1 儀器與試藥

Spectra physics型高效液相色譜儀;SP－UV2000型檢測器。綠原酸對照品(批號為110753－200413，中國藥品生物制品檢定所);清開靈注射液(批號分別為 912105A，912201A，912304A，912305A，912401A，912403A，913301A，913302A，913303A，913304A，北京中醫藥大學藥廠)，乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:Shimadzu －C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈 －0.4%磷酸溶液(13 ∶87);檢測波長:327 nm;流速:1.0 mL/min。

2.2 溶液制備

精密稱取綠原酸對照品適量，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每1 mL含41.4 μg的溶液，即得對照品溶液(10℃以下保存)。取清開靈注射液，直接濾過，即得供試品溶液。取缺金銀花、梔子的陰性樣品溶液，直接濾過，即得陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

專屬性考察:分別吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照品溶液，按上述色譜條件進樣檢測。結果對照品溶液、供試品溶液在相同保留時間處出現綠原酸的特征吸收峰，而陰性對照品溶液在相應位置上無干擾(圖1)。

線性關系考察:分別精密量取對照品溶液各 2，5，10，15，20 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積值。以綠原酸對照品進樣量(μg)對峰面積值進行回歸處理，得回歸方程 Y=2.0×106X－17 518，r=0.999 1(n=5)。結果表明，綠原酸進樣量與峰面積的線性關系范圍為 0.082 8 ～0.828 0 μg。

圖1 高效液相色譜圖

最低檢測限確定:取對照品溶液，用50%甲醇稀釋40倍，按上述色譜條件進樣10 μL，測定信噪比(S/N)=3，則確定綠原酸的最低檢測限為 0.01 μg。

精密度試驗:取對照品溶液，按上述色譜條件進樣10 μL，連續6次，測定峰面積值。結果的 RSD為0.31%(n=6)。

重復性試驗:取批號為912105A的清開靈注射液，直接濾過并進樣10 μL，平行試驗6份，測定綠原酸的含量。結果的 RSD為0.59%(n=6)。

穩定性試驗:取批號為912105A的清開靈注射液，直接濾過，分別在 0，2，4，6，8 h 時進樣 10 μL，測定峰面積值。結果的 RSD 為1.3%(n=5)。

加樣回收試驗:精密量取批號為913304A的清開靈注射液2.0mL，分別精密加入質量濃度為 47.6 μg/mL 的對照品溶液 0.5，1.0，1.5 mL，搖勻，直接濾過并進樣 10 μL，每個濃度平行試驗2份，測定含量，計算回收率。結果見表1。

表1 綠原酸加樣回收試驗結果(n=6)

2.4 樣品含量測定

取清開靈注射液10批，直接濾過，按上述色譜條件進樣10 μL，測定綠原酸的含量。結果批號為 912105A，912201A，912304A，912305A，912401A，912403A，913301A，913302A，913303A，913304A的10批清開靈注射液中，綠原酸含量分別為0.028，0.011，0.039，0.038，0.014，0.018，0.036，0.034，0.024 g/L。

3 討論

清開靈注射液處方中金銀花與梔子均含有綠原酸，本試驗用高效液相色譜法檢測清開靈注射液中綠原酸含量，樣品無須預處理，可直接濾過進樣，不但簡便、準確，而且在上述色譜條件下分離度好，可以快速檢測制劑質量。

金銀花含有揮發油、黃酮類、有機酸類、三萜皂苷類化合物，以及無機元素等，其中有機酸類化合物是主要有效成分[2]。綠原酸是金銀花所含有機酸類成分中的一種，并不能完全代表金銀花，也不是該藥材專有，但目前仍作為控制金銀花藥材質量的指標之一。綠原酸遇熱不穩定，因此在清開靈制備過程中，加熱會破壞綠原酸，導致成品中綠原酸的轉移率偏低。根據以上10批樣品的含量測定結果，擬訂本品每1 mL含綠原酸(C16H18O9)不得低于0.01 mg，此標準可作為清開靈注射液的內控質量標準。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業出版社，2005:610－612.

[2]武曉紅，田志勇，王 煥.金銀花的研究新進展[J].時珍國醫國藥，2005，16(12):1 303 － 1 304.